国家自然科学基金(30872540) 作品数:13 被引量:37 H指数:5 相关作者: 董念国 史嘉玮 邹明晖 周建良 陈义初 更多>> 相关机构: 华中科技大学 湖北大学 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 国家高技术研究发展计划 武汉市青年科技晨光计划 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
枝化状聚乙二醇交联改善猪去细胞主动脉瓣的力学性能比较 被引量:6 2011年 目的采用不同相对分子质量枝化状聚乙二醇(PEG)交联巯基化的猪去细胞瓣,观察其对去细胞瓣膜力学性能的影响。方法将25例猪去细胞主动脉瓣随机分为5组:PEG3400组、PEG8000组、PEG12000组、PEG20000组和对照组,常温反应时间4h。测定残余巯基计算交联效率;静态拉伸实验测定力学性能。结果4h交联率依次为92.40%、89.88%、87.87%和87.46%,相对分子质量越小,交联效率越高,PEG3400组与其他各组比较,差异有统计学意义(P〈0.05);力学测试显示,相对分子质量越大,力学强度越高,呈一定的正相关,PEG12000和PEG20000组抗拉强度分别为(3.22±0.41)MPa和(3.19±0.15)MPa,与对照组比较,差异有统计学意义(P〈0.05)。结论相对分子质量12000Da和20000Da枝化状聚乙二醇交联可有效改善猪去细胞瓣的力学性能,有望用于构建新型复合的组织工程瓣膜支架材料的研究应用。 邹明晖 周建良 陈义初 卢翠芬 赵盼 史嘉玮 董念国关键词:主动脉瓣 交联 力学性能 新型组织工程带瓣管道异种异位移植模型的建立 2012年 目的构建一种操作简便、重复性高的小动物带瓣管道异种异位移植模型。方法实验组采用四分枝聚乙二醇交联去细胞的sD大鼠肺动脉带瓣管道作为移植物,以端端吻合方式间断缝合于新西兰白兔右颈总动脉,术后第7、14、28天行多普勒超声检查管道通畅情况,28d后取出管道行石蜡切片形态学检查。对照组大鼠接受假手术。结果手术成功率实验组96.0%(24/25),对照组100.O%(20/20),28d实验组移植管道通畅率87.5%(21/24),对照组吻合VI通畅率95.0%(19/20),两组间差异均无统计学意义(P〉0.05),苏木素-伊红(HE)染色可见局部无明显炎症细胞浸润,瓣膜形态、结构完整。结论此模型操作简便、构建迅速、成功率高,有助于检测组织工程瓣膜在体性能。 胡行健 刘隽炜 史嘉玮 董念国关键词:带瓣管道 枝化状聚乙二醇对牛跟腱I型胶原结构与构象稳定性的影响 被引量:6 2011年 目的观察枝化状聚乙二醇对牛跟腱I型胶原结构与构象稳定性的影响。方法以牛跟腱I型胶原为原料,以枝化状聚乙二醇为交联剂,在有效交联的前提下,通过测定羟脯氨酸含量观察聚乙二醇交联对胶原酶解稳定性的影响,采用示差扫描量热法(DSC)观察胶原热变性温度,采用圆二色光谱法(CD)观察聚乙二醇对胶原三螺旋构象稳定性的影响。结果枝化状聚乙二醇交联组24h降解率为26.79%,而对照组则达97.39%,两者比较差异有统计学意义(P〈0.05)。交联组热变性温度为(79.1±1.2)℃,与对照组(68.6±1.9)℃比较,差异有统计学意义(P〈0.05);CD谱测定特征性吸收峰差异无统计学意义(P〉0.05)。结论枝化状聚乙二醇可显著提高其热变形温度和抗酶性分解能力,而对其三螺旋结构与构象无明显不利影响,是较理想的生物高分子交联剂,可有望用于胶原分子的交联改性。 邹明晖 周建良 陈义初 周诚 史嘉玮 董念国关键词:I型胶原 碱性成纤维细胞生长因子联合间充质干细胞构建组织工程瓣膜的研究 2009年 目的:探讨采用碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)联合间充质干细胞(MSCs)体外构建组织工程瓣膜(TEHV)过程中,MSCs表型特性和基质金属蛋白酶及其抑制物的表达情况。方法:分离培养大鼠MSCs,进行细胞鉴定后种植于去细胞瓣叶支架上。将瓣叶置于含5ng/mlbFGF的培养液中,培养14d构建的TEHV作为A组;B组除培养液中不添加bFGF外,其余同A组;C组为大鼠肌成纤维细胞构建TEHV的对照组。RT-PCR检测各组TEHV中α-SMA、MMP-13和TIMP-1mRNA的表达。结果:MSCs表达CD29(94.82%)和CD44(93.59%)。A组与C组α-SMA、MMP-13和TIMP-1mRNA表达比较均差异无统计学意义(P>0.05),但均高于B组(P<0.05)。结论:采用bFGF联合MSCs体外构建TEHV过程中,通过bFGF的调控作用,可以使MSCs的表型特性和基质金属蛋白酶及其抑制物表达与肌成纤维细胞相当。 洪昊 苏伟 董念国 史嘉玮关键词:间充质干细胞 碱性成纤维细胞生长因子 组织工程瓣膜 基质金属蛋白酶 Application of Decellularized Scaffold Combined with Loaded Nanoparticles for Heart Valve Tissue Engineering in vitro 被引量:4 2011年 The purpose of this study was to fabricate decelluarized valve scaffold modified with polyethylene glycol nanoparticles loaded with transforming growth factor-β1(TGF-β1),by which to improve the extracellular matrix microenvironment for heart valve tissue engineering in vitro.Polyethylene glycol nanoparticles were obtained by an emulsion-crosslinking method,and their morphology was observed under a scanning electron microscope.Decelluarized valve scaffolds,prepared by using trypsinase and TritonX-100,were modified with nanoparticles by carbodiimide,and then TGF-β1 was loaded into them by adsorption.The TGF-β1 delivery of the fabricated scaffold was measured by asing enzyme-linked immunosorbent assay.Whether unseeded or reseeded with myofibroblast from rats,the morphologic,biochemical and biomechanical characteristics of hybrid scaffolds were tested and compared with decelluarized scaffolds under the same conditions.The enzyme-linked immunosorbent assay revealed a typical delivery of nanoparticles.The morphologic observations and biological data analysis indicated that fabricated scaffolds possessed advantageous biocompatibility and biomechanical property beyond decelluarized scaffolds.Altogether this study proved that it was feasible to fabricate the hybrid scaffold and effective to improve extracellular matrix microenvironment,which is beneficial for an application in heart valve tissue engineering. 邓诚 董念国 史嘉玮 陈思 徐磊 史峰 胡行健 张先正血管内皮细胞生长因子修饰的聚乙二醇化去细胞瓣构建心脏瓣膜复合支架 被引量:7 2011年 目的对去细胞瓣进行聚乙二醇(PEG)化改性和血管内皮细胞生长因子(VEGF)共价修饰,以改善去细胞瓣力学性能和生物学性能,并联合内皮祖细胞构建心脏瓣膜复合支架。方法枝化状PEG末端的丙烯酰基与引入到去细胞瓣上的巯基,通过迈克尔加成反应完成去细胞瓣的PEG化,并作去细胞瓣PEG化前后以及天然主动脉瓣的生物力学测定;通过PEG化去细胞瓣上未饱和的丙烯酰基与VEGF中半胱氨酸残基上的巯基发生另一个迈克尔加成反应,对去细胞瓣进行VEGF共价修饰,免疫荧光测定VEGF修饰效果;在VEGF修饰的PEG化去细胞瓣、去细胞瓣和PEG化去细胞瓣上种植内皮祖细胞(EPCs),培养10d后行瓣膜上DNA含量测定、苏木素-伊红染色和扫描电镜。结果力学测试显示:PEG化去细胞瓣的最大抗张强度较单纯去细胞主动脉瓣明显提高(P<0.05),而与天然主动脉瓣相比无差异(P>0.05);免疫荧光检测显示:VEGF可有效地共价修饰PEG化去细胞瓣;与PEG化去细胞瓣和单纯去细胞瓣相比,VEGF修饰的PEG化去细胞瓣明显促进EPCs的增殖,并且可在瓣膜表面形成一层连续的单细胞层。结论 PEG化可明显改善去细胞瓣的力学性能,并且VEGF修饰PEG化去细胞瓣可促进支架上黏附细胞的增殖,有利于改善组织工程心脏瓣膜的构建。 周建良 邹明晖 胡行健 邓诚 史嘉玮 董念国关键词:心脏瓣膜 聚乙烯二醇类 血管内皮生长因子A 去细胞瓣 聚乙二醇去细胞瓣复合支架联合人主动脉瓣膜间质细胞体外构建组织工程心脏瓣膜 2012年 目的:运用聚乙二醇(PEG)交联猪去细胞瓣,共价接枝GRGDSPC多肽(甘氨酸-精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸-丝氨酸-脯氨酸-半胱氨酸),并联合人主动脉瓣膜间质细胞(HAVICs)体外构建组织工程心脏瓣膜。方法:通过迈克尔加成反应,将去细胞瓣支架上引入的巯基与枝化状PEG末端丙烯酰基共价结合,使PEG交联去细胞瓣,并行生物力学检测。再利用PEG-去细胞瓣支架上未饱和的丙烯酰基与GRGDSPC多肽末端半胱氨酸的巯基发生迈克尔加成反应,对PEG-去细胞瓣支架行GRGDSPC多肽共价修饰,免疫荧光测定GRGDSPC多肽修饰效果。在RGD-PEG-去细胞瓣复合支架上种植HAVICs,缝制于生物反应器内,体外构建心脏瓣膜。接种2、4、8h后,通过细胞计数观察细胞粘附情况。体外培养10d后行形态学观察和DNA含量测定。结果:力学测试结果显示,PEG-去细胞瓣支架的最大抗张强度较单纯去细胞瓣支架明显提高[(7.53±0.32)Mpa∶(5.65±0.28)Mpa],差异有统计学意义(P<0.05),与天然主动脉瓣的差异无统计学意义(P>0.05)。免疫荧光检测显示,GRGDSPC多肽可有效地与PEG-去细胞瓣共价接枝。不同时段细胞粘附计数及形态学观察提示,RGD-PEG-去细胞瓣复合支架明显促进HAVICs的粘附,并可在瓣膜表面形成连续单细胞层。DNA含量测定提示,RGD-PEG-去细胞瓣复合支架DNA含量明显增高(P<0.05)。结论:PEG交联去细胞瓣可明显改善瓣膜支架力学性能,GRGDSPC多肽接枝的PEG-去细胞瓣复合支架,可促进种子细胞的粘附,改善瓣膜支架生物学性能。 史峰 邓诚 胡行健 史嘉玮 董念国关键词:去细胞瓣 聚乙二醇 生物反应器 粘附 聚乙二醇交联去细胞瓣构建组织工程瓣膜复合支架 被引量:7 2011年 目的采用分子量20kDa的枝化状丙烯酰化聚乙二醇(PEG)交联巯基化去细胞瓣,构建组织工程瓣膜复合支架,并对支架的结构稳定性、力学性能和细胞相容性进行初步检测。方法取猪新鲜主动脉瓣叶,进行脱细胞瓣处理,制备去细胞瓣并巯基化。戊二醛固定去细胞瓣,PEG交联巯基化去细胞瓣。形态学观察去细胞及交联效果,差示扫描量热法(DSC)测定热收缩温度,Ⅰ型胶原酶溶液测定其抗酶性分解能力,拉伸实验测定其抗拉强度和弹性模量,并采用AlamarBlue法测定支架对MRC-5人胚肺细胞的细胞毒性。结果 HE染色和扫描电镜(SEM)显示去细胞完全,细胞外基质保存完整;PEG交联后瓣叶变薄,纤维增粗呈束。PEG交联瓣的热收缩温度为(75.16±0.69)℃,与去细胞瓣[(67.63±1.09)℃]相比有显著提高,其差异有统计学意义(P<0.05)。PEG交联瓣6h及12h酶性分解率分别为(17.52±1.69)%和(48.83±2.67)%,与去细胞瓣[(64.91±2.05)%和(98.23±1.20)%]相比,分解率显著下降。PEG交联瓣抗拉强度较去细胞瓣显著为高,并达到天然瓣水平,弹性模量则远高于其他各组。细胞毒性试验显示PEG组和对照组活力细胞差别为(1.82±0.03)%,无统计学意义(P>0.05)。结论 PEG交联可显著改善去细胞瓣结构稳定性和力学性能,而无明显细胞毒性,有望用于组织工程瓣膜复合支架的构建。 邹明晖 周建良 陈义初 胡行健 邓诚 史嘉玮 董念国关键词:聚乙烯二醇类 去细胞瓣 组织工程心脏瓣膜支架材料的研究与进展 被引量:5 2010年 背景:组织工程心脏瓣膜有望克服生物瓣膜和机械瓣膜的缺点而从根本上解决瓣膜病外科面临的问题。其中,支架材料扮演着关键角色,而选择何种支架材料是经常困扰研究者的难题。目的:文章在强调细胞外基质与细胞的相互作用在组织动力学中有重要作用的基础上,对目前广泛使用的支架材料及其优缺点进行简要综述。方法:使用Pubmed文献检索数据库,采用医学主题词检索,检索词为"心脏瓣膜;组织工程",时间范围为2000-01/2009-08,语言限定为英文。共检索到186篇文章,其中综述34篇,实验研究152篇。选择文章主要内容与组织工程心脏瓣膜支架材料直接相关的、针对性强、代表性好、相关领域权威杂志的文章共39篇进行综述。结果与结论:天然支架材料因其优越的生物相容性和三维空间构象,具有其他材料不可比拟的仿生性。合成可降解高分子材料具有良好的可控性和力学性能也备受研究者青睐,而将天然材料和高分子材料融合一体构建的复合支架材料为组织工程心脏瓣膜的研究提供了新的策略和方向,具有广阔的应用前景。 邹明晖 董念国关键词:心脏瓣膜 生物材料 人脐带血内皮祖细胞与血管内皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子共培养及其增殖和迁移能力 被引量:9 2011年 背景:目前组织工程心脏瓣膜再内皮化种子细胞主要来源于成熟内皮细胞,内皮祖细胞作为内皮细胞的前体细胞越来越受到人们的关注。目的:分离和扩增人脐带血内皮祖细胞,观测其体外生物学特性。方法:密度梯度离心法分离新鲜的脐血中单个核细胞,在含血管内皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子的培养液中培养扩增,通过形态学、免疫荧光和流式细胞仪等对贴壁细胞进行鉴定;并与脐静脉内皮细胞进行增殖和迁移能力比较。结果与结论:随着培养和诱导时间延长,贴壁细胞形态发生明显的改变,从小圆形变成梭形,逐渐分化成典型成熟内皮细胞的鹅卵石样形态,并可形成特征性的克隆;体外诱导7d后90%以上贴壁细胞呈Dil-ac-LDL和FITC-UEA-I双阳性;贴壁细胞流式细胞仪分析显示:培养7d的细胞VEGFR-2、CD34和CD133表达分别占(77.4±4.9)%、(52.4±6.6)%和(19.4±2.1)%,培养28d的细胞VEGFR-2和CD34表达分别占(81.1±7.4)%和(7.6±3.1)%,而未检测到CD133表达;人内皮祖细胞增殖和迁移能力明显高于人脐静脉内皮细胞(P<0.05),并且细胞数量可扩增达109L-1。结果显示用密度梯度离心法和贴壁筛选法,可从人脐带血分离、纯化内皮祖细胞;内皮祖细胞可诱导分化为内皮细胞,增殖和迁移能力都很强。 周建良 邹明晖 陈义初 周诚 史嘉玮 董念国关键词:脐带血 内皮祖细胞 单个核细胞 组织工程心脏瓣膜