上海市教育发展基金会“曙光计划”项目(04SG25)
- 作品数：8 被引量：15H指数：2
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- 相关机构：同济大学附属东方医院吉林大学第二医院吉林大学更多>>
- 发文基金：上海市教育发展基金会“曙光计划”项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- MyoD基因诱导大鼠成纤维细胞转化为成肌细胞的研究被引量：4
- 2007年
- 目的探讨MyoD在体外诱导大鼠成纤维细胞分化为成肌细胞中的作用。方法将大鼠成纤维细胞分成2组:未转染组(N组)和MyoD基因转染组(M组);利用慢病毒表达系统,将大鼠MyoD基因转入大鼠成纤维细胞中,Blasticidin筛选;用RT-PCR和Western blot检测MyoD的表达;免疫组织化学检测MyoD、desmin及-αactin的表达;电子显微镜观察转染前后细胞形态的变化。结果RT-PCR和Western blot可检测出MyoD基因转染后细胞表达MyoD mRNA及蛋白质;免疫细胞化学检测MyoD表达在基因转染的细胞中为阳性,desmin、α-actin阳性表达只出现在M组;电子显微镜观察转染后的细胞胞浆中有微丝以及微管等结构。结论MyoD基因可诱导大鼠成纤维细胞分化成的细胞具有成肌细胞特征,为进一步研究MyoD基因诱导的成肌细胞及在大鼠心梗损伤修复中的作用提供了实验基础。
- 范慧敏李阳卢蓉汪进益刘中民
- 关键词：成纤维细胞
- 肌肉转录调节因子和连接蛋白43转基因成纤维细胞移植对心肌梗死大鼠脑钠素及梗死面积的影响
- 2008年
- 背景:研究表明基因工程将成纤维细胞改造为可兴奋细胞是可能的;而真皮成纤维细胞是机体内数量最大的"种子细胞库"。目的:观察肌肉转录调节因子(myogenic determination,MyoD)和连接蛋白43(connexin43,Cx43)基因共转染真皮成纤维细胞后在心肌梗死部位原位移植对急性心肌梗死大鼠血浆脑钠素浓度和心肌梗死面积的影响。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2006-06/2007-03在同济大学附属东方医院细胞治疗室和上海中医药大学动物实验中心完成。材料:雄性SD大鼠60只随机分成正常对照组、心肌梗死对照组、正常移植组和心肌梗死移植组,每组15只。方法:结扎左冠状动脉前降支制备心肌梗死模型。4周后再次开胸在自结扎远端紧靠结扎处,心肌梗死区与非梗死区交界处用微量注射器将100μL经BrdU标记的MyoD/Cx43-FB细胞悬液(细胞数1.0×106)注入左冠状动脉前降支,在结扎远端已缺血的心肌上用同样的针头于靠近心尖部、室间隔部、左室前侧壁缺血的心肌上多点多位置将另外100μL移植细胞悬液注入到心肌内,深度约4mm;对照组同法等量注入未含细胞的DMEM细胞培养液。主要观察指标:细胞移植前和移植后1d,1,2,4周动态检测血浆脑钠素浓度;同时监测各组大鼠心率、动脉压、左心室内压及左心室等容收缩期室内压最大上升速率和下降速率等血流动力学指标的变化;4周后处死大鼠取心肌标本染色后测定心肌梗死面积。结果:①免疫组织化学检测结果显示心肌瘢痕区边缘有BrdU阳性细胞存在。②细胞移植可显著改善心肌梗死大鼠的血流动力学。③心肌梗死对照组和心肌梗死移植组大鼠的血浆脑钠素浓度较正常对照组和正常移植组明显升高(P<0.01);在移植后1d、1周、2周心肌梗死移植组与心肌梗死对照组血浆脑钠素浓度差异无显著性意义,4周后明显降低(P<0.01)。④心肌梗死移植组�
- 汪进益范慧敏卢蓉张旭敏马亮李杨刘中民
- 关键词：CX43基因心肌梗死脑钠素心肌梗死面积
- 生肌调节因子和连接蛋白43基因诱导大鼠成纤维细胞分化为肌细胞实验研究
- 2008年
- 目的探讨转染生肌调节因子(myoblast determination,MyoD)基因和连接蛋白43(Connexin,Cx43)基因的大鼠真皮成纤维细胞(der-mal fibroblast,DFs)生物学功能的变化及MyoD和Cx43基因转染DFs细胞治疗心力衰竭的可行性。方法采用Gateway技术,构建真核质粒表达载体,利用慢病毒(LV)表达系统,将大鼠MyoD cDNA和Cx43cDNA转入大鼠成纤维细胞中,经Blasticidin筛选培养,通过RT-PCR,Western印迹法等方法检测MyoD及Cx43蛋白及mRNA表达情况,并且通过显微镜观察转染后生长情况,膜片钳技术检测离子电流变化。结果RT-PCR,Western印迹法检测出MyoD及Cx43蛋白及相应mRNA表达,膜片钳检测到转染后钙离子电流,显微镜观察到基因转染筛选后培养1w细胞的融合现象,并有多核肌管形成。结论MyoD和Cx43基因转染使DFs分化为成肌细胞,为进一步研究基因治疗心力衰竭奠定基础。
- 张旭敏李淑梅范慧敏刘中民张文杰汪进益
- 关键词：连接蛋白43基因转染成纤维细胞心力衰竭
- 脑钠素和心电图评价细胞移植治疗急性心肌梗死的实验研究被引量：2
- 2008年
- 目的探讨肌肉转录调节因子(myogenic determination,MyoD)基因和连接蛋白43(connexin 43,Cx43)基因体外共转染大鼠皮肤真皮成纤维细胞(dermal fibroblasts,DFs)后在心肌梗死部位原位移植修复梗死心肌组织的近期疗效及其安全性。方法60只SD雄性大鼠随机分成4组(n=15)。正常对照组:取100μl细胞培养液基质植入到正常心肌组织中;心梗对照组:取等量细胞培养液基质植入到心肌梗死大鼠瘢痕组织中;正常移植组:在正常心肌组织中植入等量用5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)标记经MyoD和Cx43基因联合转染DFs细胞悬液;心梗移植组:在心梗后瘢痕组织中植入等量同样的细胞悬液,细胞密度均为2.0×106/ml。在细胞移植前、移植后4周内动态监测心电图和血浆脑钠肽(B-type natriuretic peptide,BNP)水平的变化。结果心梗对照组和心梗移植组血浆BNP浓度较正常对照组和正常移植组明显升高(P<0.01);心梗移植组较心梗对照组血浆BNP浓度在术后1 d、1周及2周无差异,在4周后明显降低(P<0.01)。心梗大鼠Ⅱ导联心电图的QRS波增宽,ST段、T波抬高;细胞移植早期ST段、T波快速回落,2周内回落大于50%;4周后正常移植组和心梗移植组大鼠均未见致命性心律失常,且心梗移植组与心梗对照组(或移植前)相比QRS波变窄,R波相对升高,ST段回到基线。结论用MyoD和Cx43基因转染DFs后原位心肌移植,可以降低血浆BNP水平和改善心电图,两者的动态监测为评价细胞移植治疗急性心梗提供了有效实用的方法。
- 汪进益范慧敏刘中民张旭敏马亮李杨
- 关键词：脑钠素心电图急性心肌梗死细胞移植
- 大鼠心肌成纤维细胞体外培养的生物学特性及转基因研究被引量：2
- 2008年
- 目的观察大鼠心肌成纤维细胞（CFs）体外培养的生长增殖情况及肌肉转录调节因子（MyoD）基因转染对其生物学特性的影响。方法采用改良的差速贴壁法培养大鼠CFs，利用携带MyoD cDNA的真核表达载体pLenti6／V5-DEST-MyoD转导培养的大鼠CFs，用稻瘟菌素筛选2周，挑选转基因单克隆细胞，传代培养，进行细胞形态观察、生长曲线以及细胞免疫化学鉴定。结果成功建立高纯度大鼠CFs的细胞培养模型，且具有良好的细胞形态、正常的生长增殖等生物学功能。转染细胞的MyoD cDNA基因表达阳性，其下游抗α-肌动蛋白（α-actin）呈阳性表达，胞质呈棕黄色，并且含有与细胞纵轴平行排列的肌丝，细胞核用苏木素复染后呈淡蓝色。在2．0×10^5／mL细胞密度的CFs接受转MyoD基因后，抗α-actin阳性率为（27．04±9．41）％。结论真核表达载体成功介导MyoD cDNA转导入体外培养的大鼠CFs，诱导其转化为具有潜在功能的类骨骼肌细胞，CFs可成为心血管疾病基因治疗的靶细胞。
- 汪进益范慧敏刘中民卢蓉马亮李杨
- 关键词：心肌成纤维细胞细胞培养转基因靶细胞
- 细胞移植研究用大鼠心肌梗死动物模型的建立被引量：7
- 2007年
- 目的探索大鼠左冠状动脉前降支(LAD)结扎处理的适宜方法,建立适合细胞移植研究的稳定、可靠的急性心肌梗死(AMI)动物模型。方法14只SD大鼠麻醉满意后,在动物呼吸机的支持下打开胸腔,于LAD中上1/3处结扎,并在结扎前后通过多外围设备转接器(MPA)生物信号分析系统连续监测心电图;4周后再次开胸取出心脏,利用Langendorff离体心脏灌流MPA系统检测左室收缩压(LVSP)左室舒张末压(LVEDP)左心室内压力上升及下降的最大变化速率(±dp/dtmax)等左室心功能指标:并测定心肌组织病理形态学、心肌梗死面积(MIS)等评价AMI模型的建立情况。另选仅开、关胸后存活的10只大鼠作为对照组。结果造模成功率为71.43%(10/14);心电图动态监测在LAD结扎后出现ST-T抬高的融合波,30min后可见Q波;4周后Langendorff离体心脏灌流MPA系统检测显示LVSP、±dp/dtmax等指标较对照组显著降低,LVEDP则明显升高(P<0.01);病理组织切片可见结扎区域心肌纤维排列紊乱、肌丝断裂溶解、细胞核固缩甚至碎裂、间质充血水肿、有炎性细胞浸润、坏死心肌被纤维组织取代:且MIS变化较恒定(44.38%±8.04%)。结论通过结扎LAD,于4周后能够形成梗死部位和MIS稳定的AMI模型,适合于移植细胞再生修复梗死心肌的研究。
- 汪进益范慧敏刘中民符雪莲王军臣赵曙光孔祥卢伟
- 关键词：心肌梗塞细胞移植心肌梗死面积心功能
- 大鼠真皮成纤维细胞肌肉转录调节因子基因转染后生物学特性观察
- 2008年
- 背景：利用转基因技术诱导皮肤真皮成纤维细胞分化为特殊器官组织功能的前驱细胞具有重要意义。目的：观察肌肉转录调节因子（myogenic determination，MyoD）基因转染对大鼠真皮成纤维细胞生物学特性的影响。设计、时间及地点：单一样本观察，细胞基因工程学实验，于2005-01／2007—02在同济大学附属东方医院心胸外科和细胞治疗室完成。材料：清洁级雄性SD大鼠6只，购自上海西普尔．必凯实验动物有限公司。Ⅱ型胶原蛋白酶为GIBCO公司产品，稻瘟菌素粉剂为美国Promega公司产品，慢病毒载体pLenti6／V5-DEST为Invitrogen公司产品，BrdU为美国Sigma公司产品。方法：无菌条件下切取大鼠腹侧全层皮肤，采用200IU／mL的Ⅱ型胶原蛋白酶在4℃下解离大鼠皮肤真皮组织，组织块培养法获取贴壁的真皮成纤维细胞，待生长近融合状态时传代扩增。取传至第3-6代细胞，利用携带MyoD cDNA的真核表达载体pLenti6／V5-DEST-MyoD进行转染，经终浓度为50mg／L稻瘟菌素筛选后，挑选转基因单克隆细胞传代培养，向细胞培养液中加入10μmol／L BrdU于37℃条件下孵育48h。主要观察指标：细胞形态学观察，免疫细胞化学染色鉴定，体外BrdU标记情况。结果：体外分离培养的真皮成纤维细胞纯度高，形态良好，生长增殖功能正常，转染后经稻瘟菌素筛选2周即可见克隆形成。光镜下真皮成纤维细胞免疫细胞化学染色后波形蛋白呈阳性表达，转染MyoD基因后肌动蛋白亦呈阳性表达。10μmol／LBrdU孵育48h的标记率〉98％，且连续传代5次后仍可检测到BrdU阳性细胞。结论：真核表达载体成功介导MyoD基因转染体外分离培养的大鼠真皮成纤维细胞，并诱导其转化为具有潜在功能的类骨骼肌细胞，可在体外稳定生长扩增。
- 汪进益范慧敏卢蓉马亮李杨刘中民
- 关键词：真皮成纤维细胞转基因靶细胞
- 细胞性心肌成形术的基础与临床研究
- 2008年
- 目前,以培养的收缩性体细胞作为"补片"种植于受损心肌疤痕组织中进行心肌重建的细胞性心肌成形术被认为是一种很有前景的治疗手段。
- 汪进益范慧敏刘中民
- 关键词：缺血性心脏病
