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结核分枝杆菌可视化抗体检测蛋白芯片的制备被引量：6: 2009年; 目的:利用克隆表达的7种结核分枝杆菌优势表位抗原,建立可视化抗体检测蛋白芯片,用于结核病辅助诊断。方法:将7种结核分枝杆菌优势表位抗原,即38kD、ESAT-6、CFP10、MPT64、Mtb8、Mtb8.4和Mtb16.3点于修饰的基片上,制备可检测7种结核抗体的多靶点蛋白微阵列,建立免疫金银染色检测系统;使用该芯片对48例临床结核病患者血液样品进行检测,并与"金标准"痰涂片(48例)和痰培养(其中的29例)检测结果进行比较,分析其敏感性;对30名献血员血液样品进行检测,分析其特异性。结果:可视化抗体检测蛋白芯片的敏感性分别为98.5%和96.6%,而痰涂片和痰培养检测方法的敏感性分别为35.4%和48.3%;可视化抗体检测蛋白芯片的特异性为93.3%。结论:建立的结核分枝杆菌可视化抗体检测蛋白芯片检测敏感性显著高于痰涂片和痰培养方法,可用于结核病的临床辅助诊断,提高痰涂片和痰培养假阴性的检出率。; 冯晓燕陈坤李惠文宋晓国王国华韦攀健朱翠侠张洪涛张贺秋; 关键词：结核分枝杆菌

基于结核分枝杆菌分泌抗原的新型结核诊断试剂研究被引量：4: 2009年; 目的基于克隆表达多个结核分枝杆菌分泌抗原，研制新型结核酶联抗体诊断试剂，并与国家批准上市的同类试剂进行比较。方法克隆表达结核分枝杆菌分泌抗原38kD，CFP10，ESAT6，并将其串联实现嵌合抗原表达，研制间接酶联免疫结核抗体诊断试剂，并与市售同类产品同时检测临床结核病患者结核菌阳性或阴性血清样品。结果47例结核病样品中菌阳35例，菌阴12例，研制的试剂菌阳检出率91．4％（32／35）、菌阴66．7％（8／12），而市场同类产品菌阳检出率88．6％（31／35）、菌阴58．3％（7／12）。研制的试剂与市场同类产品对45例献血员检测特异度分别为95．6％，91.1％。结论结核分枝杆菌嵌合分泌抗原研制的结核酶联抗体诊断试剂具有较好的敏感度和特异度，可用于临床结核病的辅助诊断。; 王国华陈坤宋晓国冯晓燕朱翠侠李惠文韦攀健张洪涛张贺秋; 关键词：结核抗体结核分枝杆菌

结核分枝杆菌融合抗原38F和64F诊断活动性肺结核的价值被引量：3: 2013年; 目的探讨结核分枝杆菌融合抗原38F和64F对活动性肺结核患者血清中IgG、IgM和IgA抗体检测的诊断价值。方法利用结核分枝杆菌抗原优势肽段融合抗原38F和64F,通过ELISA法对223例活动性肺结核患者进行结核分枝杆菌特异性IgG、IgM和IgA抗体水平检测。223例活动性肺结核患者分为三组,第一组为涂片和培养共同阳性组(86例),第二组为涂片阴性且培养阳性组(51例),第三组为涂片和培养共同阴性组(86例)。结果223例活动性肺结核病患者,第一组IgG、IgM和IgA的联合检出率为79.07%(68/86);第二组IgG、IgM和IgA的联合检出率为62.75%(32/51);第三组IgG、IgM和IgA的联合检出率为69.77%(60/86)。全部样本血清学方法的检出率为71.75%(160/223)。结论结核分枝杆菌融合抗原38F和64F对于活动性肺结核具有较高的辅助诊断价值,并且IgG、IgM和IgA抗体联合检测可以提高检出率。; 郄霜张立戴振华赵平杨锡琴郭兰芹修冰水陈堃王国华张贺秋冯晓燕; 关键词：结核细菌细菌蛋白质类血清学试验

结核分枝杆菌抗原检测研究进展被引量：4: 2013年; 结核病仍然是一个严重的全球性公共卫生问题,有效控制结核病的障碍在于缺乏早期、准确的诊断方法。机体受到结核分枝杆菌感染后,体内首先出现的是结核分枝杆菌特异性抗原。因此,结核分枝杆菌抗原检测作为结核病早期诊断的方法可能具有很高的诊断价值。我们简要综述了结核分枝杆菌抗原检测的相关研究进展。; 戴振华郭兰芹张贺秋冯晓燕; 关键词：结核病结核分枝杆菌抗原检测

基于结核分枝杆菌多表位抗原的诊断试剂研制及临床评价: 2012年; 目的:基于结核分枝杆菌多表位抗原研制的新型结核免疫诊断试剂进行临床评价,评价其灵敏度和特异性,探讨其应用价值。方法:采用建立的间接ELISA方法,分别检测结核病和肺部其他疾病及健康人群血清样品。结果:508份肺结核患者样品中,检出阳性433份,灵敏度85.23%(433/508),健康人523份中,检出阳性49份,特异性90.63%(49/523)。结论:研制的新型的结核抗体免疫诊断试剂灵敏度高,特异性强,可用于结核感染的大规模筛查试验。; 陈堃冯晓燕杨锡琴宋晓国王国华朱翠侠邓敏许辛张贺秋; 关键词：结核分支杆菌酶联免疫法

结核分枝杆菌抗原优势肽段融合抗原38kD-ESAT6-CFP10的构建与抗原性初步检测被引量：8: 2009年; 目的为了提高结核病诊断试剂的特异性和敏感性,构建了结核分枝杆菌抗原优势肽段融合抗原38 kD-ESAT6-CFP10,并且采用双抗原夹心ELISA方法初步分析了该融合抗原的抗原性。方法运用生物学软件分析抗原优势肽段并模拟其串联后的三维结构,以确保串联后仍保持良好的抗原性。通过PCR方法分别扩增38 kD、ESAT-6和CFP10抗原优势肽段基因并将其进行连接,然后将融合基因分别连接入pBVIL1和pGEX-4T-2表达载体,在大肠杆菌菌株DH5α中进行表达。将两种不同载体表达的38 kD-ESAT6-CFP10融合抗原分别作为包被抗原和标记抗原,以双抗原夹心ELISA方法初步评价其抗原性。结果获得了38 kD、ESAT-6和CFP10的抗原优势肽段融合抗原38 kD-ESAT6-CFP10,并在大肠杆菌中进行了高效表达,初步验证所获得的抗原具有良好的抗原性。结论该种抗原优势肽段融合抗原有望成为结核病血清学诊断的重要候选抗原,并且双抗原夹心ELISA方法有助于提高检测的特异性和敏感性。; 冯晓燕陈坤宋晓国王国华朱翠侠李惠文韦攀健张贺秋; 关键词：分枝杆菌 KD ESAT-6 CFP10

抗结核分枝杆菌抗原优势肽段单克隆抗体的制备和初步鉴定: 2012年; 目的:制备和初步鉴定抗结核分枝杆菌抗原优势肽段的单克隆抗体。方法:以两种优势肽段的融合抗原PGEX-4T-2/38kD-ESAT6-CFP10和PGEX-4T-2/Mtb8.4-MPT64-Mtb16.3-Mtb8作为免疫原免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0小鼠骨髓瘤细胞融合后,通过有限稀释法筛选阳性克隆,经ELISA和Western blotting分析单抗的特性和特异性。结果:获得17株结核分枝杆菌抗原优势肽段特异单克隆抗体杂交瘤细胞株,经间接ELISA方法测定,杂交瘤细胞培养上清效价为28～212,接种小鼠的腹水效价为216～220。Western blotting结果显示,每株单抗均能特异性的识别融合蛋白的优势肽段。结论:制备了针对抗结核分枝杆菌抗原优势肽段的单克隆抗体,为结核分枝杆菌的快速诊断和抗原性分析奠定了基础。; 戴振华王国华冯晓燕张立陈堃宋晓国朱翠侠白冠中张贺秋; 关键词：结核分枝杆菌单克隆抗体

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国家自然科学基金(30772067)