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格列本脲对泡沫细胞形成的影响被引量：2: 2007年; 目的:研究格列本脲(glibenclamide)对THP-1单核巨噬细胞形成泡沫细胞的影响及机制。方法:体外培养人THP-1单核细胞系,由佛波酯(PMA)作用使其分化为巨噬细胞,后者再由乙酰化低密度脂蛋白(Ac-LDL)进行脂质负荷转变为泡沫细胞。不同质量浓度的格列本脲单独或与Ac-LDL共同作用于上述巨噬细胞,以放射性同位素标记底物法检测酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶(ACAT)活性的变化,油红O染色法检测泡沫细胞的形成,酶比色法检测细胞中的总胆固醇、游离胆固醇和胆固醇酯含量。结果:格列本脲使脂质负荷的巨噬细胞转变为泡沫细胞的数目减少,并明显抑制脂质负荷前后巨噬细胞中ACAT酶活性;随着格列本脲剂量增加,脂质负荷前后的巨噬细胞中胆固醇酯含量逐渐降低,呈剂量依赖性趋势。结论:格列本脲抑制泡沫细胞形成,其作用机制可能与其抑制ACAT酶活性和细胞中胆固醇酯含量有关。; 何平成蓓王洪星戚本玲; 关键词：酰基辅酶A 胆固醇酰基转移酶格列本脲胆固醇泡沫细胞

Effect of Tumor Necrosis Factor-α on Acyl Coenzyme A: Cholesteryl Acyltransferase Activity and ACAT1 Gene Expression in THP-1 Macrophages被引量：1: 2007年; In order to explore the effect and mechanisms of tumor necrosis factor-α （TNF-α） on the activity of the acyl coenzyme A： cholesteryl acyltransferase （ACAT）, THP-I monocytes were cul- tured and induced to differentiate into macrophages with phorbol ester. TNF-α （60 ng/mL） was added at different time points into the macrophage-containing medium and the ACAT enzyme activity was measured by quantifying the incorporation of [1-^14C] oleoyl CoA into cholesteryl esters. The expression of ACAT-1 protein and mRNA was respectively detected by Western blotting and RT-PCR in THP-1 macrophages 24 h after treatment with TNF-α （60 ng/mL）. The results indicated that ACAT activity in THP-I macrophages treated with TNF-α was increased in a time-dependent manner. The expression levels of ACAT-1 protein and mRNA were significantly increased in THP-I macrophages after treatment with TNF-α （P〈0.05）. It was suggested that TNF-α could increase the activity of ACAT in THP-1 macrophages by up-regulating the expression of ACAT-1 gene.; 何平成蓓王毅王洪星; 关键词：MACROPHAGES CHOLESTEROL ATHEROSCLEROSIS

TNF-α,ox-LDL对人单核细胞株U937胆固醇酰基转移酶1表达的影响: 2004年; 目的　观察肿瘤坏死因子 α (TNF α)和氧化型低密度脂蛋白 (ox LDL)对人单核细胞U937酰基辅酶A :胆固醇酰基转移酶 1(ACAT1)mRNA表达和蛋白质翻译的影响。方法　U937细胞培养到足够数量后 ,细胞计数传代分组 :①对照组 :加等量的培养基 ;②TNF α组 :加入TNF α ,使其终浓度为 10ng/ml;③ox LDL组 :加入ox LDL ,终浓度为 10 0 μg/ml。应用RT PCR检测ACAT1mRNA表达 ,蛋白定量应用免疫印迹法。结果　与对照组相比 ,TNF α组ACAT1mRNA表达显著增加 (0 5 73± 0 0 32vs0 990± 0 0 2 2 ,P <0 0 1) ,而ox LDL组ACAT1mRNA表达水平 (0 5 5 4± 0 0 2 6 )无显著变化。 3组之间ACAT1酶蛋白含量差异无显著性意义。结论　TNF α能促进A CAT1mRNA表达 ,但未见TNF α和ox; 成蓓王毅何平吴剑萍狄鸣王洪星; 关键词：TNF-Α OX-LDL 单核细胞株肿瘤坏死因子-Α TNF-Α

大鼠CnA/EGFP基因共表达的真核表达质粒的构建: 2007年; 目的:构建大鼠钙调磷酸酶A亚基(CnA)α基因/EGFP共表达的真核表达质粒,为研究钙调磷酸酶基因在缺血缺氧再灌注诱导的心肌细胞凋亡中的作用提供生物表达系统。方法:RT-PCR方法扩增大鼠CnA基因(约1 590 bp),克隆至T载体,经酶切鉴定和DNA测序证实CnA序列正确后,再用内切酶将CnA从T-CnA质粒中切出,与已插入报告基因IRES-EGFP基因片段的重组pShuttle2载体(pShuttle2-IRES-EGFP)连接,构建CnA/EGFP共表达的真核表达质粒pShuttle2-CnA-IRES-EGFP。结果:DNA测序结果显示扩增的CnA DNA序列与相应的GenBank(NM_017041)所公布的序列完全相同;NheⅠ和NotⅠ双酶切重组质粒pShuttle2-CnA-IRES-EGFP,1%的琼脂糖凝胶电泳分析可见大小分别为1 590和5 240 bp两条片段,与预期值相符。结论:成功构建了以增强型绿色荧光蛋白(EGFP)标记的大鼠CnA基因的真核表达质粒。; 沈小梅张巨艳成蓓; 关键词：钙调磷酸酶增强型绿色荧光蛋白心肌细胞

乙酰化低密度脂蛋白促进胆固醇酰基转移酶活性升高的机制研究被引量：8: 2004年; 目的 :研究乙酰化低密度脂蛋白 (Ac LDL)对人THP 1单核细胞 (MC)分化的巨噬细胞 (MP)酰基辅酶A、胆固醇酰基转移酶 1(ACAT 1)活性的影响及其机制。方法 :体外培养人THP 1单核细胞系 ,由佛波酯 (PMA)作用使其分化为MP ,后者再由乙酰化低密度脂蛋白Ac LDL进行脂质负荷转变为泡沫细胞。该过程中以放射性同位素标记底物法检测ACAT 1酶活性的变化 ,并用Westernblot法检测ACAT 1酶蛋白的表达及RT PCR法检测A CAT 1mRNA的水平。结果 :在MC分化为MP的过程中ACAT 1酶活性升高了 2倍 ,差异有统计学意义 (P <0 .0 5 ) ,酶蛋白及mRNA水平呈现类似变化趋势 ;Ac LDL作用于巨噬细胞 ,使ACAT1酶活性、酶蛋白及mRNA进一步升高 ,差异有统计学意义 (P <0 .0 5 )。结论 :MC分化为MP的过程中ACAT 1表达上调 ,使ACAT 1活性增强 ,而Ac LDL可进一步促进ACAT 1基因表达增加 ,升高ACAT 1活性。; 何平成蓓王毅王洪星; 关键词：动脉粥样硬化酰基辅酶A 低密度脂蛋白

泡沫细胞形成过程中TOLL样受体4表达的变化被引量：6: 2006年; 目的：研究人单核细胞系在分化为巨噬细胞及转化为泡沫细胞过程中 TOLL 样受体4(TLR-4)表达的改变及其机制。方法：体外培养人 THP-1单核细胞系,加入佛波酯(PMA)培养48h 使其分化为巨噬细胞,后者再加入氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)使转化为泡沫细胞,采用免疫细胞化学、蛋白质印迹法和逆转录聚合酶链反应 (RT—PCR)方法,检测 TLR-4蛋白表达及 TLR-4mRNA 表达的水平。结果：在单核细胞分化为臣噬细胞的过程中 TLR-4mRNA 及蛋白水平提高,差异具有显著性(P＜0.05)；在进一步转化为泡沫细胞过程中,mRNA 及蛋白水平又增高,与巨噬细胞相比差异有显著性(P＜0.05)。结论：单核细胞分化为泡沫细胞的过程中 TLR-4转录水平上调,蛋白量合成增加,从而可能提高泡沫细胞在动脉粥样硬化中的炎性反应能力。; 成蓓余其振柯丽白智峰; 关键词：TOLL 巨噬细胞动脉硬化

牛磺酸抑制THP-1细胞酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶-1表达被引量：1: 2005年; 目的:观察牛磺酸对人单核细胞系THP-1细胞酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶-1(ACAT-1)表达的影响。方法:在有或无干扰素-γ(INF-γ)的条件下,用不同浓度的牛磺酸与THP-1持续孵育不同的时间,RT-PCR检测ACAT-1mRNA水平,WesternBlot检测其蛋白表达。结果:牛磺酸显著下调THP-1的ACAT-1mRNA和蛋白表达水平(P<0.05～0.01,n=3),并呈时间和剂量依赖性效应。INF-γ促进ACAT-1mRNA和蛋白表达(P<0.05),该作用被牛磺酸部分抑制(P<0.01)。结论:牛磺酸抑制ACAT-1的基础表达和由INF-γ诱导的表达,这可能是其抗动脉粥样硬化的机制之一。; 柯丽成蓓余其振何平白智峰; 关键词：牛磺酸动脉硬化

格列本脲对平滑肌细胞及肌源性泡沫细胞内ACAT转录水平的影响被引量：6: 2006年; 目的:研究格列本脲(glibenclamide,优降糖)对酰基辅酶A[胆固醇酰基转移酶(ACAT)]mRNA水平的影响,探讨其对ACAT酶的调节水平。方法:在小鼠主动脉平滑肌细胞及肌源性泡沫细胞分别加入格列本脲,孵育24h,用半定量RT-PCR检测ACAT酶mRNA表达。结果:(1)平滑肌细胞转变为泡沫细胞后,ACATmRNA的表达均增加。(2)格列本脲抑制平滑肌源性泡沫细胞中ACAT酶的mRNA的表达。结论:格列本脲在转录水平抑制ACATmRNA的表达,抑制平滑肌细胞向泡沫细胞的转化,可作为防止动脉粥样硬化的有效药物。; 成蓓狄鸣雷健戴康马志强余其振王毅; 关键词：胆固醇酰基转移酶平滑肌细胞泡沫细胞格列本脲

氧化低密度脂蛋白对巨噬细胞Toll样受体-4的表达效应被引量：4: 2006年; 目的研究低密度脂蛋白(LDL)氧化对人单核细胞源巨噬细胞Toll样受体-4(TLR-4)表达的影响及其机制。方法用RPM I 1640培养基体外培养人THP-1单核细胞系,加入佛波醇肉豆蔻酸乙酸酯(PMA)培养48 h使其分化为巨噬细胞,加入氧化低密度脂蛋白(Ox-LDL)或LDL,用免疫细胞化学、蛋白质免疫印迹和反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法,观察脂蛋白氧化前、后对巨噬细胞表达TLR-4蛋白及TLR-4 mRNA的影响。结果Ox-LDL可提高TLR-4蛋白及TLR-4 mRNA的表达(P<0.01);而LDL对TLR-4蛋白及其mRNA的表达无影响(P<0.05)。结论LDL的氧化可能促进THP-1源巨噬细胞TLR-4转录水平的上调,导致蛋白质的合成增加;Ox-LDL可能是动脉粥样硬化中炎症的始发原因之一。; 余其振成蓓白智峰柯丽狄鸣; 关键词：TOLL样受体-4 巨噬细胞动脉硬化

泡沫细胞形成过程中酰基CoA:胆固醇酰基转移酶1活性改变及其机制研究被引量：25: 2004年; 目的　研究人单核细胞系在分化为巨噬细胞及转化为泡沫细胞过程中酰基CoA :胆固醇酰基转移酶 1(ACAT1)活性的改变及其机制。方法　体外培养人THP 1单核细胞系 ,由佛波酯作用使其分化为巨噬细胞 ,后者再由氧化低密度脂蛋白 (Ox LDL)进一步作用转变为泡沫细胞。此过程中以放射性同位素标记底物法检测ACAT1活性的变化 ,并用Westernblot法检测ACAT1蛋白的表达及RT PCR法检测ACAT1mRNA的水平。结果　在单核细胞分化为巨噬细胞的过程中ACAT1活性升高了 2倍 ,差异具有显著性 (P <0 0 5 ) ,酶蛋白及mRNA水平呈现类似变化趋势 ,在进一步转化为泡沫细胞过程中 ,ACAT1活性、酶蛋白及mRNA仍处于较高水平 ,但与巨噬细胞相比差异无显著性。结论　单核细胞分化为巨噬细胞的过程中ACAT1转录水平的上调导致酶蛋白量合成增加 ,从而使ACAT1活性也大为增强 ,而Ox LDL对ACAT1活性影响则不明显。; 何平成蓓彭雯王毅王洪星; 关键词：泡沫细胞动脉粥样硬化巨噬细胞

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