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携带表皮生长因子受体反义cDNA的重组腺病毒的构建被引量：1: 2006年; 目的构建携带参与细胞周期调控的表皮生长因子受体(EGFR)反义cDNA的重组腺病毒载体。方法将1032 bp EGFR反义cDNA片段正向及反向插入腺病毒载体质粒pA dT rack-CM V上,与骨架质粒在大肠杆菌B J5183胞内进行同源重组,经293细胞包装、扩增后得到携带EGFR反义cDNA的重组腺病毒A dE asy-GFP-EGFR-sense/an tisense。结果成功地构建了A dE asy-GFP-EGFR-sense/an tisense的重组腺病毒载体系统,经测定腺病毒载体滴度分别2.2×109efu/mL和2.5×109efu/mL。结论构建的重组腺病毒A dE asy-GFP-EGFR-an t-isense可望有效地将EGFR-an tisense cDNA基因导入喉癌细胞株/组织内,为进一步研究喉癌细胞信号转导干预机制和治疗研究提供实验基础。; 鲜均明周光耀梁传余刘世喜; 关键词：细胞信号转导干预治疗重组腺病毒喉癌

p16β基因重组腺病毒质粒的构建及对喉癌细胞的作用被引量：1: 2006年; 目的探讨野生型p16β对体外喉癌H ep-2细胞周期信号传导的干预作用。方法以重组腺病毒为载体,构建p 16β的重组腺病毒A dE asy-GFP-p 16β质粒,并在293细胞中包装、纯化。将已纯化的重组腺病毒A dE asy-GFP-p 16β在体外转染H ep-2喉癌细胞,采用M TT实验、流式细胞术(FCM)、免疫组化、W estern b lot等实验手段检测H ep-2细胞的抑制/杀伤作用及其细胞周期信号、DNA含量、细胞凋亡率的变化;检测P 16蛋白的表达和H ep-2细胞的超微结构变化。结果本研究成功地构建和制备了高滴度的A dE asy-GFP-p 16β重组腺病毒,并高效地转移到H ep-2细胞内和表达P 16蛋白,有效地抑制了H ep-2细胞的生长。被转染的H ep-2细胞被有效地阻滞在G 0/G 1期,提高了转染细胞的凋亡率。结论重组腺病毒A dE asy-GFP-p 16β能高效感染H ep-2细胞,表达P 16蛋白;有效抑制H ep-2细胞增殖;干预H ep-2细胞周期的信号传导机制和细胞周期,诱导凋亡,从而抑制肿瘤细胞增殖活性。; 范敏鲜均明周光耀梁传余刘世喜; 关键词：喉癌重组腺病毒

携带细胞周期调控基因p14^(ARF)的重组腺病毒的构建: 2006年; 目的构建携带参与细胞周期调控的p14ARF基因的重组腺病毒载体。方法将野生型p14ARF全长cDNA基因片段插入腺病毒载体质粒pAdTrack-CMV,与骨架质粒在大肠杆菌BJ5183胞内进行同源重组,经293细胞包装、扩增后得到携带p14ARF的重组腺病毒AdEasy-GFP-p14ARF。结果成功构建了AdEasy-GFP-p14ARF的重组腺病毒载体系统,经测定腺病毒载体滴度达2.3×109efu/mL。结论构建的重组腺病毒AdEasy-GFP-p14ARF可望有效地将p14ARF基因导入喉癌细胞株/组织内,为进一步研究喉癌细胞信号转导干预治疗机制提供实验基础。; 鲜均明周光耀梁传余刘世喜; 关键词：细胞信号转导重组腺病毒喉癌

表皮生长因子受体反义cDNA干预喉癌细胞信号转导的实验研究被引量：1: 2007年; 目的探讨表皮生长因子受体(EGFR)反义cDNA在体外对人喉癌Hep-2细胞信号转导的干预作用。方法以缺陷重组腺病毒为载体,构建EGFR正、反义cDNA的重组腺病毒,并在人胚肾母细胞(HEK293)中包装、纯化。将已纯化的EGFR cDNA重组腺病毒在体外转染人Hep-2喉癌细胞,采用MTT法检测重组腺病毒对Hep-2细胞的生长抑制作用、流式细胞术检测细胞周期DNA表达的变化、Western blot方法检测Hep-2细胞内EGFR蛋白的表达。结果成功地构建并制备了高滴度的EGFR cDNA 1 032 bp片段的正、反义重组腺病毒。同时,它们能被高效地转移到Hep-2细胞内,其中反义重组腺病毒能够抑制Hep-2细胞的增殖和EGFR蛋白的表达。结论EGFR反义cDNA能有效地干预人喉癌Hep-2细胞的细胞周期信号转导机制,从而抑制肿瘤细胞的增殖。; 鲜均明周光耀梁传余刘世喜; 关键词：表皮生长因子受体信号转导喉癌

EGFR反义cDNA联合p16β干预喉癌细胞信号转导的实验研究: 2007年; 目的探讨表皮生长因子受体(EGFR)反义cDNA联合野生型p16β在体外对人喉癌Hep-2细胞信号转导的干预作用。方法将已纯化的EGFR反义cDNA重组腺病毒和p16β在体外转染Hep-2喉癌细胞,采用MTT实验、流式细胞术(FCM)、免疫组化、Westernblot等方法检测Hep-2细胞增殖抑制作用;进行细胞周期、DNA含量、细胞凋亡率的定量分析;检测重组腺病毒对Hep-2细胞EGFR蛋白表达的抑制和p16β蛋白过表达。结果反义EGFRmRNA表达重组腺病毒能有效抑制Hep-2细胞的增殖活性;超过77.7%以上的被转染Hep-2细胞被阻滞在G0/G1期;转染细胞的凋亡率升高;同时出现EGFR蛋白表达的抑制和p16β蛋白的过表达。当p16β重组腺病毒和EGFR反义cDNA重组腺病毒联合转染Hep-2细胞后其抑制Hep-2细胞增殖活性、细胞周期阻滞、抑制细胞调亡作用明细增强。结论p16β和EGFR反义cDNA能有效地干预人喉癌Hep-2细胞的信号转导机制,从而达到抑制Hep-2细胞增殖、诱导细胞凋亡的作用。; 鲜均明周光耀梁传余刘世喜; 关键词：表皮生长因子受体重组腺病毒喉癌

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四川省青年科技基金(04ZQ026-024)