广东省科技计划工业攻关项目(2004B30701005)
- 作品数：12 被引量：26H指数：3
- 相关作者：徐兵唐家宏宋小燕许文娟李琳更多>>
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- 实时荧光定量PCR检测急性髓系白血病患者FLT3基因的表达水平及意义被引量：2
- 2008年
- FLT3（fms-like tyrosine kinase 3 ）基因是近年来发现的具有酪氨酸激酶活性的生长因子受体基因，它与FLT3配体结合能诱导受体自主磷酸化，并通过各种细胞浆相关蛋白的传导激活信号而对造血发育过程起重要的调节作用。目前研究发现，20％左右急性髓系白血病（AML）患者出现FLT3基因近膜区框架内的串联重复（FLT3／ITD）突变，具有FLT3／ITD突变的AML患者预后差，
- 徐兵唐家宏宋小燕周淑芸胡斌
- 关键词：FLT3基因白血病患者FLT3配体
- 急性髓系白血病患者外周血细胞中FLT3基因表达与FLT3/ITD突变的关系及其意义被引量：2
- 2009年
- 背景与目的:研究表明FLT3/ITD突变的急性髓性白血病(acute myeloid leukemia,AML)患者预后差,但关于AML患者FLT3基因的表达水平在预后中的作用及其与FLT3/ITD突变关系的研究尚不充分。本研究探讨初治AML患者FLT3基因的表达水平与FLT3/ITD突变的关系及其临床意义。方法:建立实时荧光定量PCR检测FLT3基因表达水平及PCR检测FLT3/ITD突变的方法,分析79例初治AML患者FLT3基因水平、FLT3/ITD突变及与预后的关系。结果:22.7%(18/79)的AML患者存在FLT3/ITD突变。92.4%(73/79)的患者标本中可检测到FLT3基因表达,FLT3基因表达水平为0～7320,中位数为312,正常对照组未检测到FLT3基因的表达。FLT3基因高表达及FLT3/ITD突变AML组的白细胞计数及骨髓白血病细胞均显著高于低表达和无突变AML组(P<0.05)。FLT3基因高表达的AML组FLT3/ITD突变率(25.6%)同低表达的AML组(20.0%)相比,差异无统计学意义(P>0.05),FLT3/ITD突变AML患者FLT3基因表达中位数与无突变组比较差异也无统计学意义。FLT3/ITD突变组的完全缓解率(58.8%)显著低于无FLT3/ITD突变组(82.1%)(P<0.05);FLT3基因高表达AML组FLT3/ITD的完全缓解率(68.6%)同低表达AML组(84.2%)相比差异无统计学意义(P>0.05),但无FLT3/ITD突变组中,FLT3基因高表达组完全缓解率(69.2%)显著低于低表达组(93.3%)(P<0.05)。结论:FLT3高表达与FLT3/ITD突变之间无明显相关性,FLT3高表达对于无FLT3/ITD突变AML患者可能是一个预后不良的指标。
- 徐兵史鹏程宋小燕唐家宏周淑芸
- 关键词：白血病髓细胞急性FLT3实时定量PCR
- 实时荧光定量PCR检测白血病患者WT1基因表达及临床意义被引量：2
- 2007年
- 目的研究白血病患者WT1基因的表达水平及与临床预后的关系。方法建立实时荧光定量PCR检测WT1基因表达技术,并分析65例白血病患者WT1基因的表达水平及与临床预后的关系。结果建立的实时荧光定量PCR方法的标准曲线相关系数>0.99。急性髓性白血病(AML)和急性淋巴细胞白血病(ALL)患者WT1基因表达水平较正常对照组均显著升高(P=0.001)。慢性髓性白血病(CML)急变期患者WT1基因表达水平显著高于慢性期。WT1表达量与急性白血病发病时外周血白细胞计数、血红蛋白、血小板无明显相关关系。AML和ALL患者中WT1基因高表达患者与低表达病例CR率差异无显著性。急性白血病患者治疗缓解后WT1的表达量较治疗前显著下降(P=0.032)。随访显示WT1持续高表达或下降后又上升的患者呈现难治及复发。结论实时荧光定量PCR技术检测急性白血病患者WT1基因表达量可预测难治复发及用于MRD的检测。
- 李琳徐兵许文娟唐家宏
- 关键词：WT1基因急性白血病实时荧光定量PCRPCR检测
- 实时荧光定量PCR方法检测急性髓系白血病FLT3基因mRNA的表达被引量：6
- 2008年
- 目的构建检测急性髓细胞白血病FLT3基因mRNA表达的标准品重组质粒和荧光定量PCR方法，为进一步研究FLT3基因表达与急性髓细胞白血病的关系奠定基础。方法利用引物设计软件设计出扩增FLT3基因的引物和特异性荧光探针，提取K562细胞株总RNA，经RT—PCR扩增，产物纯化后与pUCm—T Vector连接，转化到大肠杆菌DH5α，筛选得到标准品的质粒FLT3P。建立荧光定量PCR检测FLT3基因技术方法，建立标准曲线并检测15例初治AML患者。结果重组质粒进行荧光定量PCR扩增出现强烈的荧光值增长，表明FLT3 cDNA已成功克隆。以10^6-10^2copies／出不同稀释水平的标准品进行荧光定量PCR扩增，所获得的α值与标准品浓度的对数存在良好线性关系，标准曲线回归系数为0.9998。AML病例FLT3表达水平显著高于正常对照组（P=0．017），且不同病例的表达水平存在较大差异。结论成功构建用于定量检测FLT3 mRNA表达的荧光定量PCR标准品和技术方法；AML病例FLT3表达水平显著增高。
- 唐家宏徐兵宋小燕胡斌
- 多重实时荧光定量PCR同时检测急性白血病患者WT1和MDR1基因表达水平方法的建立被引量：1
- 2011年
- 目的 构建可同时检测AL患者WT1和MDR1基因表达水平的多重实时荧光定量PCR方法.方法 提取K562细胞的总RNA,并逆转录扩增WT1和MDR1的cDNA,通过Bam H Ⅰ及BglⅡ酶切后连接成WT1和MDR1重组片段,对WT1和MDR1重组片段进行PCR扩增,PCR产物纯化后与pMD18载体进行连接,转化宿主菌DH-5α,构建载有WT1和MDR1基因的标准品重组质粒,用限制性核酸内切酶法和PCR法鉴定质粒.用FAM荧光标记MDR1探针、VIC荧光标记WT1探针,建立能在1个试管中同时检测WT1和MDR1基因表达水平的多重实时荧光定量PCR反应体系.应用该体系检测47例AL患者及32例对照者WT1和MDR1基因表达水平,比较两组之间WT1和MDR1基因表达水平的差异,并随访7例AL患者不同病程中WT1和MDR1基因表达水平的变化与临床预后的关系.结果 经EcoR1酶切及PCR法证实WT1和MDR1基因重组质粒已成功构建.所建立多重实时荧光定量PCR方法的灵敏度为102拷贝/μl;所建立标准曲线的R2分别为0.999和0.998.AL患者WT1和MDR1基因的表达水平中位数分别为37 000（163～6 370 000）拷贝/μg RNA和76 200（179～18 000 000）拷贝/μg RNA,显著高于对照组的258（0～643）拷贝/μg RNA和333（0～779）拷贝/μg RNA,差异有统计学意义（Z=6.755、6.736,P＜0.01）.对应用相同的诱导和巩固化疗方案治疗的7例AL患者进行随访,3例持续缓解患者中,WT1和MDR1的表达水平在初治时分别为2 170和86 900、1 130和5 860、1 170和586拷贝/μg RNA,治疗后WT1和MDR1的表达水平明显下降,分别为370和560、138和980、150和690拷贝/μg RNA,此3例患者获长期完全缓解.在3例完全缓解后复发患者中,WT1和MDR1表达水平在初治时分别为1 600和11800、24 800和968、48 200和1 100 000拷贝/μg RNA,在化疗获得完全缓解后均降低,但在随后治疗过程中,WT1、MDR1表达量又逐渐升高,分别为20 314和25 660、184 364和31 530、15 680和878 000拷贝/μg RNA,此3例患者最终均出现临床复发.
- 徐兵宋小燕杨柳许文娟黄芬郭绪涛周淑芸
- 关键词：白血病P糖蛋白聚合酶链反应
- 一步法实时荧光定量PCR检测白血病WT1基因mRNA被引量：2
- 2008年
- 目的构建RT-PCR一步法实时荧光定量PCR检测WT1基因mRNA表达的方法,准确定量检测白血病患者微小残留病,指导临床判断预后和早期预测复发。方法从K562细胞提取的RNA用特异性引物扩增WT1基因,pMD18-T载体克隆法构建荧光定量PCR标准模板,建立RT-PCR一步法实时荧光定量PCR检测WT1基因方法,并对该方法的灵敏度、重复性和稳定性进行检测。结果构建的RT-PCR一步法实时荧光定量PCR方法的灵敏度达10-4水平;以拷贝数为1.0×106~1.0×102cps/ml的标准品,分别进行RT-PCR一步法实时荧光定量PCR扩增后,标准品的Ct值与该标准品模板起始浓度的对数存在线性关系,r值达0.998;管间和批间的变异系数均小于8%。结论所建立RT-PCR一步法实时荧光定量PCR检测WT1基因方法的灵敏度、重复性和特异性好;RT和PCR反应过程一步完成,更简便快捷,减少加样和污染机会,更适合临床检测。
- 许文娟徐兵李冰
- 关键词：白血病WT1基因
- 联合定量检测急性髓系白血病患者MDR1和WT1基因表达及临床意义被引量：1
- 2008年
- 目的联合定量检测初治急性髓系白血病（AML）患者MDR1及WT1基因的表达水平，探讨MDR1与WT1的表达量在AML耐药中作用及相互关系。方法构建实时荧光定量PCR检测WT1和MDR1基因表达水平技术，并检测63例初治AML患者WT1和MDR1基因的表达量及与临床疗效的关系。结果63例初治AML患者MDR1基因表达（拷贝／μg RNA）的中位数为2863（413—3410000），WT1基因表达为52700（7731—1020000）。10例正常对照组MDR1和WT1基因表达水平为337（125—840）和849（635—1402）。初治AML患者MDR1和WT1基因表达水平均显著高于正常对照组（P〈0．001）。且MDR1与WT1基因表达水平呈相关性（P=0．004）；FAB各亚型中MDR1和WT1基因表达水平差异无统计学意义（P〉0．05）；遗传学危险度分级的高、中、低危3组的WT1和MDR1基因表达水平差异无统计学意义（P〉0．05）。FLT3-ITD突变阳性组MDR1基因表达水平与突变阴性组相比差异无统计学意义（P〉0．05）。FLT3-ITD突变阳性组的WT1基因表达水平显著高于阴性组（P〈0．05）。AML患者中WT1和MDR1基因共同高表达组完全缓解率显著低于共同低表达组（P〈0．05）。结论AML患者MDR1和WT1基因表达水平存在相关性；联合检测AML患者MDR1和WT1基因表达量更能早期预测预后。
- 徐兵宋小燕李琳许文娟唐家宏
- 关键词：白血病聚合酶链反应
- 同时检测WT1和mdr1基因多重荧光实时定量PCR标准品的构建
- 2007年
- 绝大多数急性白血病患者存在WT1基因异常高表达，其异常表达程度也与难治复发白血病有关，并可作为“泛白血病”标志检测指标监测微量残留病（MRD）”。最近有研究发现急性白血病mdr1和WT1基因表达水平有明显的相关性，但目前国内外研究一般是分别对WT1和mdr1基因进行单独检测，操作繁琐且不能准确了解同一标本两者的关系。多重荧光实时定量PCR是指在PCR体系中加入多个荧光基团，设计不同的引物在同一反应体系中同时对多个靶基因分子进行扩增，通过连续监测不同荧光信号强度的变化来实时监测不同待测基因的表达量，最后通过标准曲线对不同未知起始模板进行定量分析的方法。
- 宋小燕徐兵许文娟
- 关键词：荧光实时定量PCRMDR1基因WT1急性白血病患者标准品
- 血液肿瘤患者FLT3/ITD基因突变的检测及临床意义被引量：7
- 2007年
- 目的检测血液肿瘤患者FLT3/ITD基因突变,探讨其突变的临床意义。方法2001—2005年对南方医科大学南方医院血液科332例血液肿瘤患者,采用聚合酶链反应(PCR)方法检测FLT3/ITD基因突变。结果FLT3/ITD基因突变阳性率分别为急性髓性白血病(AML)22.3%(23/103)、慢性髓性白血病急变期(CML-BC)6.5%(2/31)、骨髓增生异常综合征(MDS)5.6%(2/36)和急性淋巴细胞白血病(ALL)2.6%(2/76)。而慢性髓性白血病慢性期(CML-CP)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、多发性骨髓瘤(MM)和非霍奇金淋巴瘤(NHL)均未发现FLT3/ITD基因突变。FLT3/ITD基因突变阳性AML患者外周血WBC计数及骨髓白血病细胞比例显著高于FLT3/ITD基因突变阴性AML患者(P<0.05),FLT3/ITD基因突变阳性AML患者完全缓解后18个月内累计复发率(63.6%)显著高于FLT3/ITD基因突变阴性AML组(27.7%)(P<0.05)。结论FLT3/ITD基因突变检测对血液肿瘤预后有一定意义;FLT3/ITD基因突变AML患者预后差。
- 徐兵唐家宏李琳李冰
- 关键词：血液肿瘤聚合酶链反应预后
- 急性髓细胞白血病患者CD56抗原表达与MDR1基因表达量的关系研究被引量：4
- 2009年
- 目的研究初治急性髓细胞白血病（AML）患者CD56抗原表达与多药耐药（MDR）1基因表达量的关系，探讨CD56抗原表达与MDR1基因表达量在AML耐药中的作用及相互关系。方法采用流式细胞术（FCM）和建立实时荧光定量PCR技术分别检测79例AML患者CD56抗原表达及MDR1基因表达水平并分析两者之间的关系及临床意义。结果24．1％AML患者表达CD56抗原，FAB亚型中M5AML患者表达阳性率高于其他亚型。遗传学危险度分级高危组患者CD56抗原表达阳性率显著高于中危组（P〈0．01），伴t（8：21）AML患者CD56抗原表达阳性率（57．1％）显著高于其他低危组AML（P〈0．05）。CD56抗原表达阳性初治AML患者MDR1基因表达水平显著高于表达阴性患者（P〈0．001）。MDR1基因高表达且CD56抗原阳性AML组的CR率（58．8％）显著低于MDR1基因低表达且CD56表达阴性组（89．2％，P〈0．01）。结论AML患者CD56抗原表达与MDRI基因表达水平存在相关性；同时定量检测MDR1基因表达及CD56抗原表达更有助于判断预后。
- 徐兵萧平难宋小燕史鹏程易正山周淑芸
- 关键词：急性髓细胞白血病
