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悬浮培养昆虫细胞表达重组HPV16 L1蛋白: 2007年; 目的用悬浮培养昆虫细胞方式表达人乳头瘤病毒16型（HPV16）L1蛋白，为获得病毒样颗粒（VLPs）及进一步深入研究疫苗和诊断试剂盒打基础。方法优化昆虫细胞Si9的悬浮培养条件；优化扩增病毒和蛋白的条件；空斑试验测定病毒滴度；SDS—PAGE和Western Blot分析目的蛋白的表达情况；透射电镜观察细胞内HPV16 L1蛋白形成的VLPs。结果优化后，悬浮培养昆虫细胞初始接种密度为5×10^5 cell／ml，以MOI（Multiplicity of Infection）=10接种重组病毒rBacV／HPVl6L1，72～84h收获细胞沉淀为最佳。经透射电镜观察，在重组病毒感染的昆虫细胞内，存在HPV16L1蛋白形成的VLPs。结论优化了细胞悬浮培养、病毒扩增和蛋白表达的条件；电镜观察在重组病毒rBacV／HPV16L1感染的昆虫细胞中，HPV16L1蛋白可形成VLPs。; 韩聪王燕商庆龙魏兰兰陈思佳; 关键词：乳头状瘤病毒细胞病毒样颗粒

5’-RACE法扩增抗人乳头瘤病毒16型L1蛋白单克隆抗体轻链可变区基因及序列分析: 2008年; 目的获得抗人乳头瘤病毒16型（HPV16）L1蛋白单克隆抗体的轻链可变区（VL）基因并分析序列。方法从分泌抗HPVl6L1蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞中提取总RNA，逆转录形成CD-NA，用5’-RACE策略扩增抗体轻链可变区基因，经琼脂糖凝胶电泳鉴定，并测序及进行序列分析。结果VL基因全长336bp，编码112个氨基酸，基因测序结果符合小鼠抗体轻链可变区特征。结论5’-RACE法成功获得了抗HPV16L1蛋白的单克隆抗体轻链可变区基因的真实序列，为基因工程抗体研究奠定了良好基础。; 王燕商庆龙陈思佳邵迪韩聪李茉谷鸿喜; 关键词：人乳头瘤病毒16型轻链可变区单克隆抗体

人乳头瘤病毒16型L1蛋白表达及其单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立: 2007年; 目的表达并纯化重组人乳头瘤病毒16型（HPV16）L1蛋白，建立分泌抗HPV16 L1单克隆抗体（mAb）的杂交瘤细胞株。方法以基因工程表达HPV16L1蛋白。用Ni—NTA技术进行纯化后免疫BALB／c小鼠，取脾细胞与SP2／0骨髓瘤细胞融合，经含次黄嘌呤、氨基蝶呤、胸腺嘧啶（HAT）的选择培养基及有限稀释法进行克隆化，用间接ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞，对获得的杂交瘤细胞株染色体进行计数．同时测定细胞培养上清mAb的效价。结果筛选出2株可分泌抗HPV16 L1 mAb的杂交瘤细胞，命名为AE3和AG7，染色体数分别为130条和98条。2株杂交瘤细胞AE3和AG7培养上清的效价分别为1：5120和1：80。结论成功建立了2株可分泌抗HPV 16 L1 mAb的杂交瘤细胞，为进一步研制HPV感染检测试剂盒提供实验基础。; 王燕商庆龙谷鸿喜韩聪邵迪李茉李承刚; 关键词：宫颈肿瘤 L1蛋白

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黑龙江省青年科学基金(QC06C062)