中国农业科学院院长基金(9725-16) 作品数:4 被引量:14 H指数:2 相关作者: 方昌阁 苗向阳 杨文胜 邵建军 任慧英 更多>> 相关机构: 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所 山东农业大学 中国农业大学 更多>> 发文基金: 中国农业科学院院长基金 国家高技术研究发展计划 更多>> 相关领域: 农业科学 生物学 更多>>
单精注射法生产转GFP基因猪胚胎的研究 被引量:6 2007年 卵胞质内单精子注射(ICSI)的出现为治疗人类男性不育提供了新的途径。作为一种家畜胚胎工程新技术,ICSI可以解决猪的多精子受精问题。本研究用冷冻/解冻的猪精子与GFP基因孵育后对猪IVM卵母细胞进行ICSI,通过对猪ICSI卵母细胞发育能力和基因表达效率的分析,初步研究以精子为载体的转基因与卵细胞质内单精注射相结合的技术(SMGT-ICSI)生产转基因猪胚胎的技术路线的可行性。用GFP基因转染的精子注射后化学激活的ICSI卵母细胞基因表达率显著高于电激活处理的ICSI卵母细胞的基因表达率。用精子头部注射的猪卵母细胞和用完整精子注射的猪卵母细胞总基因表达效率无显著差异(P>0.05)。结果表明,用冷冻/解冻后的猪精子或精子头部与外源DNA孵育后通过ICSI方法生产转基因胚胎是可行的。 苗向阳 方昌阁 邵建军 朱瑞良 任慧英关键词:卵母细胞 胚胎 牛输卵管上皮对小鼠胚胎发育的影响 被引量:4 2007年 模拟发情期(0-6 d)母牛外周血雌激素和孕酮浓度的变化,添加17β-雌二醇和孕酮至TCM-199中,体外培养间情期牛输卵管上皮细胞(BOECs),同时观察了BOECs分泌蛋白(BOEP)、发情期母牛输卵管冲洗蛋白(BOP)和小牛输卵管冲洗蛋白(COP)对小鼠胚胎发育的影响。结果表明:①类固醇激素可以调节和启动体外培养的间情期牛输卵管上皮细胞的分泌活动;②BOEP比BOP和COP能极显著地促进胚胎的分裂和发育(P〈0.001);③与对照组(未添加外源蛋白质,只添加胎牛血清)相比,BOEP的囊胚形成率极显著低于对照组(P〈0.01),可能是缺乏某些分子量低于10 kD蛋白因子的协同作用,同时30~56kD分泌蛋白的存在,也可能参与了抑制和阻碍胚胎分裂和发育的过程。 方昌阁 苗向阳 杨文胜关键词:早期胚胎 体外培养 类固醇激素对牛输卵管上皮细胞特异性糖蛋白基因表达作用的研究 被引量:2 2004年 模拟发情期母牛体内类固醇激素水平,在培养乏情期母牛输卵管上皮细胞的体系中添加雌二醇(E2)、孕酮(P)和血小板激活因子(plateletactivatingfactor,PAF),以诱导细胞的分泌作用。借助Northern的斑点杂交技术分析输卵管上皮特异性糖蛋白(OGP)基因的mRNA水平,研究激素及生长因子对体外培养的乏情期母牛输卵管上皮细胞分泌OGP的影响。结果显示:E2、P和PAF可以促进乏情期母牛输卵管上皮细胞OGP基因的表达。 苗向阳 方昌阁 杨文胜关键词:类固醇激素 特异性 糖蛋白基因 斑点杂交技术 乏情 发情期 水平显微注射法制备转基因小鼠的研究 被引量:2 2006年 由于传统显微注射法具有操作繁琐、技术要求高和外源基因导入率低等局限性,本试验对常规显微注射法进行改进,旨在建立一套比较完善的水平显微注射方法。采用水平微注射系统,将外源DNA片段导入胚胎的雄原核中,获得子代鼠,分娩后3周提取鼠尾基因组DNA,PCR法筛选转基因阳性鼠。本试验采用Puc/BLG IN S和Chym os in基因,共使用710枚鼠原核胚进行研究,胚胎经注射后移植了25只受体,产下仔鼠77只;妊娠率分别为33.3%(5/15)和50%(5/10),胚胎成活率分别为9.47%(41/433)和l3.00%(36/277),阳性率分别为4.88%(2/41)和8.33%(3/36)。将阳性雌鼠配种妊娠后,对外源基因整合情况进行检测,结果表明初步获得了转基因阳性小鼠。 苗向阳 杨文胜 方昌阁关键词:小鼠 转基因