国际科技合作与交流专项项目(BZ2011042)
- 作品数:8 被引量:18H指数:4
- 相关作者:武晓泓朱嘉瑜徐一力张勤凤王晓兢更多>>
- 相关机构:江苏省人民医院江阴市人民医院南京医科大学更多>>
- 发文基金:国际科技合作与交流专项项目国家自然科学基金江苏省“六大人才高峰”高层次人才项目更多>>
- 相关领域:医药卫生更多>>
- 围妊娠期胰岛β细胞量动态调控机制的研究进展被引量:4
- 2012年
- 妊娠是一种特殊而复杂的生理过程。随着孕周的延长、体重的增加,胎盘产生的胰岛素拮抗激素如催乳素、雌激素、孕激素及皮质激素等逐渐增多,母体会出现对胰岛素的敏感性降低,从而表现出“生理性胰岛素抵抗”。此时,母体胰岛β细胞量通过代偿性扩增,分泌更多的胰岛素来满足机体的需求。
- 王晓兢武晓泓
- 关键词:细胞量妊娠期胰岛素抵抗生理过程皮质激素
- 新生期小鼠胰岛细胞自噬及其机制研究
- 2016年
- 目的观察新生期小鼠胰岛细胞自噬的变化,分析白噬相关基因的表达差异并初步探讨相关调控机制。方法采用胶原酶消化法分离纯化第1、3和8周小鼠胰岛细胞,透射电镜观察白噬体显微结构。采用免疫荧光双染法检测胰岛中微管相关蛋白1轻链3(LC3)与胰岛素双阳性细胞比例的变化。采用实时定量PCR技术检测自噬相关基因(Atg)mRNA水平的表达。采用Western blotting法检测目的蛋白的表达。多组间数据比较采用单因素方差分析。结果(1)透射电镜结果显示,3周小鼠胰岛细胞出现内含胞浆或细胞器成分的具有双层膜结构的自噬体。免疫荧光结果显示,LC3在3周小鼠胰岛B细胞胞浆中着色较深,表达高于1周和8周(57.6±2.3比24.4±1.3、28.1±2.3,t=-21.44、-15.66,均P〈0.01)。(2)3周时,p53mRNA表达明显高于1周和8周,而哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)mRNA表达显著低于1周和8周(均P〈0.01)。新生期小鼠胰岛细胞Atg的表达呈动态变化。与1周和8周相比,3周时Atgl激酶同源蛋白(ULK—1)、Beclinl和Mapllc3b表达明显增高(P〈0.05)。与1周相比,3周时P13Kc3、Atg5、Mapllc3a和Atgl611表达显著增高(P〈0.05);3周和8周时Atg4d的表达显著增高(P〈0.05)。Atg4c表达在3周时明显高于8周(P〈0.05)。(3)Western blotting显示,与1、8周相比,3周时p53、磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(pAMPK)、Beclinl和LC3-Ⅱ蛋白表达均显著增高(F=29.14~56.05,均P〈0.01),而mTOR蛋白表达明显低于1周和8周(0.61±0.06比1.00±0.02、0.89±0.09,F=29.41,P〈0.01)。结论p53/pAMPK/mTOR/Beclinl介导的自噬信号通路可能参与新生期小鼠胰岛细胞自噬的调控。
- 高莉章辉石厚霞赵静赵馨徐宽枫武晓泓
- 关键词:胰岛自噬基因
- 新生期小鼠胰岛细胞凋亡及其机制的研究
- 2014年
- 目的 观察新生期小鼠胰岛细胞凋亡的变化特点并分析细胞凋亡相关基因的表达差异,初步探讨相关机制.方法 采用胶原酶消化法分离纯化第1、3和8周小鼠胰岛细胞,以磷脂结合蛋白V-绿色荧光素/碘化丙啶双染法流式细胞术检测细胞凋亡率.透射电镜观察胰岛细胞凋亡形态,原位末端脱氧核苷酸转移酶标记(Tunel)/胰岛素免疫荧光双染法检测凋亡.采用实时定量PCR技术检测凋亡相关基因mRNA的表达.采用Western blotting技术检测促凋亡基因和抗凋亡基因的表达.多组间统计数据比较采用单因素方差分析.结果 (1)新生期小鼠胰岛细胞凋亡率在3周时显著增加,明显高于1周和8周[分别为(10.53±2.61)%、(1.80±0.69)%、(3.26±0.94)%,F=32.09,P<0.01].透射电镜结果显示新生第3周小鼠胰岛细胞核出现凋亡早期改变.3周时Tunel/胰岛素双阳性细胞数明显高于1周和8周.(2)新生期小鼠胰岛细胞凋亡相关基因的表达呈动态变化,3周时,促凋亡基因Fas和FasL的mRNA表达均明显高于1周和8周(分别为1.53±0.21、1.00±0.00、0.46±0.24,F=24.85,P<0.01;2.63±0.56比1.00±0.00、0.52±0.14,F=32.77,P<0.01),抗凋亡基因Bcl-2 mRNA表达明显低于1周和8周(分别为0.30±0.23、1.00±0.00、1.71±0.00,F=78.06,P<0.01).(3)3周时,Fas、FasL和裂解的Caspase-3蛋白表达均明显高于1周和8周(分别为2.05±0.16、1.00±0.00、0.59±0.24,F=61.47,P<0.01;3.54±0.86、1.00±0.00、0.72±0.26,F=27.04,P<0.01;5.74±0.59比1.00±0.00、3.11±0.20,F=128.79,P<0.01);Bcl-2蛋白表达明显低于1周和8周(0.62±0.13比1.00±0.00、1.90±0.10,F=151.08,P<0.01).结论 Fas/FasL以及Bc1-2介导的细胞凋亡信号通路可能参与新生期小鼠胰岛细胞凋亡的调控.
- 高莉徐一力朱嘉瑜张于芝赵静章辉武晓泓
- 关键词:胰岛凋亡基因
- 新生小鼠胰岛增殖及口袋蛋白家族、E2F转录因子表达变化被引量:4
- 2013年
- 目的 观察新生小鼠胰岛细胞、细胞周期和视网膜母细胞瘤蛋白(Rb)、视网膜母细胞瘤样蛋白1(p107)、视网膜母细胞瘤样蛋白2(p130)及E2F转录因子的变化特点,探讨其与胰岛细胞增殖的关系.方法 采用免疫组化法检测出生第1、3和8周小鼠胰岛β/α细胞量、单个细胞面积和细胞数量的变化.采用胶原酶消化法分离纯化小鼠胰岛,以流式细胞术检测细胞周期,实时定量PCR及蛋白印迹技术检测Rb、p107、p130和E2F转录因子mRNA和蛋白表达.结果 (1)小鼠3周和8周胰岛β/α细胞量显著高于1周(P<0.05);单个β/α细胞面积在3周时无明显差异,8周时扩大1.7倍(P<0.01);而β/α细胞数量在3周增加约3.5/3.7倍(P<0.01),8周与3周无明显差异.(2)1周和3周时G0/G1期细胞比8周明显减少(81.3±1.2、82.8±3.3比92.6±1.3,F=6.5,P<0.05),而G2/M期显著增多(13.4±1.4、12.2±1.8比5.5±0.5,F=6.3,P<0.05),细胞增殖指数明显增加(P<0.05).(3)8周时Rb mRNA表达明显低于1周和3周(P<0.01);3周和8周时p107 mRNA显著低于1周(P<0.05),而p130 mRNA显著高于1周(P<0.05),E2F-1、E2F-2 mRNA均显著低于1周(均P<0.01);8周时E2F-3 mRNA显著低于1周(P<0.05);而E2F-4、E2F-5 mRNA在3周和8周时表达增加.(4)8周时Rb和p107蛋白表达均比1周明显降低,p130表达显著增高,3周和8周时E2F1表达显著降低(均P<0.05).结论 新生小鼠胰岛细胞量扩增明显,以细胞数量增加为主,细胞增殖显著.Rb、p107、p130及其相关E2F转录因子的表达存在动态变化,可能参与细胞增殖的调控.
- 朱嘉瑜王晓兢张勤凤徐一力吕颖钺张洁吴雨洁武晓泓
- 关键词:胰岛增殖
- 胰高血糖素样肽1受体表达及其生理功能的研究进展被引量:7
- 2013年
- 糖尿病一般采用以生活方式干预为基础的口服药物和(或)胰岛素治疗。以胰高血糖素样肽1(GLP-1)为基础的新型降糖药物已在2型糖尿病患者的临床治疗中取得了良好的疗效3。GLP-1是一种主要由肠道L细胞产生的肠促胰岛素(incretin),通过特异性的GLP-1受体(GLP-1R)介导发挥生物学作用。GLP-1R属于G蛋白偶联受体B家族(分泌素家族)中的胰高血糖素受体亚家族,
- 张勤凤武晓泓
- 关键词:胰高血糖素样肽1受体表达生理功能GLP-1生活方式干预胰岛素治疗
- 新生期胰岛β细胞重塑阶段的分子调控机制被引量:3
- 2013年
- 新生期是胰岛β细胞数量剧增和功能完善的重要时期。β细胞通过增殖、新生、凋亡等途径共同调控细胞量的扩增,机制涉及细胞周期相关蛋白、促有丝分裂信号通路等。此重塑阶段对于今后机体适应代谢需要和调节血糖内环境稳态具有深远影响。
- 朱嘉瑜武晓泓
- 关键词:胰岛Β细胞
- 口袋蛋白家族在胰岛发育及稳态调控中的研究进展被引量:2
- 2015年
- 糖尿病是危害社会发展的重大健康问题之一。虽然病因复杂,但胰岛在血糖稳态调节中的核心作用毋庸置疑。恢复胰岛β细胞的功能和数量一直是临床治疗糖尿病的关键。细胞周期分析显示,胰岛β细胞增殖十分缓慢,绝大多数(97%~99%)处于G0/1期[1-3]。阻止β细胞通过G1/S期周期转换的分子机制尚不清楚。视网膜母细胞瘤蛋白(Rb)是调控G1/S期细胞周期转换的重要分子,与视网膜母细胞瘤样蛋白1(p107)、视网膜母细胞瘤样蛋白2(p130)具有相似的口袋状DNA结合区域,共同属于口袋蛋白家族[3-5]。有关口袋蛋白家族的研究主要集中在肿瘤领域。近年研究显示,2型糖尿病患者胰岛Rb基因表达显著降低[6],其在胰岛细胞扩增中的作用正日益受到重视。本文就口袋蛋白家族在胰岛发育及稳态调控中的研究进展作一综述。
- 徐一力武晓泓
- 关键词:视网膜母细胞瘤蛋白胰岛Β细胞家族发育细胞周期分析RB基因表达
- 新生期小鼠胰岛分离纯化方法的研究被引量:4
- 2013年
- 目的:探讨新生期小鼠胰岛分离纯化方案。方法:采用胰腺局部充盈、胶原酶Ⅴ消化,对比不同消化时间及单纯显微镜下手挑胰岛或Histopaque-1077纯化对胰岛得率的影响,并通过胰岛素/胰高血糖素双染后流式细胞术检测胰岛β和α细胞构成比例。结果:在1 mg/ml酶浓度下,1周和3周小鼠胰岛的最适消化时间分别为23 min(胰岛/胰腺38.11±2.78)和25 min(胰岛/胰腺66.06±2.61)。1周以直径<50μm胰岛居多(P<0.01),而3周以50~99μm者居多(P<0.01)。单纯手挑组胰岛得率显著高于Histopaque-1077纯化组(P<0.05)。所得胰岛存活率和纯度均>90%,且存在β和α细胞构成比例的动态变化(P<0.05)。结论:胰腺局部充盈、胶原酶Ⅴ消化后镜下手挑胰岛是一种较好的新生期小鼠胰岛分离纯化方法,消化时间和纯化方法是其重要影响因素。
- 朱嘉瑜王晓兢张勤凤徐一力武晓泓
- 关键词:小鼠胰岛分离纯化