高等学校骨干教师资助计划(20002349)
- 作品数：22 被引量：116H指数：7
- 相关作者：张成陈松林黄文张为西姚晓黎更多>>
- 相关机构：中山大学附属第一医院四川大学中山大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金高等学校骨干教师资助计划广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 成肌细胞培养的重复肌块法被引量：3
- 2002年
- 【目的】改进体外成肌细胞培养方法。【方法】取 2 0只小鼠分 4组 ,取股骨肌用肌块法进行成肌细胞原代培养 ,并重复利用肌块 6次。对培养的成肌细胞进行生长状态观察及免疫的组化鉴定。【结果】重复 6次使用肌块培养的成肌细胞生长、分化良好 ;一次差速贴壁纯化后 ,经免疫组化方法鉴定 ,96 %以上的细胞呈肌细胞特异抗体阳性反应。【结论】重复肌块法培养成肌细胞 ,省略了重复组织获取、消化等烦琐步骤 ,培养效率明显提高 。
- 陈松林张为西刘晓蓉张成
- 关键词：成肌细胞细胞培养
- 骨髓间充质干细胞移植治疗脑梗死的研究现状被引量：2
- 2005年
- 黄文张成
- 关键词：骨髓间充质干细胞移植脑梗死骨髓问充质干细胞中胚层多向分化造血
- 应用多个微卫星DNA位点进行Duchenne/Becker肌营养不良症携带者的检测被引量：13
- 2004年
- 目的 筛查和确定 Duchenne/ Becker肌营养不良症 ( Duchenne/ Becker muscular dystrophy,DMD/ BMD)家系的女性成员中的致病基因携带者与正常者 ,为进一步行产前诊断或植入前遗传学诊断提供信息。方法 用 PCR方法对 dystrophin基因第 4 4、4 5、4 9和 5 0内含子以及 5′DMD 的短串联重复序列( short tandem repeats,STR)扩增 ,然后进行基因扫描、软件分析 ,对 4个 DMD/ BMD家系中 2 7个成员的这 5个微卫星 DNA位点的多态性进行连锁分析。结果 在 4个家系 17名女性成员中 (有 1例女性 DMD患者 ) ,系谱和 STR多态性分析结果均符合的 DMD基因肯定携带者有 6名 ;单纯根据 STR多态性连锁分析结果确诊为 DMD基因携带者的女性成员有 5名 ,确诊为正常女性成员有 5名。在这 5个 STR位点中 ,最具多态性的位点是 STR- 4 9,多态性最少的位点是 STR- 5 0。结论 短串联重复序列多态性结合基因扫描能快速、准确、客观地检出 Duchenne/
- 黄文张成谢有梅陈松林张为西卢锡林姚晓黎曾缨
- 关键词：携带者短串联重复序列多态性基因诊断
- 骨髓干细胞移植改善dystrophin^(-/-)/utrophin^(-/-)鼠运动功能被引量：10
- 2003年
- 目的 研究骨髓干细胞移植治疗Duchenne型肌营养不良鼠(dystrophin/utrophin gene double knock-outmice,dko鼠)的运动功能改善情况。方法 获取4～5周龄C57BL/6鼠的骨髓干细胞,体外培养3 d,以1.0×10~7/只静脉移植到经7Gy γ射线预处理的dko鼠(7～8周龄)。8～9周后,检测移植鼠运动功能、肌电图及肌肉组织dystrophin蛋白表达情况。结果 骨髓干细胞移植8～9周后,11只dko鼠牵引运动坠落次数为(3.09±2.47)次,与对照组(非移植组)dko鼠(16.78±3.6)次比较,有显著性差异;肌电图指标中,动作电位时限和最大收缩电位波幅分别为(4.99±1.62)ms,和(2872±1474.33)μV,与对照组(3.69±0.40)ms和(1210.00±551.00)μV比较,有显著改善;其肌肉组织有7％肌纤维表达了dystrophin蛋白。结论 静脉移植同种、同系鼠骨髓干细胞后,dko鼠的运动功能、电生理有了显著改善;其部分骨骼肌细胞有缺失蛋白的表达。提示干细胞移植治疗DMD有较理想的前景。
- 张成陈松林刘晓蓉黄文张为西卢锡林
- 关键词：肌营养不良症骨髓干细胞移植蛋白表达
- Utrophin+/-mdx鼠子代的基因型鉴定被引量：2
- 2003年
- [目的]对utrophin基因+/-mdx鼠(简称杂合子鼠)的子代进行基因鉴定。[方法]从杂合子鼠子代鼠尾提取DNA,对其正常和异常的utrophin基因片段扩增,电泳后观察结果。[结果]27只杂合子鼠子代鼠中,鉴定出7只mdx、14只杂合子、6只dystrophin/utrophin基因双敲除鼠,依次约占总数的1/4、1/2和1/4。[结论]本实验方法能够精确鉴定出mdx、杂合子和dko鼠,为DMD进一步的实验研究提供了有效的手段。
- 陈松林张成刘晓蓉张为西卢锡林黄文
- 关键词：基因鉴定肌营养不良症DMD
- 体外培养大鼠骨髓间质干细胞的超微结构被引量：3
- 2003年
- [目的]研究体外培养大鼠骨髓间质干细胞的超微结构。[方法]采用常规技术对SD鼠骨髓间质干细胞进行体外培养传代、鉴定、诱导分化和透射电镜分析。[结果]流式细胞仪检测,细胞表达CD29和CD44,不表达CD11b和CD45;经5-氮杂胞苷和两性霉素B诱导分化后结蛋白和肌球蛋白染色阳性。透射电镜观察有巨噬样、内皮样和成纤维样三类基本细胞,巨噬样细胞表面有胞质突起,胞浆含电子密度高的结晶样包涵体;内皮样细胞靠胞膜边有吞饮小泡,胞浆中有电子密度高的内皮特殊小体;成纤维样细胞呈梭形,较幼稚,细胞器简单,有丰富的糖原和核糖体;经诱导分化的肌样细胞胞浆靠胞膜缘可见无细胞器的条状肌丝区带;细胞间存在胞膜局部紧密连接和胞质突起接合。[结论]传代贴壁生长的为骨髓间质干细胞;超微结构分析显示早期幼稚细胞发育的特征,但各有特点;在不同培养条件诱导下,细胞具备向肌肉和脂肪组织分化的潜能。本研究为进一步了解和掌握骨髓间质干细胞的生物学特性和临床应用打下基础。
- 李善宗张成吴金浪肖庆忠陈国俊李树浓
- 关键词：体外培养骨髓间质干细胞超微结构流式细胞仪动物实验
- 脑源性神经营养因子体外诱导骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞被引量：17
- 2004年
- 目的探讨脑源性神经营养因子(BDNF)体外诱导骨髓间充质干细胞(MSCs)分化成神经元样细胞的作用及其对诱导后的神经元样细胞保护作用,为治疗神经系统疾病提供更优良的细胞。方法体外培养MSCs至第5代后,分别用BDNF、β-巯基乙醇(β-ME)诱导MSCs,诱导后的第1、3和6小时计算两组神经元样细胞数,对各时间点两组神经元样细胞阳性率进行了比较;诱导后行神经细胞标记抗体的免疫细胞化学、RT-PCR及蛋白质印迹鉴定。结果两组诱导剂诱导后的细胞均呈神经元样细胞的形态;BDNF组诱导分化后细胞的存活时间远较β-ME组长;BDNF组在诱导后6h近于诱导高峰,而β-ME在诱导2h即达高峰,但随后神经元样细胞渐死亡。免疫细胞化学结果显示在两组诱导后细胞的巢蛋白(Nestin)、神经细胞特异性烯醇化酶(NSE)、微管相关蛋白-2(MAP-2)、神经丝蛋白(NF)表达均呈阳性,而胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达呈阴性;RT-PCR显示NSE、NFL,MAP-2的mRNA表达阳性,GFAP有较弱的表达;蛋白质印迹可见两组诱导剂诱导的细胞均表达神经元的特异性标记抗体NSE。结论BDNF能单独诱导MSCs分化形成神经元样细胞,而且分化后细胞的存活时间长,有望用于治疗脑缺血、神经变性等疾病。
- 黄文张成陈松林张为西姚晓黎曾缨黄慧冯善伟柳太云
- 关键词：骨髓间充质干细胞脑源性神经营养因子神经元诱导分化
- 骨髓干细胞移植治疗Duchenne型肌营养不良鼠的实验研究被引量：6
- 2003年
- 目的 研究骨髓干细胞移植治疗Duchenne型肌营养不良鼠 (mdx鼠 )的效果。方法 取 4～ 5周龄昆明鼠骨髓干细胞 ,体外培养 3d ,静脉移植到 7Gyγ射线预处理 7～ 8周龄mdx鼠体内。临床监测受体鼠移植物抗宿主病 (GVHD)表现 ,并对移植 12周mdx鼠的运动功能、肌电生理、dystrophin蛋白表达情况进行检测。 结果 5只 7Gy剂量放疗mdx鼠 ,静脉移植 4 8× 10 6骨髓干细胞 ,3个月后 ,肌电图指标有了部分改善 ;10 %肌纤维表达了dystrophin蛋白。结论 静脉移植同种非同系鼠骨髓干细胞治疗mdx鼠有效 ,显示骨髓干细胞移植治疗DMD有着理想的前景。
- 陈松林张成黄文张为西刘晓蓉李群卢锡林
- 关键词：骨髓干细胞移植DUCHENNE型肌营养不良肌电生理DYSTROPHIN蛋白
- BDNF诱导骨髓间质干细胞分化中神经元特异性蛋白表达与细胞凋亡的关系被引量：3
- 2006年
- 目的:探讨脑源性神经营养因子(BDNF)体外诱导骨髓间质干细胞(MSCs)分化中神经元特异性蛋白表达与细胞凋亡的关系。方法:分别用BDNF和β-巯基乙醇(β-ME)诱导MSCs分化为神经元样细胞,在诱导1h、6h、12h及24h后用蛋白质印迹法检测神经元特异性蛋白(nestin、NSE、MAP-2及GFAP)的表达,同时用流式细胞仪检测各时点的细胞生长周期及细胞凋亡。结果:蛋白质印迹法结果显示β-ME和BDNF诱导的细胞均能表达神经元特异性蛋白:nestin和NSE,不表达MAP-2;神经胶质细胞特异性蛋白GFAP也有较弱表达。β-ME组诱导12h后nestin的表达转为阴性,NSE表达也减弱,而BDNF组直至24h nestin和NSE表达才渐转阴性;BDNF诱导的细胞S期百分率均较同时点的β-ME组高,β-ME在诱导后12h出现了凋亡峰,BDNF诱导组在观察的时点内均未出现凋亡峰。结论:β-ME诱导细胞的神经元特异性蛋白表达的减少与细胞凋亡在时间上一致,说明分化后细胞死亡的原因可能与凋亡有关;而BDNF诱导细胞的蛋白表达减少与细胞凋亡无关,提示BDNF诱导分化后的细胞死亡可能还与其它因素有关或者BDNF可能有抗凋亡作用。
- 黄文张成陈松林张为西冯善伟柳太云姚晓黎曾樱
- 关键词：骨髓间质干细胞细胞分化细胞凋亡
- 亚致死量放疗对Duchenne型肌营养不良鼠骨髓干细胞移植的影响被引量：5
- 2003年
- [目的]研究7 Gy γ射线放疗对Duchenne型肌营养不良鼠(mdx鼠)骨髓干细胞移植的效果.[方法]获取4～5周昆明鼠的骨髓干细胞,体外培养3 d,移植给7 Gy剂量放疗的7～8周的mdx鼠.22只7 Gy剂量放疗的肌营养不良鼠鼠,随机分为A、B、C、D 4组;A、B、C每组6只,静脉移植骨髓干细胞数为A组:1.2×106/只、B组4.8×106/只、C组1.2×107/只.D组4只作空白移植对照.观察受体鼠存活率,临床监测移植物抗宿主病(GVHD)情况;移植12周后,检测受体鼠肌组织抗肌萎缩蛋白表达情况.[结果]移植3个月后,22只实验鼠全部存活,18只移植鼠有近9%肌纤维表达dystrophin蛋白.[结论]移植前给予7 Gy γ射线放疗照射mdx鼠,部分破坏受体骨髓造血系统后,静脉注射移植同种、非同系鼠的骨髓干细胞,3个月之后,受照射鼠实现了100%存活;且移植鼠均有抗肌萎缩蛋白表达.
- 陈松林张成黄文梁银杏张为西卢锡林
- 关键词：肌营养不良症MDX鼠骨髓干细胞移植
