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国家自然科学基金(30772174)
作品数:
4
被引量:4
H指数:1
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郑骏年
刘俊杰
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毛立军
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徐州医学院附属医院
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2009
3篇
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表达白细胞介素-18的溶瘤腺病毒对裸鼠肾癌移植瘤的治疗作用
被引量:1
2008年
目的观察表达IL-18的溶瘤腺病毒(ZD55-IL18)对裸鼠肾癌移植瘤生长及血管形成的抑制作用。方法荷肾癌裸鼠随机分4组,每组8只。瘤体内注射ZD55-IL18、溶瘤腺病毒ZD55-EGFP、表达IL-18的增殖缺陷腺病毒Ad-IL18及PBS,每次注射病毒7×10^8PFU/只,连续注射3d。注射后第7天,每组处死3只取肿瘤组织,免疫组织化学检测肿瘤E1A、IL-18、CD34、VEGF表达及凋亡。第50天时处死动物测量肿瘤体积。结果ZD55-IL18、zD55.EGFP、Ad.IL18及生理盐水处理组肿瘤体积(mm^3)分别为:299.7±52.9、536.8±90.3、570.3-4-99.0、766.1±145.8,ZD55-IL18与各组之间差异有统计学意义(P〈0.01)。Ad-IL18处理组肿瘤无E1A蛋白表达,ZD55-IL18处理组有大量E1A蛋白表达,表明病毒复制。ZD55-IL18处理组肿瘤IL-18表达及凋亡细胞阳性率均显著高于Ad-IL18处理组。ZD55-IL18处理组肿瘤CD34、VEGF表达均显著低于Ad-IL18处理组。结论表达IL-18的溶瘤腺病毒ZD55-IL18比增殖缺陷腺病毒Ad-IL18具有更强的抑制肾癌生长及血管形成作用。
陈仁富
郑骏年
史震
李望
孙方浩
温儒民
关键词:
溶瘤腺病毒
白细胞介素18
肾癌
肾癌G250启动子及肿瘤细胞p53突变双重调控的表达Ki67-siRNA的增殖腺病毒的构建
2009年
目的构建一种受肾癌G250启动子及肿瘤细胞p53突变双重调控的表达Ki67基因小干扰RNA(Ki67-E1B55kDsiRNA)的新型增殖腺病毒。方法将含有H1启动子的Ki67-siRNA表达框插入E1B55kD缺失增殖腺病毒载体pZD55中,构建pZD55-Ki67质粒。用G250启动子取代pZD55-Ki67的E1A启动子,构建双调控增殖腺病毒载体pZD—G250-Ki67。将pZD—G250-Ki67与腺病毒右臂质粒pBHGE3共转染293细胞,9—12d后出现病毒空斑。提取重组腺病毒的DNA、聚合酶链反应(PCR)鉴定正确者即为条件增殖腺病毒ZD—G250-Ki67。鉴定、扩增、纯化、测病毒滴度。结果成功构建G250启动子调控E1B55kD蛋白编码基因缺失的表达Ki67-siRNA的双调控增殖型腺病毒ZD—G250-Ki67。病毒滴度为2×10^11PFU/ml。结论成功构建的ZD—G250-Ki67为利用Ki67-siRNA靶向肾癌治疗奠定基础。
禚保彪
李海龙
刘俊杰
徐为
高超
郑骏年
关键词:
肾癌
腺病毒
表达白细胞介素18的条件增殖腺病毒的构建
被引量:3
2008年
目的构建表达白细胞介素(IL)-18的条件增殖腺病毒。方法以质粒pJW-IL18为模板,聚合酶链反应(PCR)扩增获得全长IL-18基因并改变其包含的酶切位点BglⅡ。将IL-18克隆至pCA13质粒,构建重组质粒pCA13-IL18。用BglⅡ从pCA13-IL18酶切出包含CMV启动子的IL-18表达框,并克隆进条件增殖腺病毒质粒pZD55,构建重组质粒pZD55-IL18。将pZD55-IL18与含有腺病毒右臂的质粒pBHGE3共转染293细胞,9~12d后出现病毒空斑。提取重组腺病毒的DNA,PCR鉴定正确者即为条件增殖腺病毒ZD55-IL18。大量扩增,氯化铯梯度离心纯化,测病毒滴度。结果成功构建了表达IL-18的条件增殖腺病毒。结论成功构建的ZD55-IL18为肿瘤靶向治疗奠定基础。
李望
郑骏年
毛立军
郝林
郑宏祥
刘俊杰
裴冬生
印晓星
关键词:
腺病毒
克隆
表达人端粒酶逆转录酶小干扰RNA的增殖腺病毒对肝癌细胞的抑制作用
被引量:1
2008年
目的观察表达人端粒酶逆转录酶小干扰RNA(hTERT—siRNA)的增殖腺病毒(ZD—hTERT)对人肝癌Bel-7402细胞增殖及凋亡影响。方法ZD—hTERT、增殖腺病毒ZD—EGFP、表达hTERT—siRNA的增殖缺陷腺病毒Ad—hTERT、增殖缺陷腺病毒Ad—EGFP分别感染人肝癌Bel-7402细胞。Western blot法检测E1A表达;逆转录-聚合酶链反应(RT—PCR)、Western blot法检测hTERT表达;噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞存活;结晶紫染色法检测细胞毒作用;原位末端标记法(TUNEL)检测凋亡。结果感染ZD—hTERT、ZD-EGFP的Bel-7402细胞表达E1A;抑制hTERT表达作用依次为ZD—hTERT〉Ad—hTERT〉ZD—EGFP〉Ad—EGFP;抑制Bel-7402细胞生长及细胞毒作用依次为ZD—hTERT〉ZD—EGFP=Ad—hTERT〉Ad—EGFP。感染ZD—hTERT、ZD—EGFP、Ad—hTERT、Ad—EGFP的Bel-7402细胞凋亡率(%)分别为(88.1±2.2)、(39.2±2.1)、(42.1±5.1)、(7.5±2.1),ZD—hTERT诱导凋亡作用最高(P〈0.01)。结论表达hTERT—siRNA的增殖腺病毒能显著抑制人肝癌Bel-7402细胞hTERT基因表达,进而抑制其增殖,促进其凋亡。
徐为
刘俊杰
宋文哲
毛立军
高超
韩东
裴冬生
郑骏年
关键词:
腺病毒
HTERT基因
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