上海市科学技术委员会资助项目(064119504)
- 作品数：2 被引量：5H指数：2
- 相关作者：张良平范慧敏陈炳官刘中民韩俊毅更多>>
- 相关机构：同济大学附属东方医院上海中医药大学更多>>
- 发文基金：上海市科学技术委员会资助项目更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 心肌乙酰胆碱敏感钾通道基因敲除小鼠模型的建立被引量：2
- 2010年
- 目的建立Kcnj5基因敲除小鼠模型,构建病理生理或药理实验平台,以确定钾通道和东莨菪碱等药物和心衰治疗的关系。方法用细菌人工染色体(bacterial artificial chromosome,BAC)载体构建了Kcnj5打靶载体,电穿孔到129/S6/SvEv品系雄性小鼠的胚胎干细胞SCR012后,用300μg/ml G418、2μmol/L GanC筛选克隆8 d。打靶后的干细胞显微注射到囊胚后,生育嵌合体再交配繁育杂合子及纯合子。用PCR方法结合片段克隆后基因测序鉴定基因型。免疫组化法证实基因型的表达。结果挑取抗性克隆96个中正确同源克隆数20个,阳性率为20.8%。显微注射C57BL/6J囊胚180枚,14只受体出生12只小鼠中得到4只大于50%嵌合率雄鼠。配育获得29只Kir3.4^(+/-)F1代杂合子。现繁育F4后代获得Kir 3.4^(-/-)纯合子约百只。用单抗对敲除鼠心进行免疫组化鉴定,提示纯合子敲除鼠心为阴性。结论用同源重组法敲除了干细胞靶基因,成功建立Kir 3.4^(-/-)建立鼠系。成功建立Kir 3.4钾通道分子病动物模型。该基因的完全缺如模型有利于隔离了该基因的作用,对与之相关的基因的进一步阻断、拮抗或激活等药物研究,也是一个很好的模型。
- 张良平范慧敏刘中民陈炳官汤家铭
- 关键词：心衰基因打靶胚胎干细胞转基因小鼠模式动物
- 线粒体钾通道Kcna3基因敲除小鼠初步制备被引量：3
- 2012年
- 目的为观察线粒体钾通道在缺血再灌注(I/R)心肌损伤中的作用,探讨其和心衰的关系,制备基因敲除小鼠模型以探讨钾通道单分子作用。方法用BAC载体制备同源重组载体,对129小鼠胚胎干细胞(ES)打靶筛选后,显微注射至C57BL/6J小鼠囊胚获得嵌合小鼠。经尾基因组DNA PCR鉴定和测序,鉴别杂合子小鼠。结果在40只灰色小鼠中初步鉴定出Kcna3+/-基因型F1小鼠8只。结论在国内首先用ES同源重组基因打靶方法,成功育成Kcna3基因敲除鼠杂合子,为下一步获得纯合子鼠奠定了基础。对进一步用钾离子通道病模型研究心肌保护病理生理机制和药物筛选具重要意义。
- 张良平韩俊毅范慧敏刘中民陈炳官
- 关键词：钾通道基因打靶胚胎干细胞转基因小鼠线粒体
