国家自然科学基金(30772159)
- 作品数：12 被引量：56H指数：3
- 相关作者：徐月敏宋鲁杰李超崔磊傅强更多>>
- 相关机构：上海交通大学附属第六人民医院上海市组织工程研究与开发中心上海交通大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金中国博士后科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 兔口腔黏膜细胞与灭活的3T3成纤维细胞的体外共培养被引量：3
- 2007年
- 目的探讨口腔黏膜细胞的培养方法,为进一步以口腔黏膜细胞为种子细胞构建组织工程化尿道提供实验依据。方法体外分离口腔黏膜细胞,取部分细胞与经丝裂霉素灭活的3T3成纤维细胞进行共培养（共培养组）,定期观察细胞形态变化及生长增殖情况。以非共培养的口腔黏膜细胞作为对照（非共培养组）。同时,对体外培养获得的口腔黏膜细胞进行广谱角蛋白抗体（AE1/AE3）和K19免疫荧光染色鉴定;流式细胞仪检测第2代共培养组细胞的AE1/AE3阳性细胞百分比。结果共培养组口腔黏膜细胞,呈现典型的＂铺路石＂状,细胞形态均一,可传代至7-8代。非共培养组口腔黏膜细胞则形态多样,传至第2代时,即开始出现老化,细胞贴壁及增殖能力均明显减弱。免疫荧光染色显示,体外培养获得的口腔黏膜细胞AE1/AE3免疫荧光染色阳性,40%细胞K19染色阳性。流式细胞仪检测结果表明,第2代共培养组口腔黏膜细胞AE1/AE3阳性细胞百分比〉95%。结论口腔黏膜细胞在有灭活的3T3成纤维细胞存在时可成功培养和扩增,为进一步将其作为种子细胞构建组织工程化尿道奠定了良好的基础。
- 李超徐月敏宋鲁杰崔磊尹烁
- 关键词：口腔黏膜细胞3T3细胞中文摘要
- 组织工程舌黏膜构建的研究被引量：1
- 2008年
- 目的探讨舌黏膜细胞的体外培养方法，及其作为种子细胞与同种异体膀胱脱细胞移植物（BAMG）复合构建组织工程化黏膜的方法。方法分离并获取雄性新西兰大耳白兔舌黏膜细胞进行培养，定期观察细胞形态变化及生长增殖情况。对体外培养的舌黏膜细胞进行广谱角蛋白抗体（AE1／AE3）免疫荧光染色鉴定；流式细胞仪检测第2代培养细胞的AE1／AE3阳性细胞百分比；细胞计数及噻唑蓝（MTT）比色法测定以判断细胞增殖能力。取同种异体兔膀胱经脱细胞处理制成BAMG，随机取小块组织行HE和Masson染色观察脱细胞效果，然后将第2代体外培养的舌黏膜细胞种植于BAMG上，通过HE染色及扫描电镜观察口腔黏膜细胞与BAMG的复合情况。结果舌黏膜细胞形态均一有较强的增殖能力可传代至4～5代，传至第4代时开始出现老化，细胞贴壁及增殖能力均明显减弱。免疫荧光染色显示近100％体外培养的舌黏膜细胞AE1／AE3免疫荧光染色阳性。流式细胞仪检测结果表明第2代舌黏膜细胞AE1／AE3阳性细胞百分比大于96％。舌黏膜细胞传至第3代时可获得细胞数量在2×10^2以上。HE和扫描电镜观察均显示舌黏膜细胞和BAMG复合良好。结论兔舌黏膜细胞可在体外成功培养、扩增；兔舌黏膜细胞与同种异体BAMG复合后生长良好。
- 胡晓勇徐月敏李超傅强宋鲁杰崔磊
- 关键词：膀胱
- 利用不同复合技术体外构建三维尿道组织的比较研究被引量：1
- 2011年
- 目的探讨优化体外构建三维立体尿道组织的复合技术。方法高速振荡脱细胞法制备猪尿道海绵体脱细胞（ACSM）支架，碘消毒法进行复合前消毒，酶消化法分离及扩增兔舌黏膜上皮细胞和海绵体平滑肌细胞。采用3种复合技术进行细胞与ACSM的复合。A组（三明治复合组）：于ACSM尿道面及海绵体面分别静态接种两种细胞。B组（注射复合组）：将平滑肌细胞注射人ACSM内部并在尿道面静态接种舌黏膜上皮细胞。C组（动态复合组）：采用振荡法将平滑肌细胞接种于ACSM内部并在尿道面静态接种舌黏膜上皮细胞。体外培养14d以后行HE染色以检查复合效果。结果振荡脱细胞处理后ACSM的结构较脱细胞前更为疏松；碘消毒法在彻底消毒的同时能够最大限度的保留脱细胞支架的原有结构。复合支架体外培养14d后HE染色均可见有完整的上皮细胞层形成于支架表面。A组复合后平滑肌细胞仅在支架大间隙中可见。未见向深部浸润趋势。B组复合后平滑肌细胞成团分布于支架内，并受周围支架组织约束成局限化表现，仅5％～10％的细胞有向外生长倾向。C组HE染色可见平滑肌细胞均匀分布于支架内部，15％～20％的区域可见平滑肌成束生长。同时平滑肌层与支架表面的上皮细胞层分界清晰。结论高速振荡法制备的支架组织具有理想的三维空间结构，结合动态细胞复合技术可构建拥有良好立体结构的尿道组织。
- 冯超徐月敏傅强朱卫东李超宋鲁杰崔磊
- 关键词：脱细胞支架尿道
- 兔阴茎海绵体内皮细胞的体外培养与鉴定被引量：3
- 2008年
- 宋鲁杰徐月敏李超胡晓勇崔磊傅强
- 关键词：细胞培养酶消化法体外研究
- 人脐动脉平滑肌细胞复合脱细胞基质构建海绵体平滑肌的动物实验研究被引量：1
- 2008年
- 目的探讨脐动脉平滑肌细胞（HUASMC）与阴茎海绵体脱细胞基质（ACCM）复合构建海绵体平滑肌的可行性。方法以1％的Triton-X100与0．1％NH3H2O混合液对兔阴茎海绵体进行脱细胞处理，制备ACCM。采用贴块法分离、培养、扩增HUASMC。HUASMC以30×10^6／ml密度接种ACCM，细胞ACCM体外复合10d后将复合物植人9只5周龄BALB／C裸鼠背部皮下，术后10、20和40d分别对移植物进行HE染色、免疫组织化学染色和器官浴槽实验，评价其裸鼠体内构建情况。结果ACCM为白色圆柱状，镜下为富含胶原的疏松多孔结构，不含细胞成分。HUASMC与ACCM相容性良好，HUASMC在与ACCcM接触部位充分伸展，并沿ACCM窦隙活跃生长。9只裸鼠均存活，植人部位无感染，无植人物排斥发生。随培育时间延长，裸鼠体内ACCM逐渐降解，植入的HUASMC分化形成结构良好、交错排列的平滑肌组织。器官浴槽实验显示，构建组织对去氧肾上腺素和电刺激均表现出收缩功能，去氧肾上腺素和电刺激所诱导的最大收缩力分别为（3．64±0．18）和（2．50±0．21）g。结论HUASMC作为种子细胞与ACCM复合可构建出具有一定形态和功能的组织工程海绵体平滑肌。
- 宋鲁杰徐月敏傅强崔磊李超胡晓勇
- 关键词：动物实验研究
- 口腔黏膜细胞与膀胱黏膜下脱细胞基质复合物构建组织工程化尿道的实验研究被引量：36
- 2008年
- 目的探讨以兔口腔黏膜细胞与同种异体膀胱黏膜下脱细胞基质（BAMG）复合物构建组织工程化尿道的可行性。方法新西兰雄性兔24只，距尿道外口2．0cm剥离尿道黏膜（2．0cm×0．8cm）后，随机分实验组和对照组，每组12只。切取实验组兔口腔黏膜组织分离细胞，在有灭活的3T3细胞培养皿上进行培养扩增，将培养获得的第2代口腔黏膜细胞种植于BAMG（2．2cm×1．0cm）上，植入实验组兔尿道缺损区域；对照组单纯采用无细胞植入的BAMG修复尿道。分别于术后1、2、6个月观察动物排尿情况，行尿道造影，8F尿管插管确定有无狭窄；随后处死实验兔，取修复段尿道黏膜组织行组织学检查。结果细胞培养获得的口腔黏膜细胞形态均一，生长良好；组织形态学、扫描电镜观察见口腔黏膜细胞与BAMG具有良好的相容性。实验组兔术后1、2、6个月伤口愈合良好、排尿通畅，无尿瘘发生，组织学和尿道造影检查显示带细胞修复的尿道形态完整、清晰宽敞，无狭窄发生；术后6个月植入的口腔黏膜细胞仍然存在，并明显扩增。对照组兔则出现排尿困难、尿道狭窄，光镜下发现黏膜及黏膜下存在严重的炎症反应。结论兔口腔黏膜细胞与同种异体BAMG复合后，可成功用于尿道缺损的修复，构建组织工程化尿道。
- 李超徐月敏宋鲁杰傅强崔磊尹烁
- 关键词：尿道口腔黏膜细胞膀胱脱细胞基质
- 应用组织工程口腔黏膜重建尿道的初步实验研究被引量：7
- 2008年
- 目的探讨兔口腔黏膜细胞的体外培养方法,并以其为种子细胞与异体膀胱黏膜下脱细胞基质(bladder acellular matrix graft,BAMG)复合,构建组织工程尿道。方法18只10周龄雄性新西兰大耳白兔,体重0.3～0.5kg。取其中12只兔口腔黏膜组织,分离获得口腔黏膜细胞。将口腔黏膜细胞分别接种于有3T3细胞及无3T3细胞的培养皿进行培养,接种后第2天于倒置相差显微镜下观察细胞形态变化,绘制细胞生长曲线,观察生长增殖情况,并行免疫荧光组织化学染色鉴定。取余6只兔膀胱,经脱细胞处理制备BAMG,随机取1cm×1cm组织行HE染色,观察脱细胞效果。将接种于有3T3细胞培养皿培养获得的第2代口腔黏膜细胞种植于BAMG上,培养1周后,行HE染色及扫描电镜观察口腔黏膜细胞与BAMG的复合状况。结果倒置相差显微镜下观察,接种于有3T3细胞培养皿的口腔黏膜细胞可传至7～8代,其细胞形态均一,功能良好;无3T3细胞培养皿的口腔黏膜细胞形态多样,传至第2代时,即开始出现老化。细胞生长曲线显示,两种方法培养的口腔黏膜细胞均于第8天开始呈对数增长,第14天达峰值。接种于有3T3细胞培养皿的口腔黏膜细胞,培养至融合时所获得细胞数量明显多于接种于无3T3细胞培养皿的口腔黏膜细胞。两种方法培养的口腔黏膜细胞行免疫荧光染色,均呈绿色荧光。HE染色观察,BAMG经脱细胞处理后未见细胞,脱细胞效果良好。复合培养1周后,HE染色及扫描电镜观察口腔黏膜细胞与BAMG复合良好。结论兔口腔黏膜细胞可在体外成功培养、扩增,与同种异体BAMG复合后生长良好,为构建组织工程尿道提供了一种新的选择。
- 李超徐月敏宋鲁杰崔磊尹烁
- 关键词：口腔黏膜细胞体外复合
- 犬舌黏膜与颊黏膜组合移植重建尿道的实验研究
- 2009年
- 目的探讨犬舌黏膜与颊黏膜组合移植替代尿道的可行性和有效性。方法杂种雌犬7只，平均体质量13kg，剥离尿道黏膜4cm×1cm，取2cm×1cm舌侧面黏膜和颊黏膜各1条，拼接后移植至尿道内，恢复尿道黏膜的连续性。术后留置硅胶导尿管1周，拔除尿管后观察排尿情况。1．5～12．0个月后行逆行尿道造影检测实验犬尿道通畅情况，并用10F尿管证实有无狭窄。随后处死实验犬，测定移植物长度并行病理组织学检查，观察舌黏膜与颊黏膜组合移植至尿道后组织学改变情况。结果7只实验犬均存活，排尿通畅6只，发生尿道狭窄1只；无尿瘘。移植手术前后舌黏膜和颊黏膜拼接长度分别为（4．00±0．15）和（3．75±0．23）cm，差异有统计学意义（P〈0．05）。排尿通畅犬移植黏膜存活良好；舌黏膜与颊黏膜交界处愈合良好，无狭窄发生；光镜下见鳞状上皮呈连续分布，拼接移植黏膜的鳞状上皮与尿道的移行上皮区分明显，移植黏膜的鳞状上皮有渐被尿道移行上皮替代的趋势。结论犬舌黏膜和颊黏膜组合移植可替代尿道黏膜并恢复尿道的连续性。
- 胡晓勇徐月敏宋鲁杰沈婷李超傅强撒应龙
- 关键词：尿道狭窄舌黏膜颊黏膜尿道成形
- 尿路组织工程材料的血管化被引量：1
- 2008年
- 学术背景:组织材料血管化是组织工程学中重要的组成部分之一,复合材料的血管化对复合其上的细胞存活以及原有组织或器官功能的恢复起到至关重要的作用。目的:结合近年来的相关文献,对尿路组织工程修复重建中血管化的研究做一综述。检索策略:由第一作者应用计算机检索PUBMED,中国期刊数据库2002-07/2007-10相关文章,检索词为"tissueengineering,vascularization,angiogenesis,omentum,growthfactor,endothelialprogenitorcell,urethra,bladder,urology"或"组织工程,血管化,尿道,膀胱,生长因子,网膜,血管内皮组细胞,尿路",文章语言种类为"English"或中文。纳入标准:内容应与泌尿系统组织修复重建材料血管化的研究相关。排除标准:重复文章。文献评价:共收集到214篇相关文献,82篇符合纳入标准,其中31篇涉及网膜在泌尿系统血管化中的应用,25篇涉及生长因子在泌尿系统组织工程重建中的研究,剩余26篇为种子细胞在泌尿系统血管化中的应用。选用具有代表性的30篇。资料综合:目前已有研究利用网膜作为生物反应器对不同的支架材料进行包埋以重建输尿管和膀胱组织,并取得了满意的效果;还有利用血管内皮细胞生长因子、碱性成纤维细胞生长因子等相关生长因子与脱细胞基质进行复合促进了毛细血管的增生的研究;更有学者利用各种相关的种子细胞与支架材料复合构建具有微血管结构的替代材料。而从干细胞和相关祖细胞上对组织材料进行微血管化的构建将是泌尿系统组织替代材料血管化的发展方向。结论:利用多种手段进行材料血管化的研究是目前泌尿系统组织工程研究中的重点之一,但其研究尚处在起步阶段,多数报道仅处于实验室阶段,真正应用于临床的文献较少见。因而目前来说仍有许多关键点有待于解决。
- 冯超徐月敏
- 关键词：泌尿系统血管化生物材料
- 组织工程化尿道修复重建新进展被引量：1
- 2009年
- 组织工程学作为一门新兴的学科正越来越受到人们的关注。应用组织工程方法进行膀胱、阴茎海绵体以及尿道等各类器官重建的报道层出不穷。作者就近年来组织工程化尿道修复重建的研究进展作一综述。
- 冯超徐月敏
- 关键词：尿道种子细胞
