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国家自然科学基金(30170391)

作品数:14 被引量:35H指数:4
相关作者:汤永民沈红强钱柏芹宁铂涛李丽霞更多>>
相关机构:浙江大学医学院附属儿童医院浙江大学医学院附属邵逸夫医院浙江大学更多>>
发文基金:国家自然科学基金浙江省自然科学基金浙江省科技厅科技计划项目更多>>
相关领域:医药卫生生物学更多>>

文献类型

  • 14篇中文期刊文章

领域

  • 12篇医药卫生
  • 2篇生物学

主题

  • 7篇克隆
  • 5篇细胞
  • 5篇抗体
  • 5篇白血
  • 5篇白血病
  • 5篇CD14
  • 4篇单克隆
  • 4篇肿瘤
  • 3篇血液
  • 3篇免疫
  • 3篇靶向
  • 2篇单克隆抗体
  • 2篇单链
  • 2篇单链抗体
  • 2篇血液肿瘤
  • 2篇药物疗法
  • 2篇疗法
  • 2篇淋巴
  • 2篇淋巴细胞
  • 2篇淋巴细胞白血...

机构

  • 13篇浙江大学医学...
  • 1篇浙江大学
  • 1篇浙江大学医学...

作者

  • 13篇汤永民
  • 7篇沈红强
  • 6篇钱柏芹
  • 5篇宁铂涛
  • 3篇曹江
  • 3篇李丽霞
  • 2篇杨世隆
  • 2篇罗春芳
  • 1篇宋华
  • 1篇张玲燕
  • 1篇石淑文
  • 1篇汤宏峰
  • 1篇陈英虎
  • 1篇张晶樱
  • 1篇徐卫群
  • 1篇李思思
  • 1篇郭莉
  • 1篇张海忠
  • 1篇顾伟忠
  • 1篇王迪

传媒

  • 4篇浙江大学学报...
  • 4篇实用肿瘤杂志
  • 3篇中华儿科杂志
  • 1篇Journa...
  • 1篇医学分子生物...
  • 1篇国际免疫学杂...

年份

  • 1篇2010
  • 1篇2009
  • 6篇2008
  • 3篇2007
  • 2篇2005
  • 1篇2003
14 条 记 录,以下是 1-10
排序方式:
直标鼠抗人CD14单克隆抗体2F9-FITC的研制及鉴定被引量:6
2005年
目的研制异硫氰酸荧光素(Fluoresceinisothiocyanate,FITC)标记的直标单克隆抗体2F9-FITC,用于白血病的免疫分型诊断。方法2F9杂交瘤细胞的亚克隆,2F9腹水的制备、纯化、纯度鉴定按照常规方法进行;参考改良Marsshall氏法,制备FITC标记的2F9-FITC单抗;通过流式细胞术鉴定单抗亚型,比较2F9-FITC和标准CD14-FITC在不同类型白血病细胞上的表达情况。结果制备了大量高纯度的IgG1κ亚型2F9单抗,成功研制了直标单抗2F9-FITC,A495/A280比值为0.44;2F9-FITC与CD14-FITC在单核细胞上反应的阳性细胞百分数分别为84.50%及90.08%,而在淋巴细胞仅为0.52%和1.01%;2F9-FITC与标准CD14-FITC在各类白血病细胞上的阳性细胞百分数的差异不显著(n=23,t=0.922,P=0.367)。结论研制的2F9-FITC能够替代进口的同类高质量单抗试剂,用于单核细胞相关性白血病的免疫诊断。
宁铂涛汤永民沈红强张玲燕杨世隆陈英虎宋华石淑文钱柏芹徐卫群
关键词:白血病
Preparation and Evaluation of Norcantharidin-encapsulated Liposomes Modified with a Novel CD19 Monoclonal Antibody 2E8
2010年
In this study, norcanthridin (NCTD)-encapsulated liposomes were modified with a novel murine anti-human CD19 monoclonal antibody 2E8 (2E8-NCTD-liposomes) and the targeting efficiency and specific cytotoxicity of 2E8-NCTD-liposomes to CD19^+ leukemia cells were evaluated. BALB/c mice were injected with 2E8 hybridoma cells to obtain 2E8 monoclonal antibody (mAb). NCTD-liposomes were prepared by using film dispersion method. 2E8 mAbs were linked to NCTD-liposomes using post-incorporation technology. Flow cytometry showed that the targeting efficiency of purified 2E8 mAbs on CD19+ Nalm-6 cells was 99.93%. The purified 2E8 mAbs were conjugated with NCTD-liposomes to prepare 2E8-NCTD-liposomes whose targeting efficiency on CD19^+ Nalm-6 was also 95.82%. The average size of 2E8-NCTD-liposomes was 118.32 nm in diameter. HPLC showed that the encapsulation efficiency of NCTD was 46.51%. When the molar ratio of 2E8/Mal-PEG2000-DSPE reached 1:50, we obtained the liposomes with 9 2E8 molecules per liposome. The targeting efficiency of 2E8-NCTD-liposomes on CD19^+ leukemia cells was significantly higher than that on CD19-1eukemia cells. Similarly, the targeting efficiency of the immtmoliposomes was also higher than that of the NCTDAiposomes on CD 19^+ leukemia cells. Those results were consistent with those observed by laser scanning confocal microscopy. 3-(4, 5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) assay demonstrated that 2E8-NCTD-liposomes specifically killed Nalm-6 cells in a dose- and time-dependent manner. The viability of Nalm-6 cells treated by 2E8-NCTD-liposomes was significantly lower than that of Molt-3 cells and it was also significantly lower than that of Nahn-6 cells treated with the same concentration of NCTD-liposomes or free NCTD. We are led to concluded that 2E8 antigen can serve as a specific targeting molecule of B lineage hematopoietic malignancies for liposome targeting, and 2E8-NCTD-liposomes can be used as a new and effective means for the treatment o
张晶樱汤永民钱柏芹沈红强
关键词:TARGETINGIMMUNOLIPOSOMENORCANTHARIDIN
噬菌体展示系统的研究进展被引量:6
2005年
噬菌体展示是一种用于筛选和改造功能性多肽/蛋白质强有力的生物技术,广泛应用在蛋白组学,未知基因的克隆和测序等多个分子生物学领域。展示技术使用的噬菌体系统有丝状噬菌体展示系统、λ噬菌体展示系统、T4噬菌体展示系统和T7噬菌体展示系统。丝状噬菌体pⅢ系统单价展示,可以筛选高亲和力配体,pⅧ系统拷贝数高,利于疫苗的研制,但丝状噬菌体分泌释放,不易展示大分子蛋白;λ噬菌体和T4噬菌体系统容量大,拷贝数高,但不易筛选高亲和力配体;T7噬菌体系统可以高、中、低拷贝展示不同分子量的蛋白,是目前最为理想的展示系统。
郭莉汤永民
关键词:噬菌体蛋白组学基因克隆
CD45分子结构和功能研究进展被引量:3
2008年
CD45分子是第一个被确认的典型的受体型蛋白酪氨酸磷酸酶(RPTPα),儿乎在所有的有核白细胞表面均有表达。在环境信号整合进入细胞并引起反应的过程中,蛋白激酶和磷酸酶共同调节的酪氨酸磷酸化状态是一个关键的调控点,CD45分子在酪氨酸的磷酸化过程中发挥重要作用。CD45突变细胞系、CD45缺陷小鼠、CD45缺陷人群的研究均表明了CD45对于抗原受体信号转导和淋巴细胞的分化发育等过程都是必不可少的,CD45分子功能紊乱会导致自身免疫性疾病、免疫缺陷、恶性肿瘤等。
李思思汤永民
关键词:信号转导
急性B淋巴细胞白血病动物模型的建立被引量:4
2008年
目的:建立急性B淋巴细胞系白血病动物模型,为药物进行体内靶向杀伤研究奠定基础。方法:裸鼠用环磷酰胺预处理后,尾静脉注射5×106个Nalm-6细胞,观察小鼠症状,记录发病时间,取其各个组织做病理检查,了解肿瘤细胞浸润情况。结果:小鼠注射肿瘤细胞(19.4±0.55)d后出现严重消瘦、脊柱侧弯和弓背症状,平均死亡时间(24.75±0.87)d;病理切片观察到小鼠骨髓、肝、脾、肾、脑膜、脑实质、卵巢、肺都有肿瘤细胞浸润,部分肝脾组织出现坏死。结论:采用裸鼠成功建立了急性B淋巴细胞系白血病的动物模型,为靶向治疗白血病研究奠定了基础。
李丽霞汤永民顾伟忠汤宏峰钱柏芹沈红强罗春芳
关键词:白血病
鼠抗人CD14单链抗体ScFv2F9原核表达载体的构建和表达
2008年
目的:构建ZCH-7-2F9(简称2F9)单链抗体(ScFv2F9)原核表达载体,获得活性目的蛋白,为2F9免疫毒素及其它类型的基因工程抗体的研究奠定基础。方法:根据VH2F9、VL2F9、(G4S)3基因序列以及pIVEX2.3-MCS空载体多克隆位点内切酶位点NdeI和SmaI的核酸序列设计引物,采用高保真的Taq酶,通过重叠延伸拚接法(splicing by overlap extension,SOE)扩增克隆到ScFv2F9基因,T-A克隆、测序核实后克隆到pIVEX2.3-MCS空载体中,阳性重组质粒转化大肠杆菌菌株E.coli BL21star(DE3)plysS,IPTG诱导目的蛋白表达,镍树脂纯化后体外复性浓缩,流式细胞术观察其识别和结合CD14的能力。结果:成功构建ScFv2F9的原核表达载体pIVEX2.3-MCS/ScFv2F9;对大肠杆菌的包涵体进行纯化复性,其复性率为32.6%;通过流式细胞术观察到复性ScFv2F9对亲本单抗2F9-FITC有部分的阻滞效果,复性ScFv2F9阻滞1次后阳性细胞百分数、平均荧光强度(MFI)和高峰频道(peakCh)分别下降了11.73%、11.96%和31.57%,阻滞2次后分别下降了26.44%、21.75%和42.11%。结论:ScFv2F9在原核细胞中获得成功表达,复性后目的蛋白对人CD14有一定的识别和结合能力,为2F9单抗的进一步改造打下了坚实的基础。
宁铂涛汤永民曹江沈红强钱柏芹
关键词:原核细胞抗体单克隆流式细胞术
免疫脂质体抗癌药物靶向治疗血液肿瘤的研究进展
2009年
白血病是儿童发病率最高的恶性肿瘤,也是导致儿童死亡的主要原因。尽管联合化疗是当前治疗儿童血液恶性肿瘤的主要方法,可使儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)的治愈率达80%,但还是有相当数量的白血病患儿难免复发死亡,尤其是急性髓系白血病(AML)的疗效远不如ALL。
张晶樱汤永民
关键词:药物靶向治疗免疫脂质体儿童急性淋巴细胞白血病血液肿瘤血液恶性肿瘤儿童发病率
免疫毒素2E8去甲斑蝥素的研制及其体外靶向抑制效应研究被引量:1
2008年
目的采用本院自行研制的ZCH-4—2E8细胞分泌的抗人CD19单克隆抗体与去甲斑蝥素(NCTD)进行连接制备免疫毒素,研究其在体外的靶向杀伤作用。方法通过凝胶过滤层析法纯化2E8单抗,SDS-PAGE电泳鉴定抗体的纯度;活泼酯法制备免疫毒素2E8-NCTD;流式细胞仪测定免疫毒素的抗体活性及Nalm-6细胞和K562细胞上CD19抗原表达情况;台盼蓝计数法比较2E8抗体、NCTD、2E8-NCTD免疫毒素对Nalm-6细胞和K562细胞的杀伤作用。结果纯化后的2E8单抗经SDS-PAGE鉴定纯度达99.00%以上;2E8培养上清在Nalm-6细胞上的阳性率为99.34%,而在K562细胞上则为0.98%,2E8-NCTD免疫毒素与Nalm-6细胞的阳性反应率为99.90%;培养96h时,与对照组相比,2E8-NCTD(10μs/ml)对CD19^+的Nalm-6细胞的生长影响有统计学意义(96h抑制率71.25%,P〈0.001),而纯化的2E8抗体(10μg/ml)对Nalm-6细胞生长则无明显抑制作用(96h抑制率为30.29%,P〉0.05);10μg/ml 2E8抗体、10μg/ml 2E8-NCTD对CD19^-的K562细胞(96h抑制率分别为4.17%和15.41%)则无明显抑制作用(P〉0.05)。结论成功制备2E8-NCTD免疫毒素,该免疫毒素在体外具有明显的靶向杀伤白血病细胞Nalm-6的作用。
李丽霞汤永民张海忠沈红强钱柏芹罗春芳
关键词:免疫毒素类去甲斑蝥素
多参数流式细胞术观察251例白血病细胞CD14表达的意义被引量:18
2003年
目的 探讨 CD14在白血病细胞的表达及其在白血病诊断和鉴别诊断中的意义。方法 采用 CD45 /SSC参数设门多色流式细胞术分析 2 5 1例白血病细胞 CD14及其它白血病相关抗原的表达情况。结果  2 5 1例中有 19例 ( 7.5 % )白血病细胞表达 CD14,95例急性髓系白血病 ( AML )中 16例 ( 16 .8% )白血病细胞表达 CD14,130例淋系白血病未见 CD14阳性的病例。 M4和 M5b CD14的阳性率 ( 9/ 14;6 / 6 )明显高于 M2 ( 1/ 30 ) ( P=0 .0 0 1;P=3.6× 10 - 6 )及 M5a( 0 / 5 ) ( P=0 .0 3;P=2 .2× 10 - 3 )。标准 CD14单抗均不与 5例 M5a细胞反应 ,而自制 CD14新克隆 2 F9单抗则全部阳性。5例 M5a中 1例 CD15和 2 9例 M2 中 13例 CD11b的阳性率明显低于 M5b( 6 / 6 ,P=0 .0 2 ;6 / 6 ,P=0 .0 2 )。在 AML 组中 ,CD14的表达与 CD117呈负相关 ( r=- 0 .2 ,n=81,P=0 .0 3) ,与 CD11b、CD15及HL A- DR呈正相关 ( r=0 .5 ,n=93,P=0 .0 0 1;r=0 .4,n=95 ,P=0 .0 0 1;r=0 .2 ,n=95 ,P=0 .0 2 )。结论  CD14有助于淋巴系白血病、髓系白血病及其单核细胞相关性白血病的诊断与鉴别 ,其对单核细胞相关性白血病免疫分型诊断中的特异性为 96 .7% ,敏感性为 6 0 .0 %。
宁铂涛汤永民沈红强杨世隆
关键词:白血病CD14免疫表型分型流式细胞术单克隆
抗人CD14新克隆ZCH-7-2F9单抗轻重链可变区基因克隆与序列分析被引量:1
2007年
目的:获取抗人CD14单克隆抗体(单抗)ZCH-7-2F9(简称2F9)轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)基因,为2F9单链抗体(ScFv2F9)的构建奠定基础。方法:复苏2F9和NS-1细胞株,并亚克隆2F9细胞株,从其最佳克隆93A10提取总RNA,RQ1 RNase-Free DNase处理污染的DNA,与NS-1细胞进行同步对照,通过RT-PCR,扩增获得2F9单抗VL基因和VH基因,分别克隆入pGEM○R-T Easy载体,然后转化DH5α细菌,酶切鉴定并纯化阳性重组子,测序后进行在线核苷酸序列分析。结果:2F9单抗VL基因全长321 bp,编码107个氨基酸,归属于小鼠Ig的Vκ基因,氨基酸序列分析结果显示,VL含有明确的4个框架区(FR)和3个抗原决定簇互补区(CDR),在第23位和第88位为半胱氨酸,是与抗体二硫键形成有关的两种特征性氨基酸;其VH基因全长360 bp,编码120个氨基酸,归属于小鼠Ig的VH基因,氨基酸序列分析结果显示,VH含有明确的4个框架区和3个抗原决定簇互补区,在第22位和第96位为半胱氨酸,是与抗体二硫键形成有关的两种特征性氨基酸。结论:经核苷酸序列分析证明所克隆的基因分别是2F9单抗的VL和VH基因,为2F9基因工程抗体研究奠定了坚实的基础。
宁铂涛汤永民曹江沈红强钱柏芹
关键词:基因
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