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国家自然科学基金(30650007)

作品数:5 被引量:9H指数:2
相关作者:王俊芳尹德龙陈安民程浩夏仁云更多>>
相关机构:华中科技大学更多>>
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文献类型

  • 5篇中文期刊文章

领域

  • 5篇医药卫生

主题

  • 4篇软骨
  • 4篇前软骨干细胞
  • 4篇干细胞
  • 3篇细胞
  • 2篇永生化
  • 2篇生化
  • 2篇细胞培养
  • 1篇永生化人
  • 1篇增殖
  • 1篇软骨组织
  • 1篇软骨组织工程
  • 1篇体外分离
  • 1篇脉冲电磁场
  • 1篇介导
  • 1篇骨组织
  • 1篇骨组织工程
  • 1篇HUMAN
  • 1篇IMMORT...
  • 1篇INTROD...

机构

  • 4篇华中科技大学

作者

  • 4篇程浩
  • 4篇陈安民
  • 4篇尹德龙
  • 4篇王俊芳
  • 3篇方煌
  • 3篇夏仁云
  • 1篇李锋
  • 1篇郭风劲

传媒

  • 1篇中华物理医学...
  • 1篇中华创伤骨科...
  • 1篇Journa...
  • 1篇生物骨科材料...
  • 1篇中国组织工程...

年份

  • 1篇2010
  • 4篇2009
5 条 记 录,以下是 1-5
排序方式:
永生化人前软骨干细胞株的构建被引量:2
2010年
背景:前软骨干细胞体外培养增殖能力有限,但永生化细胞株可以提供大量性状稳定的永生化细胞,并且猿肾病毒40大T抗原基因(simian virus40large tumor antigen,SV40Tag)是较为常用且有效的体外永生化细胞的基因片段之一。目的:以SV40Tag转染的人前软骨干细胞构建永生化人前软骨干细胞株。方法:采用酶消化法及免疫磁珠筛选技术分离纯化人胚胎前软骨干细胞。利用脂质体介导基因转染技术将含有SV40Tag的质粒pCMVSV40T/PUR转染原代胚胎前软骨干细胞,以未转染细胞作阴性对照。阳性克隆扩大培养,观察细胞形态学以及传代复苏情况,计算细胞存活率和群体倍增时间,绘制细胞生长曲线。以免疫荧光细胞化学技术检测永生化人前软骨干细胞成纤维生长因子受体3,以RT-PCR检测永生化人前软骨干细胞及人前软骨干细胞中SV40Tag和成纤维生长因子受体3表达。结果与结论:贴壁培养的永生化人前软骨干细胞形态与原代人前软骨干细胞形态无明显差别。传代、冻存、复苏对人永生化前软骨干细胞的存活率无影响,第6,10代人前软骨干细胞的存活率降低(P<0.01)。与第6,10代人前软骨干细胞相比,永生化人前软骨干细胞增殖较旺盛,群体倍增时间短、增殖率高(P<0.01)。第2代永生化人前软骨干细胞成纤维生长因子受体3染色阳性,成纤维生长因子受体3的RT-PCR结果显示在约400bp处有一特异形扩增条带,SV40Tag的RT-PCR结果显示在约560bp处有一特异形扩增条带,未转染的原代细胞未见条带。提示以免疫磁珠筛选技术及脂质体转染技术成功构建了SV40Tag永生化人前软骨干细胞株。
尹德龙陈安民郭风劲王俊芳程浩
关键词:永生化软骨组织工程
脉冲电磁场对免疫磁性分选人前软骨干细胞增殖功能的影响被引量:4
2009年
目的研究脉冲电磁场对免疫磁性分选人前软骨干细胞(PSCs)增殖功能的影响。方法采用酶消化法从流产胎儿下肢股骨干骺端中收集细胞,选用免疫磁性分选技术分离出PSCs;经体外扩增培养后采用流式细胞术、免疫组化、免疫荧光、RT—PCR等技术鉴定纯化后的PSCs。采用50Hz 1mT脉冲电磁场间断刺激纯化后的PSCs,并绘制细胞生长曲线,采用MTT法测定细胞增殖活性,采用流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡情况。结果从流产胎儿干骺端中成功培养出细胞表面表达成纤维生长因子受体-3(FGFR-3)标记物的人PSCs;免疫磁性分选系统能有效分离纯化PSCs;PSCs经脉冲电磁场刺激4d和6d后,发现能明显促进细胞增殖功能(P〈0.05),其S期细胞数量百分比较对照组显著增高(P〈0.01),细胞早期凋亡率、晚期凋亡率及总凋亡率均较对照组明显降低(P〈0.05)。结论免疫磁性分选系统能有效分离、纯化PSCs,脉冲电磁场刺激能显著提高体外培养人PSCs增殖功能并抑制细胞凋亡。
王俊芳夏仁云方煌陈安民尹德龙程浩
关键词:前软骨干细胞细胞培养脉冲电磁场
Immortalization of Human Precartilaginous Stem Cells by Transfecting SV40Tag被引量:2
2009年
Immortalized human precartilaginous stem cells (1PSCs) were established to provide stable cell resource for the study of the molecular mechanism of gene targeting on the differentiation of PSCs. Plasmid pCMVSV40T/PUR containing simian virus 40 large T antigen gene (SV40Tag) was transfected into human PSCs by using lipofectin transfection. Colonies were isolated by puromycin selection and expanded by multiple passages. Immunohistochemistry, RT-PCR and Southem blotting were used to identify the transfected cells and to detect the expression and integration of SV40Tag in expanded cell lines. The positive colonies were isolated and subcultured, designated immortalized precartilaginous stem cells (IPSCs), which were confirmed as fibroblast growth factor receptor-3 (FGFR-3) positive cells by immunohistochemistry and RT-PCR. SV40Tag cDNA was found in cultured IPSCs of passage 8 by Southern blotting, and the expressions of SV40Tag mRNA and protein were confirmed by RT-PCR. These findings suggested that IPSCs strain with SV40Tag was constructed successfully.
王俊芳方煌夏仁云陈安民程浩
关键词:IMMORTALIZATIONINTRODUCTION
猿肾病毒40介导的人前软骨干细胞永生化的实验研究
2009年
目的构建猿肾病毒40大T抗原基因(SV40Tag)介导的永生化人前软骨干细胞株,为下一步基因打靶研究其分化分子机制提供稳定的细胞来源。方法采用脂质体介导的基因转染技术将含有SV40Tag的质粒pCMVSV40T/PUR转染人前软骨干细胞(PSCs),经嘌呤霉素筛选,阳性克隆扩大培养并连续传代。用免疫组化、RT—PCR、Southern印迹杂交法对转染细胞进行鉴定,并检测SV40Tag在转染细胞中的表达及其与基因组的整合情况。结果筛选获得的阳性克隆扩大培养,命名为永生化前软骨干细胞(IPSCs),能连续传代培养,细胞生长迅速。免疫组化和RT-PCR证实IPSCs成纤维生长因子受体-3阳性,并可检测到SV40Tag mRNA及其蛋白的表达。Southern印迹杂交显示IPSCs基因组中存在SV40Tag cDNA。结论成功构建了SV40Tag介导的永生化人前软骨干细胞株。
王俊芳夏仁云方煌陈安民尹德龙程浩
关键词:干细胞永生化
人前软骨干细胞体外分离培养及鉴定的实验研究被引量:1
2009年
目的探讨体外分离、培养人前软骨干细胞(PSCs)的可行性,分析其表型特点,为相关的实验研究奠定基础。方法采用酶消化法从流产胎儿干骺端中收集细胞,用免疫磁性分选技术分离出前软骨干细胞,体外扩增培养,用流式细胞术、免疫组化、免疫荧光、RT-PCR等方法鉴定纯化后的PSCs。结果从流产胎儿干骺端中成功培养出人前软骨干细胞,细胞表面表达成纤维生长因子受体-3(FGFR-3)标记物,细胞生长迅速。结论在体外培养条件下可以从流产胎儿干骺端中分离培养出较高丰度的前软骨干细胞。
王俊芳夏仁云方煌陈安民李锋尹德龙程浩
关键词:前软骨干细胞细胞培养
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