安徽省自然科学基金(080413136)
- 作品数：3 被引量：2H指数：1
- 相关作者：邓松华陈贻玲马传亮王锦红曹广文更多>>
- 相关机构：安徽医科大学第二军医大学安徽省立新安医院更多>>
- 发文基金：安徽省自然科学基金上海市科学技术委员会基础研究重点项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 肾癌T7噬菌体展示肽库构建的实验研究
- 2009年
- 目的：构建肾细胞癌T7噬菌体展示肽库,为下一步筛选肾癌早期诊断分子标志群打下基础。方法：用传统Trizol方法分别抽取31例涵盖各种组织类型肾癌组织标本的总RNA,确定完整性后再根据OD值等量混合总RNA,用试剂盒完成mRNA的分离并电泳检测其质量,经反转录、末端平齐、片段长短筛选、加接头、双酶切、去除多余接头和〈300 bp的cDNA片段等步骤,再与T7Select10-3b载体连接、体外包装并扩增得到肾癌T7噬菌体展示cDNA文库。通过铺平板测定和PCR技术鉴定所建文库质量。结果：建成原始文库的库容量为5.0×10^7pfu/mL,扩增后文库滴度为3.5×10^12pfu/mL,重组率为95%,插入片段为300-2 000 bp。结论：成功用T7噬菌体构建了高质量的肾癌cD-NA文库,为筛选可用于临床早期诊断的肾癌特异标志奠定基础。
- 陈贻玲吴玲玲赵晋丰曹广文邓松华
- 关键词：肾肿瘤肽库
- T7噬菌体展示文库筛选肺癌早期检测分子标志群被引量：2
- 2009年
- 目的从肺癌T7噬菌体展示文库筛选出能用于肺癌早期检测的分子标志群。方法亲和筛选肺癌T7噬菌体展示文库,对纯化后的富集肺癌相关肽的文库进一步行两轮ELISA检测,PCR扩增阳性噬菌体插入片段,测序后经过NCBI上的BLAST序列比对。结果筛选出13个有意义噬菌体,测序结果显示1个为未知功能的新基因,其余的均已确定与癌症相关;且13个基因中包含有三组相同的基因。结论从T7噬菌体构建的肺癌cDNA文库中筛选出的一组阳性噬菌体表达的抗原,可能是潜在的肺癌诊断分子标志群。
- 陈贻玲马传亮赵晋丰邓松华
- 关键词：肺癌
- HIV-1 HXB2株Tat半胱氨酸富集区N端移位突变体的构建及在大肠杆菌中的高效表达
- 2009年
- 目的构建HIV-1HXB2株Tat半胱氨酸富集区N端移位突变体,并在大肠杆菌E.coliBL21(DE3)中进行高效表达和纯化。方法应用PCR拼接的方法将首轮合成Tat基因的半胱氨酸富集区(64～111位核苷酸,22～37位氨基酸)移位至缺失半胱氨酸富集区的Tat(△C)的N末端,获得其突变体序列(Tat(CN)DNA),构建其原核表达质粒pET32a-Tat(CN),并转入大肠杆菌E.coli BL21(DE3)中进行诱导表达及纯化,经SDS-PAGE鉴定表达及纯化产物,纯化后的产物用间接ELISA进行鉴定。结果构建了pET32a-Tat(CN)突变体,pET32a-Tat(CN)融合蛋白在大肠杆菌中表达水平为5.17mg/ml,相对分子质量为31ku。间接的ELISA结果表明,pET32a-Tat(CN)能与Tat兔抗血清呈特异反应。结论成功构建了HIV-1 HXB2株Tat半胱氨酸富集区移位至TatN端的突变体,并能在大肠杆菌中高效表达,其纯化的蛋白pET32a-Tat(CN)很好地保留了与HIV-1Tat兔抗血清的免疫反应性,为HIV-1Tat的疫苗基础研究提供了一有价值的研究结论。
- 李存枚潘卫曹洁王锦红黄德圣庞强廖文婷邓松华
- 关键词：TAT
