国家教育部博士点基金(200802400001)
- 作品数：6 被引量：43H指数：5
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- 相关机构：哈尔滨商业大学国家教育部黑龙江中医药大学更多>>
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- 龙葵碱对HepG2细胞NAT1酶活性及动力学影响的研究被引量：5
- 2011年
- 目的探讨龙葵碱诱导HepG2细胞凋亡的芳香胺N-乙酰化转移酶(NAT)1的影响。方法采用高效液相色谱法(HPLC),以对氨基苯甲酸(PABA)为底物,以PABA被NAT1乙酰化为乙酰对氨基苯甲酸(Ac-PABA)的量反应NAT1酶的活性。观察不同浓度、不同时间龙葵碱对完整HepG2细胞NAT1酶活性的影响;龙葵碱对HepG2细胞细胞质中NAT1酶活性的影响;通过改变底物PABA浓度,采用双倒数作图法,以底物PABA浓度的倒数(1/S)对NAT1反应速率的倒数(1/V)作直线,得出回归方程,计算Km和Vmax。结果在NAT1酶活性测定中,龙葵碱能显著降低HepG2完整细胞NAT1的活性;龙葵碱能够降低HepG2细胞质内NAT1的活性;随着作用时间的增加Ac-PABA生成的量逐渐增加,但在相同作用时间段龙葵碱能显著降低Ac-PABA生成的量。动力学研究表明,以PABA为底物,对于HepG2完整细胞,阴性对照组的Km和Vmax分别为(1.04×10-3±8.36×10-5)mmol.L-1、(1.64×10-4±9.57×10-6)nmol.106cells-1,龙葵碱组的Km和Vmax分别为(1.06×10-3±6.97×10-5)mmol.L-1和(1.48×10-4±4.28×10-6)nmol.106cells-1.h-1。对于HepG2细胞质,阴性对照组的Km和Vmax分别为(3.32×10-1±2.35×10-4)mmol.L-1、(2.60×10-3±6.79×10-6)nmol.h-1.mg pro-1,龙葵碱组的Km和Vmax分别为(3.35×10-1±1.66×10-4)mmol.L-1和(2.22×10-3±8.12×10-6)nmol.h-1.mg(Pro)-1,经统计学处理表明,对于HepG2完整细胞和细胞质,阴性对照组和龙葵碱组的Km没有差异,而Vmax差异显著。结论龙葵碱是HepG2细胞NAT1酶的非竞争性抑制剂。龙葵碱通过作用于NAT1与PABA结合位点以外的其他位点抑制NAT1酶的活性而诱导HepG2细胞凋亡。
- 高世勇苏怡君季宇彬
- 关键词：龙葵碱HEPG2人肝癌细胞N-乙酰化转移酶米氏常数
- 龙葵碱对HepG2细胞NAT1酶活性的影响被引量：5
- 2010年
- 探讨龙葵碱对HepG2人肝癌细胞的N-乙酰基转移酶1(NAT1)酶活性的影响.采用高效液相色谱法(HPLC),以对氨基苯甲酸(PABA)为底物,以PABA被NAT1乙酰化为乙酰对氨基苯甲酸(Ac-PABA)的量反应NAT1酶的活性.观察不同质量浓度、不同时间龙葵碱对完整HepG2细胞NAT1酶活性的影响;龙葵碱对HepG2细胞细胞质中NAT1酶活性的影响.结果表明,在NAT1酶活性测定中,龙葵碱能显著降低HepG2完整细胞NAT1的活性;龙葵碱能够降低HepG2细胞质内NAT1的活性,且作用具有剂量依赖性;随着时间的增加NAT1转化产物的量逐渐增加,但龙葵碱能显著降低同一时段NAT1的活性.提示龙葵碱通过抑制HepG2细胞中NAT1的活性是龙葵碱抑制人肝癌细胞HepG2增殖的作用机制之一.
- 高世勇苏怡君季宇彬
- 关键词：龙葵碱HEPG2人肝癌细胞
- 昆布多糖分离纯化及其抗肿瘤活性的研究被引量：10
- 2009年
- 目的纯化昆布多糖,并筛选其抗肿瘤活性。方法 DEAE-52纤维素及Sephadex G-200柱色谱分离纯化得到7种不同的昆布多糖组分,经抗肿瘤活性筛选出活性较好的昆布多糖Ⅱ,再经Sephadex G-200柱色谱及高效液相凝胶渗透色谱鉴定质量分数,并进行抗肿瘤活性筛选。结果 Sephadex G-200柱色谱及高效液相凝胶渗透色谱鉴定昆布多糖Ⅱ-B为单一成分,昆布多糖Ⅱ对人胃癌SGC-7901、肝癌HepG-2的IC50分别为649.8、592.2μg/mL。结论昆布多糖Ⅱ-B具有明显的抗肿瘤活性。
- 季宇彬娄艳华高世勇
- 关键词：昆布多糖纯化抗肿瘤
- 龙葵碱调控还原型谷胱甘肽和活性氧氧化还原体系损伤线粒体超微结构诱导HepG2细胞凋亡被引量：6
- 2009年
- 目的探讨龙葵碱诱导HepG2细胞凋亡与线粒体损伤的关系。方法倒置显微镜观察细胞形态,Annexin V/PI双染激光共聚焦扫描显微术检测细胞凋亡,流式细胞仪检测细胞凋亡率。透射电镜观察细胞线粒体超微结构,CDFH-DA染色激光共聚焦扫描显微术检测活性氧(ROS)相对量,比色法检测还原型谷胱甘肽(GSH)量。结果龙葵碱组HepG2细胞贴壁细胞数量减少,部分出现死亡。Annexin V/PI双染激光共聚焦扫描显微镜下观察发现龙葵碱组细胞Annexin V-FITC高染,细胞膜呈绿色荧光;PI低染,细胞核呈红色荧光,呈现明显的早期凋亡特征。流式细胞术分析0.4、2、10μmol/L龙葵碱作用HepG2细胞24 h后,早期凋亡率分别为4.0%、8.5%、20.1%。透射电镜观察发现龙葵碱作用HepG2细胞24 h,细胞线粒体超微结构出现肿胀,嵴排列紊乱、嵴消失,重度空泡样变性等变化;细胞内ROS水平升高,GSH的水平降低。结论龙葵碱通过降低HepG2细胞内GSH量,使ROS不能被及时清除而损伤线粒体结构,导致HepG2细胞凋亡。
- 高世勇徐丽丽季宇彬
- 关键词：龙葵碱细胞凋亡线粒体
- 龙葵碱调控Bcl-2与Bax蛋白表达及caspase-3活性诱导HepG2细胞凋亡的研究被引量：11
- 2009年
- 目的探讨龙葵碱诱导HepG2细胞凋亡的作用机制。方法透射电镜观察凋亡细胞形态变化,原位缺口末端检测法(TUNEL法)检测DNA断裂情况,流式细胞术检测细胞凋亡率,间接免疫荧光法激光共聚焦扫描显微术检测Bcl-2与Bax蛋白表达,比色法检测caspase-3活性的变化。结果在透射电镜下观察,龙葵碱组细胞出现细胞固缩,染色质致密,核凝聚固缩,染色体断裂形成核碎块,凋亡小体形成等细胞凋亡特征形态。TUNEL法发现龙葵碱高、中、低剂量组HepG2细胞均有绿色荧光,阴性对照组无荧光。流式细胞术分析表明0.4、2、10μmol/L龙葵碱作用HepG2细胞24h凋亡率分别为4.0%、8.5%、20.1%。同时,龙葵碱升高caspase-3活性,下调Bcl-2蛋白表达,上调Bax蛋白表达。结论龙葵碱通过降低Bcl-2/Bax的值,激活caspase-3酶活性诱导HepG2细胞凋亡。
- 高世勇徐丽丽季宇彬
- 关键词：龙葵碱细胞凋亡CASPASE-3BCL-2BAX
- 龙葵碱对乳腺癌MCF-7细胞微管系统的影响被引量：15
- 2012年
- 目的研究龙葵碱对乳腺癌MCF-7细胞微管系统的影响。方法 MTT法检测龙葵碱对人乳腺癌MCF-7细胞增殖的抑制作用,流式细胞仪分析龙葵碱对MCF-7细胞周期的影响以及细胞内α-微管蛋白及微管相关蛋白(MAP-2)的变化。结果龙葵碱对MCF-7细胞的IC50为22.08μg/mL,能够将MCF-7细胞阻滞于S期;能够增加MCF-7细胞内α-微管蛋白和MAP-2的量。结论龙葵碱通过升高MCF-7细胞内的微管蛋白及MAP-2的表达,将MCF-7细胞阻滞于S期,从而抑制乳腺癌MCF-7细胞的生长。
- 季宇彬刘家源高世勇
- 关键词：龙葵碱乳腺癌MCF-7细胞细胞周期微管蛋白细胞增殖
