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HPLC法测定辣椒秸秆中辣椒素和二氢辣椒素含量被引量：10: 2012年; 目的:检测分析超越馨香和福椒六号辣椒品种秸秆不同时期叶片、侧枝、主杆部位的辣椒素与二氢辣椒素含量,为有效利用辣椒秸秆提供依据。方法:辣椒秸秆分成叶片、侧枝、主杆,60℃烘干粉碎,与甲醇溶液充分混合,采用HPLC法测定辣椒素和二氢辣椒素含量,并用精确度、浓缩、重复性、稳定性和加样回收率试验检验测定方法的可靠性。HPLC色谱条件:采用Agilent C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,以甲醇-超纯水(85:15)为流动相,流速1 mL·min-1,检测波长280 nm,柱温37℃。结果:辣椒素与二氢辣椒素的标准和浓缩曲线呈显著的线性变化;连续5次进样,RSD分别为0.13%和0.08%;重复性试验,样品辣椒素和二氢辣椒含量的RSD分别为1.7%和2.7%;稳定性试验,12 h内供试品溶液中辣椒素和二氢辣椒素浓度的RSD分别为2.3%和1.7%;回收率分别为95.8%和94.3%。除超越馨香,辣椒素和二氢辣椒素含量在不同收获时间和部位之间均存在显著差异,并存在时间和部位的交互效应,叶片辣椒素和二氢辣椒素含量显著高于侧枝和主杆(P<0.05)。结论:本研究采用HPLC法检测辣椒秸秆中辣椒素和二氢辣椒素含量的方法是可行的;辣椒秸秆中含有较高浓度的辣椒素和二氢辣椒素,其含量与品种、部位和采收时间有关。; 周卫东陆相龙邵涛王亚琴姚宏霏赵鑫郑会超; 关键词：采收时间辣椒素高效液相色谱

兔皮肤真菌病流行病学调查及病原分离鉴定被引量：2: 2014年; 兔皮肤真菌病已成为当前危害养兔业最为严重的皮肤病,近年来在我省及全国各地流行,由于该病的传染性极强,兔场一旦感染便很快传遍整个兔场,也由于该病的顽固性,染病兔场很难根除,因此严重影响养兔业的发展和养殖者的经济效益。有许多原来生产效益很好獭兔场,由于发生了皮肤真菌病,其对仔兔的感染率达到90%以上,严重影响兔子的生长以及皮张的质量,采取的各种防治措施均难以收到良好的效果,对獭兔场造成毁灭性的打击。; 韦强肖琛闻季权安刘燕鲍国连; 关键词：皮肤真菌病兔场流行病学调查病原分离鉴定犬小孢子菌

鸭坦布苏病毒抗体间接ELISA检测方法的建立和应用被引量：6: 2014年; 为建立特异性和敏感性较高的鸭坦布苏病毒（DTMUV）抗体检测方法,采用原核表达系统对DTMUV E蛋白的DⅢ结构域进行了双串联融合表达,SDS-PAGE电泳结果显示目的蛋白大小约25 Ku.Western blot结果显示,经亲和层析纯化的重组蛋白能与DTMUV阳性血清发生特异性反应.以纯化的重组DⅢ蛋白作为包被抗原,初步建立了检测DTMUV血清抗体的间接ELISA方法.采用梯度稀释法对ELISA各种反应条件进行优化,确定最适工作条件.重组抗原最适包被浓度为5 μg/mL,血清的最佳稀释度为1∶100,兔抗鸭酶标抗体最适稀释度为1∶1000;抗体临界值S/P≥0.336判定为阳性,S/P≤0.287判定为阴性,介于两者之间为可疑.该方法检测禽流感病毒、鸭源新城疫、鸭甲肝病毒、鸭圆环病毒、鸭细小病毒、经典呼肠孤病毒及新型鸭呼肠孤病毒等血清均为阴性,4个批次批内与批间重复试验的OD值变异系数分别为6.21％～7.27％和3.4％～7.2％,显示该法具有很好的特异性、稳定性和重复性.用建立的间接ELISA与中和试验分别对108份疑似鸭坦布苏病血清样品进行检测,两种方法的阳性符合率为83.3％.; 余斌华炯钢刘跃生赵灵燕倪征叶伟成云涛陈柳徐辉张存; 关键词：间接酶联免疫吸附试验

兔皮肤真菌病流行病学调查及病原分离鉴定: 兔皮肤真菌病已成为当前危害养兔业最为严重的皮肤病,近年来在我省及全国各地流行,由于该病的传染性极强,兔场一旦感染便很快传遍整个兔场,电由于该病的顽固性,染病兔场很难根除,因此严重影响养兔业的发展和养殖者的经济效益。有许多...; 韦强肖琛闻季权安刘燕鲍国连; 文献传递

表达鸭坦布苏病毒E蛋白的重组鸭瘟病毒的构建及其生物学特性被引量：3: 2015年; 为开展鸭瘟病毒-鸭坦布苏病毒二联苗的研究,将密码子优化的鸭坦布苏病毒(DTMUV)E基因插入转移载体p EP-BGH-end构建了p EP-BGH-E重组表达质粒。在鸭瘟病毒疫苗株细菌人工染色体(p DEVvac)的基础上,首先通过Red E/T两步重组法构建了EF1启动子替换GFP基因CMV启动子的p DEV-EF1突变体克隆,并将p EP-BGH-E质粒上的重组表达框p CMV-E-BGH-p A再次通过两步重组克隆至p DEV-EF1突变体的US7和US8基因之间,构建了携带有外源基因DTMUV E的突变体克隆p DEV-E。用磷酸钙法转染鸡胚成纤维细胞(CEFs)获得了重组病毒r DEV-E。病毒蚀斑大小测定结果显示,r DEV-E在CEFs上的蚀斑面积较亲本株相比稍有减少。Western blotting分析表明,外源蛋白E在病毒感染的CEFs细胞中成功表达。; 陈柳余斌倪征华炯钢叶伟成云涛张存; 关键词：鸭瘟病毒 E蛋白细菌人工染色体重组病毒

IL8基因3'UTR SNPs与中国荷斯坦牛泌乳性状的关联分析被引量：1: 2015年; 为明确白细胞介素8基因(IL8)在浙江省内不同牛种群体间的遗传变异情况,应用PCR-SSCP技术检测了中国荷斯坦牛、温岭高峰牛和温州水牛IL8基因3'UTR的多态性。PCR-SSCP和测序结果表明,中国荷斯坦牛和温岭高峰牛在IL8基因3'非翻译区存在3个完全连锁的SNP(g.2831A/G,g.2904 T/C,g.3030 G/A)构成的单倍域,温州水牛在这些位点均表现为突变纯合型。利用一般线性模型分析IL8基因3'UTR的3个SNPs对中国荷斯坦牛305 d校正产奶量、乳脂量、乳蛋白率及体细胞评分的影响,发现这些SNPs可显著影响中国荷斯坦牛305 d校正产奶量(P<0.01)和乳脂率(P<0.05)。; 方远洋宋雪梅姜俊芳蒋永清; 关键词：SNPS 中国荷斯坦牛温岭高峰牛温州水牛

不同猪种肉质相关基因Hal、RN和FTO的多态性研究被引量：13: 2012年; 为了明确肉质相关基因氟烷基因(Hal)、酸肉基因(RN)和脂肪肥胖相关基因(FTO)在国内外不同猪种群体间的遗传变异特性,本研究以大约克、长白、杜洛克和金华猪等猪种群体为研究对象,应用PCR-RFLP技术分别检测了Hal、RN和FTO基因的多态性,并分析了FTO基因上2个多态位点g.276G>T和c.594C>G的遗传变异情况。结果表明:(1)在杜洛克猪中发现了Hal的基因型Hal NHal n,其频率为0.166,但未发现基因型Hal n Hal n,其它猪种群体中仅检测到了基因型Hal NHal N;(2)在已检测的所有猪种群体中只检测到RN基因的rn/rn基因型,未发现rn/RN和RN/RN基因型;(3)在FTO的g.276G>T位点上,金华猪呈现单态,其它猪种群体均呈现多态。在FTO的c.594C>G位点上,4个猪种群体均呈现多态,3个外来猪种群体均以CC基因型频率较高,而金华猪则以GG基因型频率较高。研究结果提示,由于Hal基因在养猪生产中的利弊双重性,因此在某些猪种群体中仍然存在较高频率的Hal NHal n基因型。此外,结合FTO基因的生理功能和已有的研究结果,可在特定的猪群中将其作为影响猪肉质性状的候选基因。本研究发现FTO的基因型分布在我国优良地方猪种金华猪与国外3个种猪群间存在较大差异,为深入研究不同品种猪的肉质形成机理提供了基础数据。; 陶新邓波门小明徐子伟; 关键词：RN基因 PCR-RFLP

MicroRNA-21参与调控金华猪肝脏生长发育被引量：4: 2013年; microRNAs是一种小分子非编码RNA,广泛参与细胞的生长发育、分化和凋亡等生物学过程.microRNA-21(miR-21)是一个在实体肿瘤中高表达的miRNA,可促进癌细胞增殖.为了研究miR-21在金华猪生长过程中的作用,本试验选取了金华猪80日龄胚胎的心、肝、脾、肺、肾、小肠、胰脏、皮脂组织,进行miR-21组织表达谱研究,结果发现miR-21在肝脏中的表达最高.进一步以肝脏为对象,研究miR-21在金华猪不同生长阶段中的表达,结果显示胚胎80日龄的miR-21表达量最高(P<0.01),其次是胚胎期的60日龄和105日龄,出生后1至120日龄miR-21的表达量均维持在较低的水平且相互之间差异不显著(P>0.05).利用KEGG软件对miR-21预测的靶基因进行通路归类分析表明,miR-21参与细胞代谢、生长等过程,从中选择2个抑制细胞增殖的靶基因,增强子结合蛋白(CCAAT/enhancer binding protein,Cebpa)和原肌球蛋白1基因(tropomyosin 1,Tpm1),qRT-PCR检测二者在不同生长阶段的mRNA表达量,结果其表达趋势与miR-21相反,其中胚胎期80 d表达量最低(P<0.05).综上表明,miR-21可能具有促进胚胎肝脏生长的作用.; 李艳华马义涛周辉云王颖徐宁迎; 关键词：MICRORNA-21 金华猪肝脏

不同饲养方式对蛋鸭产蛋性能的影响及其机制被引量：11: 2013年; 旨在探讨单笼饲养、双笼饲养、散养和网上平养四种养殖模式对蛋鸭(Anas platyrhynchos)产蛋性能的影响及其影响机制。191羽优质蛋鸭品种山麻鸭被分成单笼、双笼、网上平养、散养四组,记录其产蛋率和日耗料量,研究不同饲养模式对产蛋性能的影响。同时,应用real-time PCR技术检测在不同养殖模式下山麻鸭下丘脑、垂体、卵巢、肾上腺等组织中产蛋相关基因的表达,筛选出其中差异表达基因。结果表明,双笼饲养的山麻鸭产蛋性能和饲料转化率最低,单笼饲养的产蛋性能最佳。产蛋相关基因差异表达检测发现,在不同饲养模式下,促肾上腺激素释放激素(corticotropin-releasing hormone,CRH)基因在下丘脑和垂体组织中,阿黑皮素原(proopiomelanocortin,POMC)基因在垂体组织中的表达无显著差异。在双笼饲养模式下,黑素皮质素受体(melanocortin 2 receptor,MC2R)基因在山麻鸭垂体中的表达量最高,催乳素受体(prolactin receptor,PRLR)基因在卵巢中表达量最高,而骨形态发生蛋白4(bone morphogenetic proteins 4,BMP4)基因在卵巢中表达量最低。结果提示,(1)双笼饲养会导致蛋鸭的产蛋性能下降;(2)双笼饲养的蛋鸭可能长期处于应激状态,诱使垂体中MC2R基因高表达,进而调控HPA轴激素分泌,抑制HPG轴的活性,使得卵巢中的PRLR及BMP4等产蛋相关基因异常表达,两个信号通路交互作用,最终影响了蛋鸭的产蛋性能。; 黄江南韦启鹏王德前刘林秀谢金防田勇卢立志; 关键词：HPA 山麻鸭饲养模式产蛋性能

FSHβ基因多态性及对不同品种猪繁殖性状的影响被引量：12: 2013年; 选取FSHβ基因为影响猪繁殖性状候选基因,对8个猪种906头猪进行FSHβ基因的多态性分析,并采用最小二乘法分析了其对总产仔数、产活仔数和妊娠期的遗传效应。结果显示,FSHβ基因在嘉兴黑猪、巴马香猪、金华猪和八眉猪中几乎只有A等位基因,在美系杜洛克和嵊县花猪中以B等位基因为主,只有在大约克、长白、台系杜洛克中A,B等位基因均衡分布。遗传效应分析表明,在初产美系杜洛克猪中,BB基因型妊娠期比AB型缩短0.94 d(P<0.01);在初产大约克猪中,BB基因型妊娠期比AA型缩短1.61 d(P<0.01);在经产长白猪中,AB型产仔数和产活仔数分别比BB型多了2.27头(P<0.05)和2.31头(P<0.05)。总体而言,FSHβ基因对不同品种母猪繁殖性能效应各有差异,在初产美系杜洛克和大约克中BB基因型妊娠期更短,在经产长白猪中AB型产仔数和产活仔数更多。; 戴丽荷胡锦平褚晓红徐如海路伏增翁经强黄少珍; 关键词：FSHΒ基因繁殖性状

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浙江省重点科技创新团队项目(2010R50027)

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