广州市科技计划项目(2008Z1-E011)
- 作品数：3 被引量：4H指数：1
- 相关作者：陈金顶陈立军赵明秋琚春梅贾俊涛更多>>
- 相关机构：华南农业大学内蒙古农业大学更多>>
- 发文基金：长江学者和创新团队发展计划广东省自然科学基金广州市科技计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 口蹄疫病毒VP1基因siRNA重组腺病毒的构建及其介导的RNAi抑制口蹄疫病毒复制的研究被引量：1
- 2010年
- 本研究选择O型FMDV VP1基因上保守序列作为可能的干扰位点,合成了siRNA,将siRNA克隆到pSIREN-Shuttle中,获得siRNA重组表达载体pShuttle-VP1。用限制性内切酶PI-Sce I和I-Ceu I双酶切siRNA重组表达载体和腺病毒质粒载体pAdeno-X,利用体外连接法获得了重组质粒。经过PCR扩增、酶切鉴定及序列测定,证明成功构建了重组腺病毒质粒pAdeno-VP1。利用脂质体转染法,将Pac I线性化的重组腺病毒质粒pAdeno-VP1转染HEK293细胞,包装成重组腺病毒rAdeno-VP1。经过PCR鉴定正确后大量增殖,增殖的重组腺病毒经过浓缩、纯化得到了高滴度的病毒。用终点稀释法测定病毒滴度为2.5×109PFU/mL。将rAdeno-VP1感染IBRS-2细胞后,12 h后再加入100TCID50的FMDV O/HKN/2003。结果显示,重组腺病毒能够抑制FMDV的复制。
- 贾俊涛陈立军赵明秋琚春梅吕英然陈金顶
- 关键词：口蹄疫病毒重组腺病毒
- 口蹄疫病毒L、2B基因siRNA重组腺病毒质粒的构建
- 2017年
- 根据si RNA设计原则,分别选择O型FMDV的L和2B基因上保守序列作为可能的干扰位点,设计了2个si RNAs,并将si RNAs克隆到p SIREN-Shuttle中,获得2个si RNA重组表达载体p Shuttle-L和p Shuttle-2B。用限制性内切酶I-Ceu I和PI-Sce I双酶切si RNA重组表达载体和腺病毒质粒载体p Adeno-X,利用体外连接法获得了重组质粒。经PCR扩增、酶切鉴定及序列测定,成功构建了重组腺病毒质粒p Adeno-L和p Adeno-2B。
- 贾俊涛郭凤英乌伦吉如嘎张小宇陈金顶
- 关键词：口蹄疫病毒RNA干扰
- CSFV强弱毒株RT-PCR快速鉴别检测方法研究
- 猪瘟(Classical swinefever,CSF)是由猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)引起猪的一种烈性传染病,严重危害养猪业的发展,是世界动物卫生组织要求申报的动物传染病...
- 郑仲华胡永明赵明秋陈金顶
- 关键词：猪瘟病毒RT-PCR
- 文献传递
- siRNA抑制口蹄疫病毒在BHK-21细胞中复制的研究被引量：3
- 2009年
- 选取口蹄疫病毒(FMDV)的VP1、IRES、2B、3D和L基因保守序列,设计、合成siRNA,并成功构建表达siRNA的穿梭载体,通过脂质体2000在BHK-21细胞上转染6个重组siRNA表达质粒,观察其对FMDV S72毒株复制的抑制效果.结果发现:病毒对照和空载体对照细胞死亡脱落,脂质体2000对照和细胞对照细胞状态良好;6个siR-NA转染孔细胞状态明显优于病毒对照孔,表明6个重组质粒转染后均可以显著抑制FMDV S72毒株的复制,其中靶向IRES1基因的siRNA对FMDV的复制抑制最为明显.
- 王伟利陈立军赵明秋琚春梅陈金顶
- 关键词：口蹄疫病毒RNA干扰SIRNABHK-21细胞
