国家自然科学基金(30700806)
- 作品数：12 被引量：41H指数：4
- 相关作者：李庆昌王恩华高辉谢成耀刘树立更多>>
- 相关机构：中国医科大学中国医科大学附属第一医院辽宁省人民医院更多>>
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- 肝癌细胞中Connexin32蛋白可调控表达亚克隆的建立被引量：3
- 2009年
- 目的:利用Tet-off基因表达体系建立人间隙连接蛋白Connexin32基因可调控表达的肝癌细胞系,为探讨Connexin32蛋白表达与肝癌细胞的增殖、运动和侵袭能力的相关性奠定基础。方法:利用基因重组方法建立人Connexin32cDNA的逆病毒表达载体pRevTRE-Cx32;利用逆病毒感染法将Connexin32表达载体和调控质粒pRevTet-off转入人肝癌细胞系HuH7中,筛选出稳定整合了两种载体的细胞克隆;western-blot法检测Connexin32蛋白表达的诱导率。结果:建立了可以通过向细胞培养液中添加或去除Doxycycline调控Connexin32蛋白表达的肝癌细胞HuH7亚克隆,western-blot结果显示当从细胞培养液中去除Doxycycline后,Connexin32表达明显升高,呈现4倍左右的诱导率。结论:成功建立了Connexin32蛋白可诱导表达的肝癌细胞HuH7 Tet-offCx32亚克隆。
- 刘树立李庆昌谢成耀邱雪杉王恩华
- 关键词：肝癌间隙连接蛋白
- 间隙连接蛋白Connexin32对肝癌侵袭和转移能力的影响
- 2009年
- 目的:探讨肝癌细胞中间隙连接蛋白Connexin32对肝癌细胞体内侵袭和转移能力的影响。方法:利用可以通过增减细胞外环境中Doxycycline调控Connexin32蛋白表达的肝癌细胞HuH7Tet-off Cx32亚克隆,将之原位移植到重度联合免疫缺陷鼠肝脏浆膜下,通过饮用水中添加(去除)Doxy-cycline调控动物体内Connexin32的表达,8周后处死小鼠,观察肿瘤形成及转移情况,蛋白质印迹法及免疫组织化学方法检测其与对照组的Connexin32蛋白表达情况。结果:移植HuH7Tet-off Cx32细胞的小鼠,在饮用水中去除Doxycycline诱发Connexin32高表达条件下,形成明显的肝内转移灶和腹膜转移灶;而饮用水中添加了Doxycycline的小鼠没有发现明显的转移灶形成。免疫组化证实,高表达的Connexin32蛋白定位于细胞质。蛋白质印迹法结果显示,Doxycycline在小鼠体内呈现较好的诱导性。结论:细胞质内异位蓄积的Connexin32蛋白明显增强肝癌细胞的体内侵袭和转移能力。
- 李庆昌谢成耀高辉徐洪涛邱雪杉王恩华
- 关键词：肝肿瘤肿瘤转移肿瘤侵润
- Wnt/β-catenin信号转导通路与肺腺癌顺铂耐药作用机制研究被引量：9
- 2014年
- 目的:探讨Wnt/β-catenin信号转导通路在肺腺癌顺铂耐药中的分子作用机制。方法:体外常规培养人肺腺癌A549细胞和其顺铂耐药A549/DDP细胞,取对数生长期的细胞用于实验。采用MTT法检测A549和A549/DDP细胞对顺铂的IC50;采用AnnexinⅤ/PI法和Hoechst 33342染色法检测顺铂处理后2种细胞的凋亡率;采用蛋白质印迹法检测2种细胞中β-catenin和Survivin的表达;采用siRNA干扰沉默β-catenin的表达,检测A549/DDP细胞的IC50值、细胞凋亡率及β-catenin和Survivin的表达。结果:顺铂对A549/DDP细胞的IC50值为(28.984±1.404)μmol/L高于A549细胞的(5.888±0.338)μmol/L,t=27.696,P<0.001;20μmol/L顺铂诱导A549/DDP细胞凋亡率为(21.75±0.96)%,显著低于A549细胞的(39.38±0.88)%,t=23.474,P<0.001。A549/DDP细胞中β-catenin蛋白的表达为1.890±0.060,显著高于A549细胞的1.063±0.035,t=20.595,P<0.001;在A549/DDP细胞中Survivin蛋白表达量为1.107±0.061,明显高于A549细胞的0.503±0.025,t=15.814,P<0.001。RNAi技术沉默β-catenin蛋白耐药性(14.615±0.939)μmol/L,显著低于未沉默β-catenin A549/DDP细胞的(28.984±1.404)μmol/L,t=14.732,P<0.001;RNAi技术沉默β-catenin蛋白细胞凋亡率为(37.57±0.64)%,显著高于未沉默β-catenin A549/DDP细胞的(21.75±0.96)%,t=23.699,P<0.001;RNAi技术沉默β-catenin蛋白下游靶基因Survivin蛋白的表达为0.527±0.065,显著低于A549/DDP组的1.027±0.025和瞬时转染阴性对照siRNA组的1.033±0.040,F=116.944,P<0.001。结论:抑制Wnt/β-catenin信号转导通路的活性可以降低A549/DDP细胞对顺铂的耐药性。
- 高原刘赞张秀伟贺佳妮潘泳岐郝凤霞谢玲玲李庆昌
- 关键词：Β-连环蛋白SURVIVIN顺铂耐药
- 高尔基体内Connexin32蛋白对肝癌细胞Li-7的运动和侵袭能力的影响
- 2012年
- 目的探讨肝癌细胞中间隙连接蛋白Connexin32对肝癌细胞运动和侵袭能力的影响及可能的分子机制。方法利用逆病毒感染的方法在肝癌细胞系Li-7中建立Connexin32蛋白表达可通过doxycyc-line调控的Li-7 Tet-off Connexin32稳定克隆,应用高尔基体染色确定Connexin32蛋白亚细胞定位,应用刮擦负荷-染料转移实验(SL-DT)方法评价间隙连接介导的细胞间通讯(GJIC)水平,运用体外跨室细胞运动及侵袭方法验证Connexin32表达与肝癌细胞运动和侵袭能力的相关性。结果利用逆病毒感染方法建立了稳定整合了Connexin32 cDNA和调控序列Tet-off的肝癌细胞Li-7 Tet-off Connexin32亚克隆,Western-blot结果显示外源性Connexin32蛋白表达于细胞质中且受细胞培养液中多西环素(Dox)调控,当从细胞培养液中去除Dox时,Connexin32表达量增加到基础表达量的4倍;高尔基体染色显示Connexin32蛋白定位于高尔基复合体内,SL-DT实验证实外源性高尔基体内表达的Connexin32蛋白使相邻肝癌细胞间不能形成有效的GJIC,跨室细胞运动和侵袭实验表明次高尔基体内异常蓄积的Connexin32蛋白过表达显著增强肝癌细胞的体外运动和侵袭能力(P均<0.05)。结论高尔基体内异位表达的Connexin32蛋白GJIC非依赖性发挥促进肝癌细胞运动和侵袭能力的作用。
- 李庆昌王鑫潘泳岐刘树立邱雪杉王恩华
- 关键词：连接蛋白类肿瘤侵润
- KiSS-1、KiSS-1受体GPR54及基质金属蛋白酶-9与非小细胞肺癌侵袭转移的关系被引量：9
- 2011年
- 目的:研究KiSS-1、KiSS-1受体GPR54及基质金属蛋白酶-9(MMP-9)在非小细胞肺癌组织中的表达及其与非小细胞肺癌侵袭转移的关系,探讨三者在非小细胞肺癌侵袭转移中是否具有相关性。方法:选择98例原发性非小细胞肺癌癌组织及30例癌旁肺组织的标本,采用链霉素抗生物素蛋白-过氧化物免疫组化法(S-P法)检测组织中KiSS-1、GPR54及MMP-9的表达情况。结果:KiSS-1在非小细胞肺癌组织中的表达显著低于癌旁肺组织(P<0.01);MMP-9在非小细胞肺癌组织中的表达显著高于癌旁肺组织中的表达(P<0.01)。KiSS-1在有淋巴结转移的非小细胞肺癌中的表达显著低于无淋巴结转移者(P<0.01);MMP-9在有淋巴结转移的非小细胞肺癌组织中的表达显著高于无淋巴结转移者(P<0.05)。KiSS-1与GPR54、MMP-9在肺癌组织中的表达均具有负相关性(P<0.05)。结论:KiSS-1基因表达下调和GPR54、MMP-9蛋白过表达与非小细胞肺癌的侵袭转移密切相关。
- 李银玲高辉王鑫潘泳歧李庆昌王恩华
- 关键词：KISS-1GPR54基质金属蛋白酶-9非小细胞肺癌肿瘤转移
- 膜细胞骨架连接蛋白Ezrin与肿瘤侵袭转移相关性的研究现状被引量：5
- 2009年
- 目的:总结膜细胞骨架连接蛋白Ezrin与肿瘤的侵袭转移之间关系的研究现状,探讨其在肿瘤转移中的重要作用及复杂机制。方法:应用pubMed及CNKI期刊全文数据库检索系统,以"Ezrin,埃兹蛋白,肿瘤"等为关键词,检索1999-2009年的相关文献,共检到文献486条。纳入标准:1)Ezrin促进肿瘤转移的机制。2)Ezrin抑制肿瘤转移的机制。3)Ezrin在不同肿瘤中的异常表达与预后。根据纳入标准,精选分析35篇文献。结果:Ezrin可以通过多种复杂的机制,在不同条件下发挥促进或是抑制肿瘤转移的作用。但是Ezrin在不同肿瘤中上调或下调的具体机制尚不清楚。它与其他肿瘤侵袭转移相关因子间的关系及信号转导机制也需进一步完善。结论:虽然Ezrin在肿瘤侵袭转移中的作用具有两面性,但其具体的调控机制和作用条件需要更加深入地研究和综合分析。
- 高辉李庆昌
- 关键词：连接蛋白类肿瘤转移预后
- 膜骨架连接蛋白Ezrin对肺癌细胞侵袭和转移能力的影响
- 2011年
- 目的探讨肺癌细胞中膜骨架连接蛋白Ezrin对体外培养的肺癌细胞系的增殖、凋亡、侵袭和转移能力的影响,明确Ezrin在肺癌中的异常表达与临床病理因素之间的关系。方法转染EzrinSiRNA后,应用流式、MTT、Transwell和划痕实验等技术评价肺癌细胞体外侵袭转移和增殖能力的变化。结果转染EzrinSiRNA后,划痕实验、MTT和Transwell等实验结果证明肺癌细胞的侵袭和增殖能力减弱。流式细胞仪技术检测凋亡的结果证明Ezrin沉默后,肺癌细胞凋亡数目增加。结论膜细胞骨架连接蛋白Ezrin可以明显促进肺癌细胞的侵袭转移。
- 高辉李庆昌
- 关键词：EZRIN连接蛋白肺癌
- β-catenin缺失抑制bcr—abl所致白血病细胞中Stat-5α磷酸化被引量：2
- 2010年
- 目的研究经bcr—abl诱导形成的白血病细胞中β—catenin缺失对Stat-5α蛋白磷酸化水平的影响。方法利用已经建立的特异性骨髓造血系统β-catenin基因敲除小鼠，分离其骨髓细胞，应用逆病毒感染方法将外源性bcr-abl基因片段导入β—catenin缺失的骨髓细胞内，免疫荧光和Western blotting方法检测Star-5α蛋白磷酸化水平，应用real—time PCR及Western blotting分别检测B．catenin缺失细胞及对照细胞bcr．abl转录及蛋白表达。结果与对照组相比，β—catenin缺失的白血病细胞Stat-5α磷酸化水平明显降低，而Stat-5α总蛋白量变化不明显；Western blotting结果显示β—catenin缺失的慢性髓细胞白血病（CML）细胞中酪氨酸磷酸化总水平及bcr—abl蛋白表达明显降低，而B—catenin缺失的急性淋巴细胞白血病（ALL）细胞中酪氨酸磷酸化总水平及bcr—abl蛋白表达无明显改变。结论bcr-abl诱导形成的白血病转化细胞中，B—catenin缺失抑制bcr—abl蛋白表达及Stat-5α磷酸化。
- 李庆昌谢成耀刘树立方长青赵忱
- 关键词：白血病白血病Β连环素BCR-ABL
- 黏附调节因子p120ctn 3A细胞核靶向表达质粒的构建及鉴定
- 2012年
- 目的:既往少数研究表明p120ctn存在核浆穿梭现象,为研究细胞核内p120ctn的功能,我们试图构建p120ctn 3A细胞核定向表达载体pCMV/p120ctn 3A。方法:采用PCR方法扩增人p120ctn 3A活性片段,将其插入细胞核定向表达载体pCMV/myc/nuc,构建重组体pCMV/p120ctn 3A,经脂质体介导转染肺癌细胞A549,用荧光显微镜观察绿色荧光信号,免疫细胞化学及Western blot鉴定其在肺癌细胞A549中的表达与定位。结果:限制性双酶切及DNA测序分析结果显示插入pCMV/p120ctn 3A的片段为2496bp左右,与预期p120ctn 3A基因片段大小相同。荧光显微镜观察到绿色荧光信号定位于细胞核内,免疫细胞化学结果显示表达的p120ctn 3A定位于A549细胞核。Western blot结果显示转染pCMV/p120ctn 3A的A549细胞p120ctn 3A蛋白表达量显著上调。结论:成功构建了p120ctn 3A细胞核定向表达载体pCMV/p120ctn 3A。
- 李庆昌戴顺东王鑫潘泳岐徐洪涛王恩华
- 关键词：P120CTN重组质粒
- 细胞浆内Connexin32蛋白增强肝癌细胞Li-7的运动和侵袭能力被引量：1
- 2010年
- 目的:探讨肝癌细胞中间隙连接蛋白Connexin32对肝癌细胞运动和侵袭能力的影响。方法:利用逆病毒感染的方法在肝癌细胞系Li-7中建立Connexin32蛋白表达可通过doxycycline调控的Li-7 Tet-off Cx32稳定克隆,运用体外transwell migrationandinvasion assay方法验证Connexin32表达与肝癌细胞运动和侵袭能力的相关性。结果:建立稳定整合了Connexin32 cDNA和调控序列Tet-off的肝癌细胞Li-7亚克隆,Western-blot结果显示外源性Connexin32蛋白表达于细胞浆中,亚细胞定位分析证实Connexin32蛋白定位于高尔基复合体内,此细胞浆内Connexin32蛋白过表达显著增强肝癌细胞的体外运动和侵袭能力。结论:肝癌细胞浆内异位表达的Connexin32蛋白发挥促进肿瘤进展的作用。
- 李庆昌高辉谢成耀刘树立邱雪杉王恩华
- 关键词：间隙连接蛋白肝癌肿瘤进展
