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博士科研启动基金(9907)

作品数:5 被引量:31H指数:2
相关作者:梁念慈刘新光陈小文梁景耀马涧泉更多>>
相关机构:广东医学院中山医科大学更多>>
发文基金:博士科研启动基金广东省卫生厅资助课题广东省自然科学基金更多>>
相关领域:生物学医药卫生更多>>

文献类型

  • 5篇中文期刊文章

领域

  • 3篇生物学
  • 3篇医药卫生

主题

  • 3篇蛋白
  • 3篇蛋白激酶
  • 3篇重组蛋白
  • 3篇激酶
  • 2篇蛋白激酶CK...
  • 2篇克隆
  • 2篇TYRPHO...
  • 1篇蛋白激酶抑制...
  • 1篇亚基
  • 1篇抑制动力学
  • 1篇抑制剂
  • 1篇英文
  • 1篇制剂
  • 1篇全酶
  • 1篇酶动力学
  • 1篇酶抑制剂
  • 1篇酪氨酸
  • 1篇酪氨酸蛋白激...
  • 1篇酪氨酸蛋白激...
  • 1篇激酶抑制剂

机构

  • 5篇广东医学院
  • 1篇中山医科大学

作者

  • 5篇刘新光
  • 5篇梁念慈
  • 2篇陈小文
  • 1篇马涧泉
  • 1篇梁景耀

传媒

  • 2篇中国生物化学...
  • 1篇中国药科大学...
  • 1篇实用癌症杂志
  • 1篇中国药理学与...

年份

  • 1篇2004
  • 3篇2002
  • 1篇2001
5 条 记 录,以下是 1-5
排序方式:
酪氨酸蛋白激酶抑制剂Tyrphostin AG114对重组人蛋白激酶CK2全酶的抑制作用(英文)被引量:2
2002年
目的 为了观察TyrphostinAG114对重组人蛋白激酶CK2全酶的直接作用及其酶动力学机理。方法 利用基因工程克隆 ,表达和纯化获得重组人蛋白激酶CK2α和 β亚基 ,在体外等摩尔数混合构成有最大生物活性的重组CK2全酶 ,在不同条件下测定CK2的活性。CK2活性通过测定转移到CK2底物上的 [γ 32 P]ATP或 [γ 32 P]GTP的 [32 P]放射活度来检测。结果 重组人CK2是一种Ca2 +、cAMP和cGMP等第二信使非依赖性蛋白激酶 ,与天然CK2的性质一致。AG114对重组人CK2全酶具有很强的抑制作用 ,IC50 为 2 0 .8μmol·L- 1,抑制强度介于已知CK2抑制剂 5 ,6 二氯 1 β 呋喃糖苯并咪唑 (DRB)和N (2 氨乙基 ) 5 氯萘 1 硫胺 (A3)之间。AG114对重组人CK2的动力学研究表明 :它与GTP呈混合竞争性抑制作用 ,与酪蛋白呈非竞争性抑制作用。结论 AG114不仅是酪氨酸蛋白激酶的抑制剂 ,而且是一种十分有效的蛋白激酶CK2的抑制剂。
刘新光梁念慈
关键词:酪氨酸蛋白激酶抑制剂TYRPHOSTIN
Tyrphostin AG213对重组人蛋白激酶CK2全酶的抑制动力学被引量:3
2002年
利用基因工程克隆、表达和纯化获得重组人蛋白激酶CK2α和 β亚基 ,在体外等摩尔数混合构成有最大生物活性的重组人CK2全酶 .以重组人CK2全酶为分子靶点 ,研究tyrphostinAG2 13对该全酶的直接作用及其抑制动力学 .通过测定转移到CK2底物上的 [γ 3 2 P]GTP的 [3 2 P]放射活度 ,检测CK2活性 .结果表明 :重组人CK2是一种Ca2 + 、cAMP和cGMP等第二信使非依赖性蛋白激酶 ,与天然CK2的性质一致 .AG2 13对重组人CK2全酶具有很强的抑制作用 ,IC50 为 1 1μmol L ,抑制作用远大于已知CK2的抑制剂 5 ,6 二氯 1 β 呋喃糖苯并咪唑 (DRB)和N (2 氨乙基 ) 5 氯萘 1 硫胺 (A3) .AG2 13对重组人CK2全酶的动力学研究表明 :它与GTP呈现非竞争 竞争性混合型抑制作用 ,抑制常数Ki 和Ki′值分别为 0 6 μmol L与 1 4 μmol L ;与酪蛋白呈非竞争性抑制作用 ,Ki 值为 0 9μmol L .结果说明 ,tyrphostinAG2 13不仅是酪氨酸蛋白激酶的抑制剂 ,而且是一种十分有效的蛋白激酶CK2的抑制剂 .重组人蛋白激酶CK2可作为一种较为简便筛选和开发有效的CK2抑制剂的分子靶点 .
刘新光梁念慈马涧泉
关键词:蛋白激酶CK2全酶抑制动力学重组蛋白
人蛋白激酶CK2α′亚基在大肠杆菌中的克隆、表达及其重组蛋白的纯化与性质鉴定被引量:25
2004年
通过RT PCR从HL 6 0细胞获得人蛋白激酶CK2α′亚基编码区cDNA ,将NdeⅠ HindⅢ双酶切的PCR产物和pT7 7表达载体进行定向克隆、细菌转化、电泳初筛和限制性酶切分析鉴定 .随机挑选阳性克隆进行DNA测序确证 ,筛选含与已知序列完全相符的重组质粒 (命名为pTCKA′) .将其转化BL2 1(DE3)菌 ,IPTG诱导后未见高效特异表达 .然后将人CK2α′cDNA亚克隆至GST融合蛋白表达载体 ,经同样转化和诱导步骤后可见一蛋白特异高效表达 .Western印迹结果证明 :该蛋白能与兔抗人CK2α′3 3 3 3 50 肽段抗血清发生特异性免疫反应 .采用GSH Sepharose 4B柱纯化 ,凝血酶酶切 ,最后从 4g细菌获 4 4mg纯化重组蛋白 .通过性质鉴定和酶动力学分析证明 :克隆、表达和纯化的重组蛋白是有生物学活性的人CK2α′亚基 .
陈小文刘新光梁景耀梁念慈
关键词:大肠杆菌克隆纯化重组蛋白
人蛋白激酶CK2α′亚基cDNA的克隆与测序
2002年
目的 构建人蛋白激酶CK 2α′亚基cDNA重组表达质粒 ,研究CK 2的结构与功能。方法 采用RT -PCR、定向克隆和DNA测序等一系列分子生物学技术进行本实验。结果 从人白血病细胞 (HL 60 )中获得了人CK 2α′亚基cDNA ,使用NdeⅠ /HindⅢ双酶切PCR产物和表达载体 pT 7-7进行定向克隆 ,限制性酶切鉴定证明重组获得成功。 4个阳性克隆DNA测序结果显示有 1个含有正确插入的人CK 2α′cDNA ,命名为 pTCKA′ ;其余 3个克隆均存在碱基突变。 结论 成功克隆到人CK 2α′亚基cDNA的重组表达质粒。
刘新光陈小文梁念慈
关键词:CDNA克隆测序
三种Tyrphostin对重组人蛋白激酶CK2全酶的影响被引量:1
2001年
目的 :观察三种 Tyrphostins AG110 9、AG5 5 5和 AG1394对重组人蛋白激酶 CK2全酶的直接作用。方法 :利用基因工程克隆、表达和纯化获得重组人蛋白激酶 CK2α和β亚基 ,在体外等摩尔数混合构成有最大生物活性的重组 CK2全酶 ,在不同条件下测定 CK2的活性。 CK2活性通过测定转移到 CK2底物上的 [γ-3 2 P] ATP或 [γ-3 2 P] GTP的 [3 2 P]放射活度来检测。结果 :重组人 CK2是一种 Ca2 +、c AMP和 c GMP等第二信使非依赖性蛋白激酶 ,与天然 CK2的性质一致。 AG110 9对重组人CK2全酶具有较强的抑制作用 ,IC50 为 9.7μmol/L ,抑制作用稍大于已知 CK2抑制剂 DRB和 A3。 AG5 5 5对重组人 CK2全酶具有一定的抑制作用 ,而 AG1394则对人 CK2全酶基本无影响。 AG110 9对重组人 CK2的动力学研究表明 :它与 GTP呈现以竞争性为主的混合型抑制作用 ,与酪蛋白呈非竞争性抑制作用。结论 :AG110 9不仅是酪氨酸蛋白激酶的抑制剂 ,而且是一种十分有效的蛋白激酶 CK2的抑制剂。重组人蛋白激酶 CK2可作为一种较为简便筛选和开发有效的 CK2抑制剂的分子靶点。
刘新光梁念慈
关键词:蛋白激酶CK2重组蛋白TYRPHOSTIN酶动力学
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