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长沙市科技计划项目(K1104047-31)

作品数：5 被引量：5H指数：1
相关作者：刘如石邱义兰李桑刘胜姿许凤更多>>
相关机构：湖南师范大学湖南农业大学更多>>
发文基金：长沙市科技计划项目湖南省科技计划项目湖南省自然科学基金更多>>
相关领域：生物学医药卫生更多>>

文献类型

  • 5篇中文期刊文章

领域

  • 3篇生物学
  • 2篇医药卫生

主题

  • 3篇原核表达
  • 2篇单克隆
  • 2篇单克隆抗体
  • 2篇免疫
  • 2篇免疫反应
  • 2篇免疫反应性
  • 2篇免疫原性
  • 2篇抗体
  • 2篇克隆
  • 2篇病毒
  • 1篇单克隆抗体制...
  • 1篇蛋白
  • 1篇电洗脱
  • 1篇衣壳
  • 1篇衣壳蛋白
  • 1篇杂交
  • 1篇杂交瘤
  • 1篇杂交瘤细胞
  • 1篇沼气
  • 1篇沼气池

机构

  • 5篇湖南师范大学
  • 1篇湖南农业大学

作者

  • 5篇邱义兰
  • 5篇刘如石
  • 4篇刘胜姿
  • 4篇李桑
  • 3篇邱果
  • 3篇李烨
  • 3篇许凤
  • 2篇吴俊文
  • 1篇孙一兵
  • 1篇李小曼
  • 1篇郭向荣
  • 1篇颜亨梅
  • 1篇张琳
  • 1篇廖旻晶
  • 1篇何赛
  • 1篇郑姣
  • 1篇鲁健
  • 1篇熊璎珞

传媒

  • 2篇生命科学研究
  • 2篇激光生物学报
  • 1篇生物工程学报

年份

  • 1篇2015
  • 2篇2014
  • 1篇2013
  • 1篇2012
共 5 条 记 录，以下是 1-5
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排序方式：
戊型肝炎病毒IV型衣壳蛋白缺失突变体原核表达与性质
2014年
采用PCR技术扩增基因IV型HEV(Hepatitis E Virus,HEV)开放阅读框2(Open Reading Frame 2,ORF2)的缺失突变体(aa384-606),亚克隆到表达载体后,转化到大肠杆菌中进行诱导表达,表达蛋白命名为rP24。SDS-PAGE和免疫印迹实验表明,rP24获得了高效表达,且和单克隆抗体15B2具有强的反应活性。rP24经过包涵体洗涤、溶解复性、离子交换层析和分子筛层析纯化后,免疫印迹实验表明,纯化rP24能与抗HEV ORF2中和单克隆抗体8C11以及HE(Hepatitis E,HE)阳性血清发生很强的免疫反应性,说明rP24上具有构象型中和表位,模拟了HEV衣壳蛋白的空间结构。动态光散色测量结果表明,rP24的平均水化半径为7.48 nm;纯化rP24免疫动物实验表明,rP24具有强的抗原性,小鼠阳转周期短,抗体持续时间长;纯化rP24作为包被抗原检测HE阳性血清和阴性血清,结果显示rP24对HE阳性血清和阴性血清检出率与北京万泰公司的抗HEV-IgG检测试剂盒的检出率一致。这些实验结果说明,具有较好免疫反应性和免疫原性的rP24获得了高效表达,该蛋白模拟了天然病毒衣壳蛋白的中和表位,为进一步研究基因I型和基因IV型HEV感染不同宿主细胞差异的分子机制奠定了基础。
邱义兰吴俊文邱果李桑李烨刘胜姿刘如石
关键词：戊型肝炎病毒衣壳蛋白原核表达免疫反应性免疫原性
人β-actin蛋白原核表达及其单克隆抗体制备
2012年
为获得分泌抗人β-actin蛋白单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞,通过在大肠杆菌中原核表达人β-actin蛋白,以纯化的人β-actin蛋白作为抗原免疫BALB/c小鼠。经过细胞的融合及筛选获得1株能稳定分泌抗人β-actin蛋白McAb的杂交瘤细胞,命名为2B4。采用间接ELISA和Western blot方法对McAb的特异性、稳定性和适用范围进行鉴定。结果显示:蛋白的相对分子质量为43 kDa,可溶于8 mol/L尿素;杂交瘤细胞上清的抗体效价为1×105,腹水的抗体效价为1×107;间接ELISA结果表明,杂交瘤细胞在体外传20代或液氮冻存3个月后,分泌的抗体效价不变;37℃保存24 h后,抗体的效价开始下降。Western blot结果显示,单克隆抗体识别人、鼠、兔和鱼的β-actin蛋白,与其发生特异性反应。2B4分泌的单克隆抗体可以广泛的应用于细胞生物学和免疫学试验,具有良好的应用价值。
吴俊文许凤熊璎珞鲁健邱义兰刘胜姿李烨刘如石
关键词：原核表达电洗脱单克隆抗体Β-ACTIN
抗HCMV Pp65蛋白单克隆抗体的制备及性质研究被引量：1
2014年
人类巨细胞病毒(Human cytomegalovirus,HCMV)是一种机会性感染疱疹病毒,在人群中感染比较常见,但在免疫缺陷个体与新生儿中可引起严重的疾病。HCMV Pp65是HCMV活动感染的主要标志,也是临床检验检测HCMV感染的重要靶标。为研发抗HCMV Pp65蛋白单克隆抗体作为临床免疫检测HCMV感染的关键原料,本研究采用重组表达的HCMV Pp65蛋白免疫BALB/c小鼠,将免疫小鼠淋巴结细胞与sp2/0细胞融合,采用间接ELISA法筛选阳性克隆与效价测定,再用Western blotting进行抗体特异性鉴定,最后用免疫捕获PCR和免疫荧光法评价其应用前景。最终获得了1株能稳定分泌高效价的抗HCMV Pp65单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为8D6。Western blotting及间接ELISA检测其效价分别达1∶4 000和1∶105;细胞免疫荧光与免疫捕获PCR实验结果说明,该杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体具有良好的亲和力和特异性,具有作为外周血细胞免疫荧光细胞化学和免疫捕获PCR检测HCMV临床感染的关键原料,也可作为双抗体夹心法检测HCMV临床感染的关键原料,为建立HCMV感染快速灵敏的临床诊断试剂打下了重要的基础。
邱果许凤邱义兰廖旻晶李烨刘胜姿李桑刘如石
关键词：人巨细胞病毒PP65蛋白杂交瘤细胞单克隆抗体
人巨细胞病毒pp65蛋白的原核表达及活性鉴定被引量：3
2013年
以病毒全基因组为模板,通过PCR技术扩增HCMV pp65基因编码序列,其产物连接到pMD18-T质粒,酶切并回收目的片段后克隆到表达载体pTO-T7,然后将重组质粒pTO-T7-pp65转化大肠杆菌ER2566,大量表达后将重组蛋白进行质谱法分析鉴定,再利用Western blot以及间接ELISA进行重组蛋白的活性及抗原性鉴定.结果显示:通过SDS-PAGE鉴定可知,大肠杆菌可能表达出了重组蛋白,质谱分析结果说明了重组蛋白为pp65蛋白,具有极高可信度,其相对分子质量约为63 kD,从Western blot和间接ELISA(enzyme linked immunosorbent assay)的结果可知,pp65蛋白作为抗原具有良好的免疫反应性与免疫原性,为制备相应的抗原诊断单克隆抗体打下了基础,同时也为开发HCMV IgG快速诊断ELISA试剂盒提供了可选原料.
许凤邱义兰邱果李桑何赛郑姣李小曼刘如石
关键词：免疫反应性免疫原性
乡村沼气池污泥微生物多样性的研究被引量：1
2015年
为了优化沼气池产气效率和开展污泥微生物多样性研究,通过对PCR-DGGE条件的优化,建立了农村户用沼气池污泥微生物16S r DNA V3区DGGE分析技术,通过DGGE技术分析了沼气池污泥中细菌和古细菌微生物多样性随沼气池深度的变化规律。同时通过构建污泥样品mcr A功能基因克隆文库,应用RFLP技术,开展了农村户用沼气池污泥样品中与次级代谢产物相关基因的功能基因多样性研究。结果显示,农村户用沼气池污泥中含有丰富的微生物资源,其中细菌群落受污泥深度因素影响小,而浅层污泥中古细菌群落与深层污泥中古菌群落却存在明显差异。所采集的沼气池污泥中含有较为丰富的产甲烷菌资源,其中可能存在类似功能或产生类似代谢物质的产甲烷菌。该结果为进一步优化群落结构、筛选功能基因提供了科学依据。
李桑张琳邱义兰刘胜姿孙一兵颜亨梅郭向荣刘如石
关键词：农村户用沼气池总DNA提取微生物多样性
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