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国家重点基础研究发展计划(2007CB116308): 作品数：19 被引量：106H指数：9; 相关作者：何孔旺温立斌杨汉春郭容利潘群兴更多>>; 相关机构：江苏省农业科学院中国农业大学中华人民共和国农业部更多>>; 发文基金：国家重点基础研究发展计划江苏省自然科学基金江苏省博士后科研资助计划项目更多>>; 相关领域：农业科学轻工技术与工程生物学更多>>

类猪圆环病毒因子P2分子克隆体外的感染性: 在中国的猪血清中分离到一新因子,命名为P2.P2为闭合环状基因组,全长993个核苷酸。序列分析表明其与猪圆环病毒密切相关。随后对构建的P2因子分子克隆的体外感染性进行了研究。结果表明,在转染PK-15细胞后,只有P2因子...; 温立斌何孔旺杨汉春倪艳秀张雪寒郭容利潘群兴; 关键词：猪圆环病毒分子克隆; 文献传递

类猪圆环病毒2型因子P1与P2株全长基因组DNA分子克隆的构建被引量：22: 2007年; 依据类猪圆环病毒2型(PCV2)因子P1与P2株全基因组序列,设计1对引物,应用PCR技术扩增全基因组DNA片段,分别克隆到pMD18-T载体后,再克隆到pBluescript SK载体,获得两因子全长基因组单拷贝DNA分子克隆和双拷贝串联分子克隆。为进一步研究类PCV2因子P1与P2的感染性分子克隆和生物学特性奠定了基础。; 温立斌何孔旺杨汉春; 关键词：猪圆环病毒2型分子克隆

猪圆环病毒2型间接ELISA检测方法的建立被引量：4: 2007年; 根据GenBank中猪圆环病毒2型（PCV-2）ORF2基因序列设计特异性引物，进行PCR反应，回收PCR产物，将其克隆人pMD18-T载体，再定向克隆到表达载体pET-32a中并转化大肠杆菌Rosetta，进行原核表达。表达产物经His—Bind蛋白纯化试剂盒纯化，平均浓度为1．10mg／ml。以1．8μg／ml蛋白包被酶标板，建立ELISA检测方法。建立的ELISA方法与北京世纪元亨公司试剂盒比较，两者检测结果符合率达85％以上。用该方法对常州某猪场36份母猪和156份10～160日龄猪群血清样品进行了检测，检测结果显示母猪阳性率为81．4％，仔猪阳性率随着日龄的增加而逐渐降低，之后由于受PCV-2的感染，阳性率逐渐升高。本试验建立的ELISA方法，具有较好的特异性、莺复性和敏感性，可用于猪群PCV-2抗体的大规模检测。; 潘群兴何孔旺段治涛黄克和; 关键词：猪圆环病毒2型 ORF2基因

TUNEL法检测类猪圆环病毒2型因子P1诱导猪免疫器官细胞凋亡的研究: 目的:研究类猪圆环病毒2型因子P1体内诱导的细胞凋亡作用。方法:将P1分子克隆接种普通仔猪,用原位末端标记技术(TUNEL)检测猪的扁桃体、脾脏、腹股沟淋巴结等免疫器官细胞的凋亡情况。结果:猪感染P1后21天和35天的扁...; 温立斌何孔旺杨汉春; 关键词：猪圆环病毒2型 P1 TUNEL; 文献传递

类猪圆环病毒2型因子P1和P2诱导PK-15细胞凋亡的研究被引量：15: 2008年; 为了研究类猪圆环病毒2型因子P1和P2体外诱导的细胞凋亡作用,将P1和P2分子克隆分别转染PK-15细胞。结果表明,用透射电镜可以观察到P1和P2诱导PK-15细胞出现凋亡的典型形态学变化。; 温立斌何孔旺杨汉春王玉然李广东惠孝鑫; 关键词：猪圆环病毒2型细胞凋亡

白介素2基因与猪圆环病毒2型ORF2基因真核双表达质粒的构建被引量：3: 2009年; 应用基因重组技术,构建猪圆环病毒2型ORF2基因与白介素2基因(IL-2)的真核双表达载体并将其转染CHO细胞,通过RT-PCR、间接ELISA、Western-blot、间接免疫荧光检测(IFA)等方法验证基因的表达情况。结果表明:成功构建了猪圆环病毒2型ORF2基因和IL-2基因的真核双表达质粒pIRES-ORF2-IL-2,该质粒可在体外同时表达ORF2和IL-2。; 潘群兴何孔旺温立斌郭容利黄克和; 关键词：猪圆环病毒2型 ORF2基因 IL-2基因 DNA疫苗

类圆环病毒因子P1感染对猪外周血T淋巴细胞含量和增殖活性的影响被引量：4: 2009年; 探讨类猪圆环病毒因子P1感染对猪细胞免疫功能的影响。将12头30日龄广西巴马小型猪随机分成试验组和对照组,每组6头。在猪感染P1后第3,8,17,24,31和40天,采用血常规和单色流式细胞术分析猪外周血T淋巴细胞的含量,通过WST法对其增殖活性进行检测。P1感染组的T淋巴细胞数量(绝对数和相对数)整体趋势低于对照组,而两组的T淋巴细胞增殖活性没有显著差别。P1感染对机体的细胞免疫功能有一定程度的影响。; 温立斌何孔旺杨汉春郭容利钟书霖周俊明陈梦海; 关键词：广西巴马小型猪 T淋巴细胞计数

猪Th1/Th2型细胞因子重组质粒实时荧光定量PCR标准曲线的建立被引量：8: 2009年; 依据GenBank登录的猪Th1型细胞因子(IL-2、IL-12、IFN-γ)、Th2型细胞因子(IL-4、IL-6、IL-10)的核苷酸序列设计特异性引物,经RT-PCR技术从猪外周血单个核细胞中扩增和克隆了上述因子的101 bp核苷酸片段。测序鉴定后,将重组质粒10倍系列稀释后作为标准模板,通过实时荧光定量PCR方法,建立了它们各自的标准曲线及直线回归方程。结果表明,该方法具有线性关系好,特异性、敏感性、重复性高等特点,为猪体内IL-2、IL-12I、FN-γ、IL-4、IL-6和IL-10的mRNA水平的定量检测,提供了必要的技术手段。; 温立斌何孔旺杨汉春郭容利李成仁卢维彩贾付从; 关键词：TH1/TH2型细胞因子外周血单个核细胞重组质粒实时荧光定量PCR

两株猪圆环病毒2型病毒的分离鉴定及其序列分析被引量：1: 2009年; 利用PK15细胞从猪断奶后多系统衰竭综合征（PMWS）临床发病与死亡猪中分离到2株病毒；分别命名为Haian（登录号为FJ712216）和Xuancheng（登录号为FJ712215）。利用间接免疫荧光（IFA）和聚合酶链式反应（PCR）对其进行鉴定，并对其全基因组序列进行了测定和分析。结果表明，分离株感染细胞后病毒抗原主要分布在细胞核中，2分离株的基因组全长为1767nt，与世界上其他地区的PCV2分离株密切相关，核苷酸序列同源性达93．7％-97．7％，属于毒力较强的Genotype1。; 郭容利何孔旺钟书霖温立斌潘群兴; 关键词：猪圆环病毒2型

Taqman探针实时定量PCR检测猪伪狂犬病毒被引量：10: 2008年; 选取猪伪狂犬病毒(PRV)基因组中gE基因,设计特异性引物和Taqm an探针,利用实时定量PCR来定量检测PRV。利用PCR技术扩增猪伪狂犬病毒gE基因80 bp片段,并克隆到pMD18-T载体上,阳性重组质粒命名为pgE80。pgE80质粒进行10倍系列稀释,作为荧光PCR检测的标准模板,定量拷贝数,并绘制标准曲线。以提取的PRV、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪细小病毒(PPV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸障碍综合症病毒(PRRSV)和传染性胃肠炎病毒(TGEV)的DNA作为模板,进行特异性检测。该实时定量PCR方法,标准曲线斜率为-0.37,R2=0.992,可以检测到20个拷贝数。PRV能被扩增出S型荧光曲线,而其它病毒均未能扩出。用PRV强毒肌肉注射仔猪,定量PCR比普通PCR更能灵敏而特异地检出呼吸道排毒和血液带毒。建立的实时定量PCR方法可用于临床样品快捷、准确、方便地检测。; 张雪寒何孔旺缪文凯茅爱华俞正玉; 关键词：猪伪狂犬病毒实时定量PCR TAQMAN探针

国家重点基础研究发展计划(2007CB116308)