上海市教育委员会创新基金(08ZZ67)
- 作品数：4 被引量：3H指数：1
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- 相关机构：上海师范大学更多>>
- 发文基金：上海市教育委员会创新基金教育部科学技术研究重点项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 集胞藻6803藻胆体藻蓝蛋白多克隆抗体制备及其初步应用被引量：1
- 2010年
- 通过PCR扩增出集胞藻6803 C-PC编码基因cpcA,构建表达质粒pET32a(+)-cpcA,转化大肠菌株BL21(DE3)pLysS,用IPTG诱导表达、经His-tag纯化后免疫日本大耳白兔获得多克隆抗体。间接ELISA法揭示该抗体效价可高达1∶1 025 000;蛋白免疫印迹确定该抗体具有高度特异性。应用该抗体进行蛋白免疫印迹检测,结果发现C-PC蛋白在生长光与高光培养条件下的数量,以及与2个光系统间的连结数量均存在显著差异,为进一步研究藻胆体的杆在响应与适应机制中所承担的重要角色奠定了生化基础。
- 张劲松陈李萍高复旦杜玲瑜王全喜马为民
- 关键词：藻蓝蛋白多克隆抗体集胞藻6803
- 利用同源重组构建蓝藻集胞藻6803ndhO基因突变株及其分子鉴定被引量：3
- 2010年
- 蓝藻NADPH脱氢酶(NDH-1)是一种重要的光合膜蛋白复合体,参与CO2吸收、围绕光系统I的循环电子传递和细胞呼吸。迄今为止,人们在蓝藻细胞中已鉴定出15种NDH-1复合体亚基(NdhA-NdhO)。然而,人们对NdhO亚基的研究尚不够,至今未见有反向遗传学等方面的研究。在通过构建同源重组载体、自然转化和多次继代筛选后,对转化子进行了PCR和蛋白免疫印迹鉴定。结果表明,卡那霉素基因已成功地插入到ndhO基因的保守区域,并完全破坏了ndhO基因的蛋白表达,从而获得了ndhO基因缺失的突变株,为进一步研究NdhO亚基对NDH-1复合体的稳定性和生理功能等奠定了实验基础。
- 龙宗娟赵娇红魏兰珍王全喜马为民
- 关键词：集胞藻6803
- 集胞藻6803NdhO蛋白多克隆抗体制备及其初步应用
- 2011年
- 蓝藻NADPH脱氢酶(NDH-1)是一种重要的光合膜蛋白复合体,参与CO2吸收、围绕光系统I的循环电子传递和细胞呼吸。迄今为止,人们在蓝藻细胞中已鉴定出17种NDH-1复合体亚基(NdhA-NdhQ)。最近,人们还获得了NdhO亚基的缺失突变株。然而,人们对NdhO亚基的研究还不充份,至今仍不清楚它的功能角色。通过PCR扩增出集胞藻6803 NdhO亚基编码基因ndhO,构建表达质粒pET32a(+)-ndhO,转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS,用IPTG诱导表达、经His-tag纯化后免疫日本大耳白兔获得多克隆抗体。间接ELISA法揭示NdhO抗体效价可高达1∶1 025 000;蛋白免疫印迹确定该抗体具有高度特异性。应用该抗体进行蛋白免疫印迹检测,结果发现NdhO亚基仅存在于NDH-1活性复合体中。因此,NdhO多克隆抗体的获得将为进一步阐明该亚基所担任的功能角色奠定了生化基础。
- 赵娇红高复旦魏兰珍王全喜马为民
- 利用同源重组构建蓝藻集胞藻6803ndhM基因突变株及其分子鉴定
- 2010年
- 蓝藻NADPH脱氢酶(NDH-1)是一种重要的光合膜蛋白复合体,参与CO2吸收、围绕光系统I的循环电子传递和细胞呼吸。迄今为止,人们已在蓝藻细胞中鉴定出15种NDH-1复合体亚基(NdhA-NdhO)。然而,人们对NdhM亚基的研究尚不够,至今未见有反向遗传学等方面的研究。在通过构建同源重组载体、自然转化和多次继代筛选后,对转化子进行了PCR和蛋白免疫印迹鉴定。研究结果表明,壮观霉素基因已成功地插入到ndhM基因的保守区域,并完全破坏了ndhM基因的蛋白表达,从而获得了ndhM基因缺失的突变株,为进一步研究NdhM亚基对NDH-1复合体的稳定性和生理功能等奠定了试验基础。
- 龙宗娟赵娇红魏兰珍王全喜马为民
- 关键词：集胞藻6803
