国家自然科学基金(31222054)
- 作品数：9 被引量：6H指数：2
- 相关作者：王晓钧姚秋成尹鑫孙君帅胡哲更多>>
- 相关机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所东北农业大学东北林业大学更多>>
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- 稳定表达马TRIM5α蛋白的HEK293细胞系的建立及其抗病毒活性初步研究
- 2016年
- 为建立稳定表达马TRIM5α(eqTRIM5α)的HEK293细胞系,并检测马TRIM5α(eqTRIM5α)的抗病毒功能,本研究将eqTRIM5α克隆于慢病毒表达载体pLPCX中,构建重组质粒pLPCX-eqTRIM5α-HA,同时构建恒河猴的pLPCX-Rh TRIM5α-HA作为阳性对照。利用VSV-G包装慢病毒,感染HEK293细胞,并利用嘌呤霉素筛选、纯化,建立了稳定表达eqTRIM5α和Rh TRIM5α的HEK293细胞系。经western blot和流式细胞术鉴定,该细胞系传代至20代后,仍然能够检测到eqTRIM5α和RhTRIM5α的稳定表达。将该细胞系应用于抗马传染性贫血病毒(EIAV)活性研究中,结果显示eqTRIM5α同RhTRIM5α一样均能够抑制病毒复制,表明eqTRIM5α是一种对EIAV具有较强限制作用的宿主蛋白。该细胞系的建立为进一步评价和研究eqTRIM5α的抗病毒作用和机制奠定了基础。
- 王翠辉那雷苏朝姚秋成蔡伟刚王晓钧
- 关键词：抗病毒作用马传染性贫血病毒
- 马传染性贫血病弱毒疫苗免疫马血清对同源和异源病毒株中和活性的研究
- 2018年
- 为评价马传染性贫血病毒(EIAV)弱毒疫苗免疫马血清对同源和异源病毒株的中和活性差异,本研究构建了不同EIAV株(EIAV_(FDDV3-8)、EIAV_(LN)、EIAV_(UK)和EIAV_(YN))Env的重组表达质粒,并将这些质粒与包装质粒(pUK-Gag-pol)及表达荧光素酶的转移质粒(pONY8.1)共转染293T细胞;将假病毒与疫苗免疫马(5#、8#)血清共孵育后接种于ELR1-293T细胞单层;通过检测细胞中荧光素酶活性,计算疫苗免疫马血清中和50%假病毒感染的血清稀释倍数,评价血清对病毒的中和活性。结果显示,疫苗免疫马血清对表达不同Env假病毒的中和滴度存在差异,从高到低依次是:pVR1012-FDDV-3-8-Env、pVR1012-LN-Env、pVR1012-UK-Env、pVR1012-YN-Env,而且免疫血清对不同病毒株的中和能力与不同病毒株Env的变异呈负相关(5#,R^2=0.99;8#,R^2=0.96)。虽然免疫马血清中和异源病毒株的能力显著低于同源病毒株,但其对异源病毒株仍具有良好的中和作用,本研究结果表明中国EIAV弱毒疫苗可以激发抗不同病毒株的广谱中和抗体。
- 刘影王雪峰王美月陈杰孙君帅马建王晓钧
- 关键词：马传染性贫血病毒囊膜蛋白假病毒
- 抗病毒限制因子SAMHD1的研究进展被引量：2
- 2016年
- “限制因子”这一概念最早出现于上世纪七十年代[1],虽然到目前为止也尚未对其给出明确的定义,但可以确定它们是一类细胞内可限制病毒复制并保护宿主抵御病毒感染的蛋白。近些年,在对HIV-1的研究中发现,在病毒感染的细胞内存在一些具有抑制病毒复制的蛋白,而这些蛋白被认为是可以保护宿主免受病毒感染的宿主抗病毒限制因子。
- 姚秋成马建李艳飞王晓钧
- 关键词：抗病毒病毒复制免疫缺陷病毒逆转录病毒
- CBF-β辅助SIVagm Vif蛋白诱导限制因子APOBEC3G的降解
- 2015年
- APOBEC3蛋白家族是一类重要的慢病毒复制的免疫限制因子。慢病毒编码的附属蛋白Vif可以与Cullin5-Elongin B/Elongin C形成E3泛素化连接酶复合物使APOBEC3G(A3G)聚泛素化和降解,从而抑制A3G对病毒的限制。CBF-β为RUNX家族转录辅助因子,可以调节Vif介导的A3G降解作用。为探索CBF-β对非洲绿猴免疫缺陷病毒Vif蛋白(SIVagm Vif)的调节机制以及对A3G降解的影响,本研究通过生化及病毒学方法对SIVagm和HIV-1编码的Vif蛋白与CBF-β作用进行了对比性研究。结果显示,SIVagm编码的Vif对A3G的降解同样需要CBF-β的辅助。当Vif(HIV-1/SIVagm)编码的第38位色氨酸突变成丝氨酸后,CBF-β辅助Vif调节A3G降解的功能显著降低。由此表明,第38位色氨酸对于不同慢病毒编码的Vif与CBF-β的相互作用具有重要作用。由此推测,CBF-β辅助Vif介导的降解A3G的作用在灵长类慢病毒中具有保守性。
- 朱丹彤艾有为林跃智马建章王晓钧侯志军张明海
- 关键词：慢病毒VIFAPOBEC3G
- 稳定表达马属动物SAMHD1蛋白的U937细胞系的建立及其抗病毒活性初步研究被引量：1
- 2017年
- 为研究马属动物SAMHD1的抗病毒活性,本研究构建了稳定表达马SAMHD1(eqSAMHD1)、驴SAMHD1(doSAMHD1)的U937细胞系。利用pLPCX慢病毒表达载体构建重组质粒pLPCX-doSAMHD1-HA和pLPCX-eqSAMHD1-HA。将重组质粒和假病毒包装重组质粒(pCgp和pVSV-G)共转染于293T细胞中,制备表达SAMHD1的假病毒,将其感染人急性单核细胞白血病细胞系U937,利用嘌呤霉素筛选,建立了稳定表达doSAMHD1和eqSAMHD1的U937细胞系。经western blot鉴定,该细胞系能够稳定表达doSAMHD1和eqSAMHD1蛋白。将人类免疫缺陷病毒(HIV)和马传染性贫血病毒(EIAV)的假病毒感染该细胞系,结果显示表达eqSAMHD1和doSAMHD1的细胞系均能够显著抑制HIV假病毒复制,限制倍数分别为17~19倍和14~18倍;两种细胞系也能够抑制EIAV假病毒复制,限制倍数分别为3~4倍和2~3倍。该细胞系的建立为进一步评价和研究马属动物SAMHD1的抗病毒机制奠定了基础。
- 郭苗苗尹鑫姚秋成胡哲王晓钧
- 关键词：U937细胞系HIV-1EIAV
- 天然免疫限制因子Tetherin的抗病毒机理研究进展被引量：2
- 2014年
- 天然免疫限制因子Tetherin(骨髓基质细胞抗原2)是Ⅰ型干扰素诱导产生的Ⅱ型跨膜蛋白.Tetherin通过其特殊的拓扑结构,在病毒出芽过程中将病毒粒子连接在细胞膜表面,限制病毒的有效释放,从而发挥广谱性的抗病毒活性,而病毒也可以通过多种策略拮抗Tetherin的抗病毒活性.病毒与宿主长期抗争进化的结果表现为病毒特定拮抗蛋白对抗不同种属细胞Tetherin的限制存在种属特异性.本文通过对Tetherin的分子结构、抗病毒活性及其拮抗蛋白的对抗机制等最新进展进行综述,为研究病毒与宿主相互作用的分子机制以及新型抗病毒药物的筛选提供借鉴.
- 尹鑫魏萍王晓钧
- 关键词：TETHERIN抗病毒活性拮抗蛋白进化
- 一株抗马传染性贫血病毒p26蛋白单克隆抗体识别差异表位鉴定
- 2015年
- 为研究本实验室制备的抗马传染性贫血病毒（EIAV）p26蛋白单克隆抗体（MAb）1G11的B细胞表位识别特性,本研究通过对不同EIAV株p26蛋白进行系统进化分析,将其划分为3大分支群。根据已经鉴定的线性表位（命名为1G11）,通过对3个分支群中的8株代表性病毒株p26蛋白1G11表位区域分析,并原核表达8株病毒1G11表位区域多肽P26-（1～8）,经SDS-PAGE和western blot鉴定,结果表明除表位多肽P26-7以外,其他多肽均能够被MAb 1G11所识别。分析显示P26-7多肽序列同时发生N^200S和M^215L变异。由于N^200S和M^215L单独改变并不影响MAb 1G11识别,因此我们推测N^200与M^215同时改变可能影响两侧末端半胱氨酸（C）及附近氨基酸所形成的表位构象,进而影响MAb 1G11识别;同时,其他氨基酸差异并不影响MAb 1G11识别,表明该抗体对1G11表位区域识别具有广谱性。这为进一步应用该MAb作为检测抗体和开发广谱性诊断检测方法提供了依据。
- 常浩胡哲戈曼郭继珂王晓钧周建华
- 关键词：马传染性贫血病毒
- 马传染性贫血病毒诱导马胎皮细胞发生自噬的研究
- 2017年
- 为研究马传染性贫血病毒(EIAV)感染对马胎皮细胞(FED)自噬的影响,本研究将EIAV感染FED以及过表达GFP-LC3的FED细胞,进行自噬现象的检测。结果显示,通过电镜观察到EIAV感染组细胞出现典型的双层膜结构的自噬小体,western blot检测到EIAV感染组细胞的LC3-II的表达量显著升高,通过激光共聚焦显微镜观察到EIAV感染的过表达GFP-LC3的FED细胞有明显的绿色荧光聚集。上述结果表明EIAV感染FED细胞后可以显著诱导FED细胞发生自噬。该研究结果为进一步研究自噬对EIAV复制和感染的调控奠定基础。
- 任会玲王雪峰杜承刘聪林跃智王晓钧
- 关键词：EIAV自噬LC3
- 转录因子JunD在HIV-1前病毒DNA转录调控中的作用研究被引量：1
- 2019年
- 人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)潜伏感染的形成与AP-1家族蛋白的转录调节作用密切相关。为研究AP-1家族成员JunD分子在HIV-1潜伏感染形成中的作用,本研究基于可支持HIV-1复制的T细胞系Jurkat,构建敲除JunD和稳定(过)表达JunD的细胞系;拯救HIV-1假病毒并分别感染对照细胞、JunD敲除以及JunD稳定表达的细胞系,通过荧光素酶技术检测HIV-1前病毒DNA转录水平的变化。结果显示,与对照组相比,JunD敲除显著抑制了HIV-1的复制,而过表达JunD则促进了HIV-1的复制。该结果表明,JunD参与了HIV-1前病毒DNA的转录调控,并可能由此影响HIV-1在宿主细胞内的复制。本实验为研究激活HIV-1细胞潜伏感染的靶点提供了实验数据。
- 孙君帅林朝辉徐菱马建王晓钧
- 关键词：HIV-1转录调控
