陕西省科技攻关计划(2009K02-01)
- 作品数：14 被引量：38H指数：4
- 相关作者：许信刚刘晓强李引乾童德文周宏超更多>>
- 相关机构：西北农林科技大学中国农业科学院兰州兽医研究所陕西出入境检验检疫局检验检疫技术中心更多>>
- 发文基金：陕西省科技攻关计划教育部“新世纪优秀人才支持计划”国家大学生创新性实验计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 猪流产嗜性衣原体MOMP基因的克隆及原核表达被引量：3
- 2010年
- 【目的】克隆猪流产嗜性衣原体青海株主要外膜蛋白(Major outer membrane protein,MOMP)基因,并进行序列分析及原核表达。【方法】根据GenBank公布的猪流产嗜性衣原体MOMP基因的核苷酸序列,设计并合成4条特异性引物,用套式PCR方法扩增猪流产嗜性衣原体青海株MOMP基因,将其克隆入pMD18-T载体中,进行测序及序列分析。然后将MOMP基因亚克隆入原核表达载体pGEX4T-1中,在大肠杆菌BL21(DE3)中用IPTG诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE和Western blot检测。【结果】扩增到猪流产嗜性衣原体青海株1170bp的MOMP全长基因。序列分析结果表明,该基因与已发表的猪流产嗜性衣原体B11001株和CP/12株核苷酸同源性均为99.7%。SDS-PAGE电泳可检测到分子质量约为66ku的融合蛋白,主要以包涵体形式存在。Western-blot分析表明,重组蛋白可被猪流产嗜性衣原体抗体识别。【结论】成功克隆了猪流产嗜性衣原体青海株MOMP基因,并进行了原核表达,表达的蛋白具有抗原活性。
- 李西玉许信刚周继章邱昌庆曹小安宫晓炜王光华
- 关键词：流产嗜性衣原体原核表达
- 乙型脑炎病毒E基因在杆状病毒中的表达被引量：1
- 2010年
- 利用PCR方法扩增日本乙型脑炎病毒(JEV)E全长基因,然后将其克隆到杆状病毒转座载体pBac-SC中,筛选重组质粒pBacSC-E,再转化入含有穿梭载体的感受态细胞DH10Bac,经抗性及蓝白斑筛选得到含E基因的重组杆状病毒DNA,以脂质体介导法将此重组杆状病毒DNA转染Sf9昆虫细胞,从而获得重组杆状病毒。用此重组杆状病毒感染Sf9昆虫细胞,经Western-blot检测表明,E基因在昆虫细胞中获得表达,表达蛋白的分子量约53 ku,与预期结果大小一致,且能与日本乙型脑炎阳性血清发生特异性反应,这为进一步研究JEV亚单位疫苗和诊断抗原奠定了基础。
- 戚龙霞许信刚王志昇童德文唐麒麟宁蓬勃
- 关键词：乙型脑炎病毒重组杆状病毒SF9细胞
- 玉米赤霉烯酮对大鼠子宫内膜细胞Caspase-3和Caspase-8表达的影响被引量：4
- 2015年
- 探讨玉米赤霉烯酮(Zearalenone,ZEA)对雌性大鼠子宫内膜细胞凋亡与Caspase-3和Caspase-8蛋白表达的关系,进而揭示其导致子宫损伤的作用机制。应用HE染色观察组织病理变化,免疫组化SP法检测注射玉米赤霉烯酮后6个时间点大鼠子宫内膜细胞Caspase-3和Caspase-8蛋白的表达。病理组织学观察发现,试验组子宫组织出现不同程度损伤,子宫内膜细胞发生凋亡。免疫组化结果显示,试验组子宫内膜上皮细胞与间质细胞Caspase-3和Caspase-8蛋白表达量均明显高于对照组(P<0.05)。不同时间点相比,Caspase-3在内膜上皮细胞中12h表达量最高,而在内膜间质细胞中18h表达量最高;Caspase8在内膜上皮细胞中18h表达量达到峰值,而在内膜间质细胞中24h表达量最高,之后缓慢下降。结果表明,ZEA可能通过上调Casepase-3和Caspase-8的表达从而引起子宫内膜细胞凋亡。
- 周宏超赵煜杨鸣琦刘晓强李引乾
- 关键词：玉米赤霉烯酮内膜间质细胞CASPASE-3
- PRRSV陕西分离株ORF5基因克隆、序列分析及原核表达被引量：2
- 2010年
- 克隆猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF5基因,并进行序列分析及原核表达。根据GenBank公布的PRRSV ORF5基因的核苷酸序列,设计并合成一对特异性引物,用RT-PCR方法扩增PRRSV陕西分离株糖基化囊膜蛋白基因ORF5,将其克隆入pGEM-T载体中,进行测序及序列分析。再设计另外1对引物扩增ORF5缺失编码N端31个氨基酸残基的基因片段,将截短的ORF5基因亚克隆入原核表达载体pET-32a中,在大肠杆菌BL21中进行原核表达。结果扩增到603 bp的PRRSV全长ORF5基因,序列分析表明,分离株与北美型代表株VR-2332和欧洲型代表株LV氨基酸同源性分别为87.8%和54.5%。因此推测陕西分离株属于北美型。SDS-PAGE可检测到大小约为38 ku的融合蛋白,主要以可溶性蛋白形式存在。West-ern-blot分析表明,重组蛋白可被PRRSV阳性血清所识别。
- 王志昇许信刚童德文邢福珊陈曦唐麒麟宁蓬勃
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒陕西分离株ORF5原核表达
- 氟苯尼考长效混悬注射液的研制及其质量控制被引量：4
- 2010年
- 【目的】以氟苯尼考为主药,制备氟苯尼考长效混悬注射液,并对其进行质量控制研究。【方法】采用正交设计进行处方优化筛选,以助悬剂含量、润湿剂含量、研磨时间为可变因素,选用L9(34)正交设计表进行试验,以研磨分散法制备氟苯尼考混悬注射液,对其进行质量评价并建立测定氟苯尼考含量的方法。【结果】氟苯尼考长效混悬注射液的最佳处方为:氟苯尼考15 g,PVP 10 mL,蓖麻油15 mL,司盘-80、吐温-80、抗氧化剂和防腐剂各适量,再以CMC-Na溶液调节总量至100 mL。以紫外分光光度法测定氟苯尼考含量,标准曲线回归方程的相关系数为0.999 1,平均回收率为91.24%,专属性强,简单易操作。质量评价试验表明,该混悬注射液重分散性和通针性良好。【结论】所研制的氟苯尼考混悬注射液符合药典中有关混悬注射液的要求,制备方法简单可行。
- 刘晓强靳亚平李引乾蒿彩菊周佩
- 关键词：氟苯尼考混悬注射液正交设计
- 培氟沙星对几株常见致病菌的体外抗菌后效应被引量：2
- 2011年
- 抗菌后效应（post-antibiotic effect,PAE）从发现至今一直是抗菌药物研究的重点领域之一,指细菌与药物短暂接触后,将药物除去,细菌的生长仍然受到持续的抑制。
- 刘晓强靳亚平李引乾黄勇旗王渊
- 关键词：抗菌后效应培氟沙星致病菌抗菌药物
- 黄连解毒汤对感染大肠埃希菌大鼠脑组织TLR9表达的影响
- 【目的】Toll样受体(Toll-like Receptors,TLRs)是近年来备受关注的一种模式识别受体(pattem recognition receptor,PRR),主要在免疫效应细胞如巨噬细胞、树突状细胞(d...
- 刘晓强周宏超俞亚玲赵守中杨鸣琦李引乾
- 关键词：黄连解毒汤脑组织大肠埃希菌
- 文献传递
- 传染性法氏囊病病毒YL株VP2基因的克隆、序列分析及原核表达被引量：6
- 2010年
- 克隆、序列分析及原核表达鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP2基因。根据GenBank已登录的IB-DV VP2基因序列,设计合成一对VP2基因特异性引物,应用RT-PCR技术从陕西省某鸡场分离的IBDV毒株中克隆VP2基因并进行序列分析。再将VP2基因亚克隆于原核表达载体pET-32a中,构建重组质粒pET-32a-VP2,经鉴定正确后转化大肠杆菌BL21菌株进行诱导表达,并进行SDS-PAGE检测。成功克隆IBDVYL毒株VP2全基因序列,核苷酸和氨基酸序列分析表明,YL株为IBDV超强毒株。经IPTG诱导后,SDS-PAGE分析,在宿主菌BL21中成功表达约为53 ku的VP2蛋白。IBDV VP2基因克隆表达成功,为IBDV的分子生物学特性研究提供资料,其表达产物为进一步制备抗IBDV单克隆抗体奠定了基础。
- 黄春旭许信刚童德文王志昇杜谦唐麒麟宁蓬勃
- 关键词：传染性法氏囊病病毒VP2基因基因克隆原核表达
- PCV-2陕西株ORF2基因的克隆、分析及原核表达被引量：2
- 2010年
- 【目的】克隆猪圆环病毒2型陕西分离株(PCV-2SX株)ORF2基因,并进行序列分析及原核表达。【方法】根据GenBank公布的PCV-2ORF2基因的核苷酸序列,设计并合成1对特异性引物,应用PCR方法扩增PCV-2SX株ORF2全长基因,将其克隆入pGEM-T载体中,进行测序及序列分析。然后,将ORF2基因亚克隆入原核表达载体pET-32a中,在大肠杆菌BL21中进行IPTG诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE和Western-blotting鉴定。【结果】扩增到了702bp的PCV-2ORF2全长基因。序列分析结果表明,PCV-2SX株ORF2基因与广西分离株(EF675237,ChinaGX)和巴西分离株(DQ861802,am21)的核苷酸序列同源性均达98.0%,氨基酸序列同源性均达98.3%,与其他毒株的核苷酸序列和氨基酸序列同源性分别在89.9%～97.9%和88.5%～98.0%。SDS-PAGE可检测到分子质量约为48ku的融合蛋白,主要以可溶性蛋白形式存在。Western-blotting分析表明,重组蛋白可被PCV-2阳性血清所识别。【结论】成功克隆了PCV-2SX株ORF2基因,并进行了原核表达。
- 邢福珊许信刚童德文王志昇刘文静宁蓬勃张彦明
- 关键词：猪圆环病毒2型陕西分离株ORF2基因原核表达
- 玉米赤霉烯酮对雌性大鼠卵巢颗粒细胞凋亡相关蛋白Fas及FasL表达的影响被引量：2
- 2014年
- 为了研究玉米赤霉烯酮(ZEA)对大鼠卵巢颗粒细胞Fas和FasL蛋白表达的影响。将36只8周龄雌性SD大鼠随机分为试验组和对照组,处理组腹腔注射5mg/kg ZEA玉米油溶液,对照组注射等剂量玉米油溶液。2组在注射后6、12、18、24、36、48h各处死3只,取出卵巢组织,4%多聚甲醛固定,免疫组化方法检测不同时间卵巢颗粒细胞Fas和FasL蛋白的表达情况。结果显示:试验组卵巢颗粒细胞Fas和FasL蛋白表达量均明显高于对照组(P<0.05),且随着时间的推进呈现动态变化。试验组Fas在各时间点表达量均显著高于对照组,且在18h时表达量最高,之后逐渐下降;试验组FasL表达量显著升高,在18和24h表达量显著上调。ZEA诱导大鼠卵巢颗粒细胞凋亡过程中,可能激活Fas和FasL相关的死亡受体信号通路。
- 赵煜周宏超杨鸣琦刘晓强李引乾
- 关键词：玉米赤霉烯酮卵巢颗粒细胞FASL
