国家自然科学基金(30772256)
- 作品数：12 被引量：41H指数：5
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- 苦柯胺B对脂多糖诱导的脓毒症小鼠小肠炎症反应的抑制作用及分子机制被引量：9
- 2015年
- 目的 探讨苦柯胺B（KB）对脓毒症小鼠小肠炎症反应的抑制作用及其分子机制。方法 按照随机数字表法将24只雄性ICR小鼠分为对照组、模型组、KB干预组，每组8只。腹腔注射脂多糖（I^PS）20mg／kg制备脓毒症动物模型，对照组注射等量生理盐水；KB干预组于制模后4h经尾静脉注射KB20雌mg进行干预。各组于注射LPS后8h取心脏血和空肠、回肠组织，检测血浆LPS含量；采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血浆及小肠组织肿瘤坏死因子-α（TNF-α,）和白细胞介素-1β（IL-1β）水平；光镜下观察小肠组织病理学改变；比色法检测小肠组织髓过氧化物酶（MPO）活性；免疫组化法观察小肠组织细胞间黏附分子-1（ICAM-1）表达；反转录-聚合酶链反应（RT—PCR）检测小肠组织诱导型-氧化氮合酶（iNOS）mRNA表达；蛋白质免疫印迹试验（WesternBlot）检测小肠组织核转录因子-kB（NF—kB）蛋白表达。结果 模型小鼠表现为肠组织微血管通透性增加，间质水肿，白细胞浸润；血浆LPS、TNF-α、IL—1β水平及小肠TNF-α、IL-1β、MPO活性、ICAM-1阳性表达、iNOS mRNA、NF—kB蛋白表达均明显升高；而经KB干预后，小肠组织微血管通透性降低，水肿程度减轻，白细胞浸润显著减少，血浆LPS、TNF-α、IL-1β及小肠TNF-α、IL-1β、MPO活性、ICAM-1阳性表达、iNOSmRNA和NF—kB蛋白表达均较模型组均明显下降[血浆LPS（kEU／L）：654．09±28．13比1155．65±47．15，TNF—α（ng／L）：12．75±0．47比30．61±0．71，IL-1β（ng／L）：53．06±5．32比64．47±2．61；空肠TNF-α（ng／L）：43．27±1．20比64．82±2．09，IL-1β（ng／L）：326．38±14．47比535．22±13．48．MPO（U，g）：0．14±0．01比0．32±0．02，iNOSmRNA（2^-△△Ct）：2．39±0．13比10．80±0．22，NF—kB蛋白（灰度值）：0．687±0．062比1．404±0．046；回肠TNF-α（ng／L）：62．75±3．9
- 吕汪洄秦魏婷张锦丽沈唯长王旭孙炳伟
- 关键词：脂多糖小肠炎症反应
- 苦柯胺B对脓毒症小鼠肺脏炎症反应的抑制作用被引量：7
- 2014年
- 目的 探讨苦柯胺B（KB）对脓毒症小鼠肺部炎症反应的抑制作用及分子机制.方法 将28只雄性ICR小鼠按随机数字表法分为对照组（8只）、脂多糖（LPS）组（10只）、LPS ＋KB组（10只）.腹腔注射LPS 20 mg/kg制备脓毒症模型（LPS组）;对照组给予等体积生理盐水;LPS ＋KB组于LPS刺激4h后经尾静脉注射KB 20 μg/kg.于LPS刺激后8h检测动物血浆LPS浓度及肺组织髓过氧化物酶（MPO）活性;采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血浆、肺泡灌洗液及肺组织匀浆中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白细胞介素-1β（IL-1β）的含量;用蛋白质免疫印迹试验（Western Blot）检测肺组织核转录因子-κB（NF-κB）活性和诱导型一氧化氮合酶（iNOS）蛋白表达;用苏木素-伊红（HE）染色观察肺组织病理学改变;免疫组化法观察肺组织中细胞间黏附分子-1 （ICAM-1）蛋白表达.结果 与对照组比较,LPS组血浆LPS浓度（kEU/L：1 155.650±147.149比31.390±18.859）、MPO活性（U/g：1.177 ±0.093比0.775±0.166）、NF-κB活性（灰度值：1.557±0.105比0.824±0.032）、iNOS蛋白表达（灰度值：0.650±0.129比0.392±0.097）均显著升高（均P＜0.05）;KB干预后LPS浓度（624.461±149.012）、MPO活性（0.919±0.023）、NF-κB活性（1.127±0.074）、iNOS蛋白表达（0.425±0.066）均被明显抑制（均P＜0.05）.与对照组比较,LPS组血浆、肺泡灌洗液、肺组织匀浆中TNF-α（ng/L：47.325±13.864比6.534±0.544,13.382±2.231比3.748±0.692,31.127±7.399比14.948±4.673）、IL-1β（ng/L：74.329±11.890比29.921±6.487,9.422±2.674比1.105±0.364,528.509±32.073比109.945±13.561）浓度均显著增加（均P＜0.05）;而应用KB干预后TNF-α（20.331±7.789、7.145±1.202、15.966±2.946）、IL-1β（57.707±8.098、2.212±0.878、426.154±11.270）浓度均明显降低（血浆TNF-α：F=16.052、P=0.002,IL-1β：F=20.649、P=0.000;肺泡灌洗液TNF-α：F=31.134、P=0.001,IL-1β：F=22.792、
- 张锦丽秦魏婷吕汪洄沈唯长王旭孙炳伟
- 关键词：脓毒症炎症反应
- 外源性一氧化碳对烧伤早期炎症反应的干预作用被引量：1
- 2008年
- 金勤孙炳伟
- 关键词：烧伤全身炎症反应综合征外源性一氧化碳
- 脓毒症时糖原合酶激酶3相关作用的研究进展被引量：3
- 2014年
- 脓毒症是由感染引起的全身炎症反应综合征（SIRS）,是严重创伤、休克及感染后常见的并发症,进一步发展可导致脓毒性休克、多器官功能障碍综合征（MODS）,即便在基础与临床研究及重症监护手段高度发展的现代,其临床治疗仍然收效甚微,病死率居高不下[1].脓毒症的病理生理过程极其复杂,近年研究表明机体的炎症反应和凝血系统功能紊乱在脓毒症的发生发展过程中具有重要作用[1-3].大量研究揭示,糖原合酶激酶3（GSK-3）在脓毒症炎症反应、凝血异常中发挥重要作用[4-5].GSK-3是一种多功能的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,是参与糖代谢的主要限速酶之一.
- 庄明峰刘大东孙炳伟
- 关键词：糖原合酶激酶3脓毒症全身炎症反应综合征苏氨酸蛋白激酶脓毒性休克病理生理过程
- 外源性一氧化碳释放分子对脓毒症小鼠肺部炎症反应的抑制作用被引量：4
- 2010年
- 目的:研究外源性一氧化碳释放分子(carbon monoxide-releasing molecules-2,CORM-2)干预对脓毒症小鼠肺部炎症反应的抑制作用。方法:18只雄性昆明种小鼠随机分为假手术组、CLP模型组和CORM-2干预组。制作标准盲肠结扎穿孔(cecal ligation and puncture,CLP)模型,用CORM-2进行干预,观察干预前后小鼠肺脏炎症反应的变化情况。分别于CLP术后6h,12h,24h收集血浆、取肺组织,酶联免疫吸附(ELISA)法检测血浆中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)炎症因子的表达;检测肺组织中髓过氧化物酶(MPO)活性,观察中性粒细胞的聚集程度;测定肺组织湿干重比(W/D);苏木精-伊红(HE)染色观察肺组织病理变化;免疫组织化学法观察细胞间黏附分子(ICAM-1)、肺表面活性蛋白-A(SP-A)的表达。结果:与假手术组比较,CLP模型组主要表现为肺组织微血管通透性增加,肺泡壁增厚,间质水肿,白细胞浸润,MPO活性明显增强;炎症因子TNF-α,IL-1β和IL-6的表达水平升高(P<0.05);与CLP模型组比较,CORM-2干预组肺间质水肿程度减轻,白细胞浸润明显减少,以上炎症因子的表达明显受到抑制(P<0.05)。结论:CDRM-2可显著抑制脓毒症机体炎症细胞因子和ICAM-1、SP-A的表达,降低MPO活性,减少中性粒细胞的聚集,减轻组织炎症反应,对脓毒症小鼠肺部炎症反应有显著的抑制作用。
- 张萍邹向前石庚生孙炳伟
- 关键词：脓毒症一氧化碳炎症反应
- 外源性一氧化碳释放分子2对脓毒症时Janus激酶/信号转导和转录激活子通路活化的抑制作用被引量：4
- 2010年
- 目的 了解外源性一氧化碳释放分子2（CORM2）对脓毒症时Janus激酶/信号转导和转录激活子（JAK/STAT）信号通路活化的抑制作用.方法 将RAW264.7细胞分为正常对照组、LPS（10 μg/mL LPS,浓度下同）组、LPS＋无活性CORM-2组、LPS＋小剂量CORM-2（50 μmol/LCORM-2）组、LPS＋大剂量CORM-2（100μmol/L CORM-2）组,ELISA法检测细胞上清液中TNF-α的水平及蛋白质印迹法检测JAK1、JAK3分子磷酸化水平.另将35只雄性BALB/c小鼠按随机数字表法分为正常对照组、盲肠结扎和穿孔术（CLP）组、CLP＋无活性CORM-2（8.0 mg/Kg）组和CLP＋CORM-2（8.0 mg/kg）组.CLP＋CORM-2组除伤后使用CORM-2外,其他处理同CLP组.于伤后24 h按上述方法检测小鼠血浆TNF-α、IL-1β的表达水平以及肝组织JAK1、JAK3分子磷酸化水平.对数据行t检验.结果 与正常对照组[（1.9±0.3）pg/mL]比较,LPS组细胞的TNF-α水平明显升高[（8.2±2.7）pg/mL,t=2.844,P〈0.01],磷酸化JAK1、JAK3蛋白水平也升高;2种剂量LPS＋CORM-2组细胞的TNF-α,水平分别为（5.7±1.4）、（3.2±0.9）pg/mL,较LPS组明显下降（t值分别为2.104、2.363,P值均小于0.05）,JAK1、JAK3分子的磷酸化水平呈浓度依赖性下降.与正常对照组比较,CLP组血浆TNF-α、IL-1β水平明显升高（t值分别为2.916、2.796,P值均小于0.01）,小鼠肝组织JAK1、JAK3分子的磷酸化水平亦明显升高.CLP＋CORM-2组TNF-α、IL-1β血浆水平显著降低（t值分别为2.115、2.398,P值均小于0.05）,肝组织JAK1、JAK3蛋白的磷酸化得到有效抑制.结论 CORM-2能明显抑制JAK分子磷酸化,继而抑制JAK/STAT信号通路的活化,减少下游相关细胞因子的表达,有效防止严重感染时炎症反应的级联反应.
- 孙炳伟张萍邹向前石庚生孙艳
- 关键词：脓毒症细胞因子类信号通路
- 外源性一氧化碳释放分子抑制脓毒症炎症反应的实验研究(英文)被引量：5
- 2008年
- 目的：探讨外源性一氧化碳释放分子对脓毒症炎症反应的抑制作用及可能的机制。方法：应用盲肠结扎及穿孔脓毒症小鼠模型，使用外源性一氧化碳释放分子（CORM-2，8mg／kg体质量，尾静脉注射）进行干预。检测肝、肺脏髓过氧化物酶（MPO）活性。应用内毒素（LPS，10g／ml）刺激的人脐静脉内皮细胞炎症模型，使用外源性一氧化碳释放分子（CORM-2，10～100mol／L）进行干预。检测核因子κB（NF—κB）活性，内皮细胞黏附分子的表达，氧化产物、NO产物以及多形核白细胞对内皮细胞的黏附作用。结果：盲肠结扎及穿孔脓毒症小鼠模型使用外源性一氧化碳释放分子干预后肝、肺组织MPO活性明显下降。CORM-2抑制了LPS刺激导致的NF-κB活性上调。同时，NO产物下降，内皮细胞ICAM-1的表达抑制，白细胞对内皮细胞的黏附作用明显抑制。结论：外源性一氧化碳释放分子通过抑制NF-κB活性，抑制ICAM-1蛋白和NO的表达，抑制白细胞对内皮细胞的黏附作用，进而有效抑制脓毒症炎症反应。
- 孙炳伟陈曦Kazuhiro KatadaRichard F PotterGediminas Cepinskas
- 关键词：一氧化碳炎症反应核因子ΚB
- 外源性一氧化碳释放分子2抑制脓毒症时组织因子的表达被引量：3
- 2009年
- 目的了解外源性一氧化碳释放分子2（CORM-2）对脓毒症时组织因子（TF）表达的抑制作用。方法培养人脐静脉内皮细胞（HUVEC）并分为正常对照组、LPS组（用10μg／mL LPS孵育，浓度下同）、LPS＋二甲亚砜组及LPS＋10μmol／L CORM-2组、LPS＋50μmol／LCORM-2组、LPS＋100μmol／LCORM-2组，培养4h后检测HUVEC的TF活性、TF蛋白表达和核因子κB的活性。将45只雄性C57 BL／6小鼠随机分成健康对照组5只、盲肠结扎和穿孔术（CLP）组20只和CLP＋CORM-2组20只。CLP＋CORM-2组除伤后注射8．0mg／kg CORM-2外，其他处理与CLP组相同。于术后2、6、12、24h（每时相点5只小鼠）检测血浆TF、TF途径抑制物（TFPI）水平，同时检测健康对照组相应指标。结果与正常对照组比较，LPS组HUVEC的TF活性明显升高（P〈0．05），TF蛋白表达增加，核因子κB活性增强；LPS联合3种不同浓度CORM-2处理组的TF活性呈浓度依赖性下降，核因子κB活性、TF蛋白表达减弱。CLP组小鼠血浆TF水平从术后6h[（80．0±11．9）pg／mL]开始上升，明显高于健康对照组[（58．4±6．9）pg／mL，P〈0．05]；术后24h开始下降，但仍高于健康对照组。CLP组血浆TFPI水平未见明显变化。与健康对照组[（12．4±2．8）ng／mL]比较，CLP＋CORM-2组小鼠术后6、12h血浆TFPI水平[分别为（23．7±3．5）、（24．4±5．0）ng／mL]均明显升高（P〈0．05）。结论外源性CORM-2能明显抑制TF活性，减少TF蛋白表达，抑制核因子κB活性；同时明显减少脓毒症时血浆TF水平，提高TFPI水平，有效防止凝血系统活化，维持促凝、抗凝系统的平衡。
- 孙炳伟石庚生张萍邹向前陈曦
- 关键词：一氧化碳脓毒症凝血致活酶血液凝固
- 外源性一氧化碳释放分子2对大肠杆菌活力及毒力的作用被引量：1
- 2013年
- 目的 探讨外源性一氧化碳释放分子2（CORM-2）对大肠杆菌ATCC 25922菌株活力及毒力的作用及可能机制。方法 （1）体外实验1。将菌株按照随机数字表法分为细菌组、细菌＋1.2 mmol/L CORM-2组、细菌＋1.6 mmol/L CORM-2组、细菌＋1.2 mmol/L无活性CORM-2（iCORM-2）组、细菌＋1.6 mmol/L iCORM-2组,每组样本数为6。细菌组不添加任何物质，其余4组添加相应浓度的CORM-2或iCORM-2。于培养0、3、5、8、10、12、16、20、24、27、30、48 h，测定各组菌液的增殖活性，结果以吸光度值（波长为600 nm）表示；同时进行菌落计数。（2）体外实验2。另取菌株，将其分为细菌组和细菌＋0.8 mmol/L CORM-2组，采用基因芯片筛查出大肠杆菌的4个相关基因fliA、dnaK、marA和waaQ进行实时定量PCR（qRT-PCR），检测各基因表达量。（3）在体研究。另取菌株同体外实验1分组及处理，培养至细菌组菌液的吸光度值（波长600 nm）为0.4时，各组收集0.5 mL菌液。将72只C57BL/6小鼠按照随机数字表法分为空白对照组、细菌组、细菌＋1.2 mmol/L CORM-2组、细菌＋1.6 mmol/L CORM-2组、细菌＋1.2 mmol/L iCORM-2组、细菌＋1.6 mmol/L iCORM-2组，每组12只。空白对照组小鼠不行任何处理，其余5组小鼠取对应有或无添加物的0.5 mL菌液进行腹腔注射。注射后对后5组小鼠进行大体观察。注射后6、12 h检测后5组小鼠血清中TNF-α、IL-6水平，注射后12 h收集小鼠肝、肺组织标本检测髓过氧化物酶（MPO）活性。空白对照组小鼠行相同检测。对数据进行重复测量设计方差分析、析因设计方差分析、单因素方差分析和t检验。结果 （1）体外实验1。与细菌组和细菌＋1.2 mmol/L iCORM-2组比较，细菌＋1.2 mmol/L CORM-2组多数时相点细菌增殖活性明显受抑，菌落明显数量减少（F值分别为1170.80、217.52，P值均小于0.01）；与细菌组和细菌＋1.6 mmol/L iCORM-2组比较，细�
- 仇雪枫刘大东孙炳伟梁峰曹杰
- 关键词：脓毒症大肠杆菌
- 外源性一氧化碳释放分子2对脓毒症小鼠血小板活化的影响被引量：1
- 2011年
- 脓毒症时凝血系统的过度激活促进病情发展为脓毒性休克，其中血小板起着非常重要的作用，表现为血小板过度活化并大量黏附聚集，导致病理性血栓形成。
- 孙炳伟王敏王波杨国涛孙艳陈曦
- 关键词：血小板活化外源性一氧化碳脓毒症脓毒性休克病情发展
