国家重点基础研究发展计划(G1998051209)
- 作品数：17 被引量：146H指数：9
- 相关作者：万大方顾健人覃文新李锦军何祥火更多>>
- 相关机构：上海市肿瘤研究所中国科学院中国医学科学院肿瘤医院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划上海市科学技术发展基金上海市卫生局科技发展基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 肝癌相关基因HCAP1的定位克隆和初步功能研究被引量：10
- 2002年
- 目的 克隆和筛选位于染色体 17p13.3缺失区内的肝癌相关基因。方法 采用定位克隆的策略 ,通过PAC筛库和RACE(rapidamplificationofcDNAends)方法克隆新基因 ;通过多组织膜片Northern杂交分析其组织表达谱 ,Southern杂交分析其在肝癌组织DNA水平上的变化 ,然后通过克隆集落形成实验与MTS法测定细胞生长速度 ,初步筛选其作为肿瘤相关基因的可能性。结果 克隆到一个基因HCAP1(HCC associatedprotein 1,先前又称HC5 6 ) ,GenBank登录号为AF177341。多组织膜片杂交显示该基因在多种组织中表达 ,其中胎盘、肝脏和肌肉中表达较高。Southern杂交结果显示HCAP1基因在肝癌组织中存在缺失 ,比例为 2 5 .3% ;克隆集落形成实验与生长抑制率测定实验初步表明该基因能抑制肝癌细胞株Hep3B细胞的生长 ,抑制率为 31.8%。结论 HCAP1可能与肝癌的发生发展相关 ,是一个新的肝癌相关基因的侯选者。
- 王俊茹覃文新任功一潘勇何祥火胡建万大方顾健人
- 关键词：肝癌基因克隆基因缺失
- 高通量肿瘤组织-细胞系芯片技术平台的建立及应用被引量：12
- 2002年
- 李锦军葛超万大方顾健人肿瘤组织-细胞系芯片技术研究组
- 干扰RNA对HepG2肝癌细胞内源性c-myc表达的抑制作用被引量：33
- 2004年
- 目的 研究干扰RNA(RNAi)对HepG2细胞的c myc基因表达的干扰效应。方法 建立装载靶向c myc基因小干扰性RNA(siRNA)的表达载体。用脂质体法将此表达载体转染HepG2细胞株 ,以转染空载细胞作为对照。采用定量PCR和Westernblot检测c myc基因的表达。用流式细胞仪及荧光显微镜检测AnexinV标记的凋亡细胞。结果 转染siRNA的表达载体可以抑制内源c myc基因在转录和转译上的表达 ,抑制率达 6 7%。c myc基因的表达抑制与HepG2细胞的凋亡相关联。结论 转染siRNA的表达载体可明显抑制肝癌细胞株HepG2c myc基因的表达 。
- 许杨王益华高纪东叶珏朱红霞徐宁志王兴宇孙宗棠
- 关键词：干扰RNAHEPG2肝癌细胞肝细胞
- 新基因ANGPTL4的克隆及其在血管新生中的功能研究被引量：26
- 2002年
- 目的 克隆新基因ANGPTL4 ,并探讨其功能。方法 采用以细胞生长为基础的功能筛选方法筛选人胎盘cDNA文库 ,结合RACE PCR方法克隆到一个人全长新基因ANGPTL4 ,用RH PCR方法对其进行染色体定位 ;用原核表达系统对重组ANGPTL4进行蛋白表达 ;用四甲基偶氮唑蓝 (MTT)试验、原代猪主动脉内皮细胞 (PAEC)体外迁移试验、PAEC体外浸润试验、PAEC体外管状试验及小鼠体内栓子形成试验探讨了新基因ANGPTL4对体内外血管新生过程的影响。结果 获取的人全长基因ANGPTL4定位于染色体 19p13 3,其原核表达产物对PAEC的体外增殖没有明显作用 (P =0 0 5 04 ) ,但ANGPTL4的 2 μg/ml剂量组对PAEC的体外迁移和浸润均有明显的促进作用 (P <0 0 5 ) ,对其管状结构形成也有程度不同的促进作用 ;对小鼠体内血管新生有较明显的促进作用。
- 朱洪新李锦军覃文新杨艳华何祥火万大方顾健人
- 关键词：血管新生体外新基因克隆人胎盘RACE
- 基因组半定量PCR方法检测肿瘤组织的基因缺失被引量：3
- 2000年
- 目的 用 PCR方法检测肿瘤组织中抑癌基因的缺失状况。方法 PCR半定量技术。结果 10对标本有 5对发现缺失 ,80 %与 Southern杂交结果相符合。结论 半定量 PCR技术可以替代 Southern杂交 ,成为检测基因缺失的一种便利手段。
- 孙奋勇万大方覃文新顾健人
- 关键词：基因缺失聚合酶链反应肿瘤组织
- 高通量肿瘤血管新生研究技术平台的建立被引量：17
- 2001年
- 目的 建立高通量肿瘤血管新生研究的体内外技术平台。方法以VEGF,bFGF为血管新生因子,以Thalidomide血管新生抑制因子对体外培养的血管内皮细胞系(RF/6A,SVEC)应用MTT试验,迁移试验,浸润试验和管状形成试验检测内皮细胞的各种特性;体内实验以鸡胚和C57BL/6小鼠为实验动物检测血管新生因子和抑制因子在体内对血管新生的影响。结果VEGF和bFGF在体内和体外均有促进血管新生的作用,体外试验表明VEGF和bFGF对内皮细胞的增殖活性,迁移,浸润和管状结构形成均有明显的促进作用(P＜0.01);小鼠体内栓子试验和鸡胚绒毛尿囊膜试验结果均表明,VEGF和bFGF对体内血管新生同样具有促进或刺激作用,和阴性对照相比主要表现在新生血管密度高、管腔大、管壁完整等;而Thalidomide在体内外均有明显抑制血管新生的作用。结论 本技术平台是一个高通量、经济、简便易行、实用的血管新生研究技术平台。
- 李锦军葛超朱洪新万大方顾健人
- 关键词：肿瘤血管新生VEGF动物实验
- 人细胞生长相关5个新基因的染色体定位及其基因结构被引量：3
- 2002年
- 基因的染色体定位对我们研究基因相互关系、基因的组织与进化及理解基因与疾病关系具有重要的意义。本文采用RH -PCR方法及生物信息学方法对PP3898、PP115 8、PP75 3、SP2 6 0、HC5 6等 5条人细胞生长相关新基因进行染色体定位 ,并分析了其基因结构。PP3898及PP115 8定位于 19p13 3,PP75 3及SP2 6 0定位于 1q2 1 1,HC5 6定位于 17p13 3。PP3898含有 19个外显子和 18个内含子 ,可读框为 2 5 6 5bp ;PP115 8含有 7个外显子和 6个内含子 ,可读框为 12 18bp ;SP2 6 0含有 10个外显子和 9个内含子 ,可读框为 6 90bp ;HC5 6为单外显子 ,可读框为3141bp。另外 。
- 何祥火覃文新王俊茹胡建朱洪新万大方顾健人
- 关键词：染色体定位基因结构人类基因组
- CPGL的基因结构及其与肝癌相关性的研究被引量：1
- 2003年
- 目的 克隆carboxypeptidaseofglutamatelike(CPGL)全长cDNA ,初步探讨它在肝癌发生发展中的作用。 方法 通过5’ RACE方法和RT -PCR验证 ,确定 (CPGL)全长序列 ,根据其全长与人类基因组的比较进而确定基因的染色体定位和其外显子、内含子 ;应用WesternBlot方法检测CPGL在肝癌组织和癌旁组织中的表达 ;细胞克隆形成及生长曲线检测CPGL对肝癌细胞生长的影响。结果 CPGL全长 2 6 16bp ,编码 4 75个氨基酸的蛋白 ,染色体定位于 18q2 2 .3,蛋白产物定位于细胞质中 ,WesternBlot结果发现CPGL在肝癌组织中的表达明显低于癌旁组织。将CPGL转染肝癌细胞系SMMC772 1发现其具有抑制生长的作用。同源比较发现CPGL含有M2 0蛋白酶家族的保守功能域。结论 上述发现表明CPGL是具有潜在抑癌作用的基因。
- 朱奕奕覃文新李宏年李宏年李锦军张萍萍周筱梅
- 关键词：肝癌抑癌作用
- PAC579基因组序列外显子计算机分析与预测
- 2001年
- 为了寻找肝癌相关基因，选择位于人原发性肝细胞肝癌染色体１７ｐ１３．３杂合性缺失最小共同缺失区内含有Ｄ１７５９２６位点的ＰＡＣ５７９克隆进行了基因组测序，通过实验分离和克隆了位于ＰＡＣ５７９上的４个全长新基因，并将它们在该基因组上进行了外显子定位．使用５种计算机预测外显子的方法和４种剪接位点识别的方法对ＰＡＣ５７９前６０ｋｂ序列（含上述４个基因）进行扫描，将得到的外显子预测结果和剪切位点结果与实验结果进行了对照与评析，又对未获得基因的区域加以预测．
- 黄戈覃文新万大方赵新泰顾健人
- 关键词：计算机识别外显子基因组序列基因识别
- 肝癌相关基因pp1158的表达及功能研究被引量：11
- 2002年
- 目的 对pp115 8基因的蛋白表达和体内外功能进行研究。方法 用pET 32a融合表达载体在大肠杆菌BL2 1(DE3)对该基因进行表达 ,制备兔源性多克隆抗体 ;用体外细胞集落形成试验、裸鼠体内成瘤实验、免疫组化及蛋白印迹 ,检测该基因对肿瘤细胞生长的影响及表达差异 ;用Northernblot检测pp115 8在组织中的表达差异。结果 pp115 8对BEL 74 0 2肝癌细胞系的体外集落形成有明显抑制作用 ,抑制率为 5 8.3% (P <0 .0 1) ;对BEL 74 0 2细胞的成瘤有明显抑制作用 (P <0 .0 5 )。蛋白印迹结果显示 ,转染pCMV Script pp115 8的BEL 74 0 2细胞表达pp115 8蛋白。免疫组化结果显示 ,pp115 8基因在人组织中的表达为 :正常肝组织≥癌旁肝组织 >肝癌组织。Northernblot结果显示 ,pp115 8在人胎盘组织中高表达 ,在心、肝、骨骼肌、胰腺、肺等脏器中度表达 ,而在脑和肾组织中表达很低。结论 pp115 8为肝细胞性肝癌的候选抑瘤基因。
- 朱洪新李锦军万大方杨艳华覃文新葛超姚明顾健人
- 关键词：肝肿瘤肝细胞癌免疫组织化学
