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水稻种子特异表达启动子Ole18的克隆、序列分析及功能验证被引量：2: 2015年; 【目的】克隆水稻种子特异表达启动子Ole18,为实现外源基因在水稻胚、糊粉层特异表达奠定基础。【方法】采用PCR克隆扬稻6号Ole18启动子序列,并连接至p MD20-T载体上,经PCR验证后进行测序,并对测序结果进行生物信息学分析;用克隆获得的Ole18启动子取代p CAMBIA1301载体中GUS基因上游的Ca MV35S启动子构建重组表达载体,经农杆菌介导转化台粳9号,获得转基因植株,对其种子进行GUS染色。【结果】克隆获得大小为1261 bp的Ole18启动子序列,与japonica cultivar-group、IR36的18 k D Oleosin基因启动子同源性为99%。启动子预测软件NNPP推测该序列具有启动子的功能,含有种子特异表达启动子所必需的TATA-box、CAAT-box等顺式调控元件。GUS组织化学染色结果表明,该启动子序列能够驱动GUS基因在水稻种子胚及糊粉层中表达。【结论】克隆获得的Ole18启动子具有启动活性,且具有胚及糊粉层特异性表达功能。; 黄昕颖程祖锌肖长春黄志伟郑金贵; 关键词：基因克隆

籼稻苯丙氨酸解氨酶基因的克隆与原核表达被引量：3: 2012年; 黄酮类化合物具有抗氧化、清除自由基等重要功能[1],是植物苯丙烷代谢途径的产物,苯丙氨酸解氨酶（PAL,EC4.3.1.5）是黄酮类生物合成途径的第一个关键酶和限速酶[2-4],PAL基因的过表达可显著提高植物中的黄酮含量[5]。因此分离克隆PAL基因对研究黄酮类物质的代谢调控具有重要意义。目前,已有拟南芥[6]、烟草[7]、豌豆[8]、番茄[9]、葡萄[10]、银杏[11]、香蕉[12]、菜心[13]、金荞麦[14]、夏枯草[15]等植物PAL基因克隆的报道。本实验室从大量的水稻种质资源中筛选出糙米富含黄酮的优异种质——籼型黑糯稻M-1[16],为籼稻PAL基因的克隆提供了极好的种质材料。; 黄志伟郑亚凤许明程祖锌郑金贵; 关键词：籼稻黄酮苯丙氨酸解氨酶原核表达

响应曲面分析法优化葡萄籽原花青素提取工艺的研究被引量：36: 2011年; 采用响应曲面分析法对葡萄籽原花青素的提取工艺进行优化。对提取率影响因素进行单因素分析后,以Box-Behnken设计(BBD)评价提取剂浓度、料液比、提取时间和提取温度4个因素显著性和交互作用的分析,得出葡萄籽原花青素的最佳提取条件为:丙酮浓度75%,料液比1∶10(w/v),时间44 min,温度51℃。在该条件下,葡萄籽原花青素提取率的预测值为2.90%,验证为2.88%,纯度为55.92%。; 廖素凤陈剑雄黄志伟杨志坚许明廖通郑金贵; 关键词：葡萄籽原花青素

植物类胡萝卜素代谢工程与应用被引量：6: 2011年; 类胡萝卜素是人类所需要的重要营养成分之一,不仅具有抗氧化、预防肿瘤和心血管等疾病的作用,而且还是人体合成维生素A的前体。全球大约有280万～330万学龄前儿童出现维生素缺乏(vitamin A deficiency,VAD)的临床症状;近2亿儿童处于半缺乏状态。通过对植物类胡萝卜素生物合成途径的解析,以及对参与这一代谢过程的酶及其调控机制的深入了解,目前已经可以通过基因工程在主要农作物中组织特异性地促进类胡萝卜素的合成与积累。从理论上已经可以利用转基因植物来减少VAD的出现。该文简要回顾近年来这一领域的研究进展。; 陈中媛卢山黄继荣; 关键词：类胡萝卜素维生素A 生物合成代谢工程

水稻胚乳特异性启动子的克隆及序列分析被引量：4: 2010年; 目的:克隆获得水稻胚乳特异表达启动子pGluB-1。方法:采用PCR方法从水稻"台粳9号"基因组DNA中扩增出pGluB-1启动子序列,并克隆至pMD20-T载体上,酶切鉴定后进行测序并对测序结果进行生物信息学分析。结果:获得大小为1 353bp的pGluB-1启动子序列,该序列与已报道序列的同源性为97%。启动子功能预测及顺式作用元件分析表晨所克隆的启动子序列含有ACGT基序、AACA基序、GCN4基序和醇溶蛋白框等胚乳特异表达必需的调控元件,其序列差异可能是由于不同品种个体差异及多态性的影响。结论:成功克隆出pGluB-1启动子,为实现外源目的基因在水稻胚乳中特异性表达奠定了实验基础。; 许明张铃黄志伟程祖锌杨志坚; 关键词：水稻

竹节人参角鲨烯合成酶基因的克隆与生物信息学分析被引量：3: 2013年; 人参（Panax ginseng C．A．Mey．）属于五加科（Araliaceae）人参属（Panax）植物，是传统的名贵中药材，人参属的所有植物均具有较高的药用价值，其主要活性成分是皂苷[1-2]。人参根的总皂苷含量为2％～7％，而竹节人参（Panax japonicus C．A．Mey．）根的总皂苷含量高达15％以上，约为前者的2—7倍、西洋参的3倍，是总皂苷含量最高的人参属植物[2-3]。。; 黄志伟郑亚凤许明郑金贵; 关键词：竹节人参人参皂苷基因克隆

籼稻胚乳特异性启动子Gt1的克隆及其功能验证被引量：1: 2010年; 从籼稻(Oryzasativa L.ssp.indica)品种谷秆两用稻‘东南201’中克隆获得胚乳特异性启动子Gt1;序列全长为929 bp;含胚乳中特异表达所必需的正调控元件GCN4 motif(TGAGTCA)与Skn-1 motif(GT-CAT)等。与已报道的粳稻品种‘日本晴’的序列相比,籼稻‘东南201’Gt1启动子序列仅在-507 bp处发生一个碱基突变,在-268、-267、-194、-193 bp位置处分别缺失1个碱基;但在已知功能motif,两者没有任何差异。用Gt1替代35SCa MV启动子驱动GUS基因转化水稻‘台粳9号’,结果表明GUS基因仅在胚乳中特异表达,而在其它组织中未表达。克隆的籼稻谷蛋白基因Gt1的启动子序列,可为进一步开展水稻品质分子改良提供必要手段。; 刘峰赵伊英郑金贵; 关键词：转基因

籼稻GAD基因的克隆、序列分析及其植物表达载体构建: 2012年; 【目的】克隆籼稻谷氨酸脱羧酶(GAD)基因的全长cDNA,并进行序列分析和植物表达载体构建,为改良水稻的营养保健品质奠定基础。【方法】根据已知植物GAD基因的保守区域设计引物,以高GABA籼稻品系"新-9-4"的胚芽为材料,利用RT-PCR和RACE技术克隆GAD基因的全长cDNA;扩增其编码序列,构建双T-DNA植物表达载体。【结果】扩增获得长1962bp的籼稻GAD基因全长cDNA(OsiGAD),包含1479bp的开放阅读框,编码492个氨基酸。OsiGAD与已报道的水稻GAD基因OsGAD1、OsGAD2、OsGAD3的核苷酸序列同源性分别为67.1%、69.4%、98.3%,推导氨基酸序列的同源性分别为77.6%、70.1%、100.0%。OsiGAD蛋白序列具有磷酸吡哆醛结合位点和与钙调蛋白结合的C端延伸区域;构建了其具有水稻胚乳特异表达特性的双T-DNA植物高效表达载体pCDMAR-OsiGAD-hpt,选择标记基因和OsiGAD基因分别位于此载体的两个不同T-DNA区。【结论】克隆获得的籼稻GAD基因OsiGAD长1962bp,并成功构建了其双T-DNA植物高效表达载体。; 黄志伟许明林忠辉蔡小玲郑金贵; 关键词：籼稻

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