国家自然科学基金(30700813) 作品数:9 被引量:27 H指数:3 相关作者: 彭志海 裘国强 周崇治 王晓亮 韩杨 更多>> 相关机构: 上海市第一人民医院 上海交通大学附属第一人民医院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 更多>>
磷脂酶Cε1的过表达可抑制结肠癌SW6 20细胞的迁移并诱导其凋亡 被引量:4 2011年 目的:探讨磷脂酶Cε1(phospholipase C epsilon-1,PLCE1)基因过表达对结肠癌细胞迁移、细胞周期及凋亡等生物学特性的影响。方法:采用脂质体转染的方法建立PLCE1过表达的SW620细胞株,实验分为3组:亲本细胞组(未转染基因),对照组[转染含绿色荧光蛋白(greenfluorescent protein,GFP)的空质粒],实验组(转染质粒pcDNA-DEST53-PLCE1)。分别采用实时荧光定量-PCR(real-time fluorogenic quantitative-PCR,RFQPCR)和蛋白质印迹法检测PLCE1 mRNA和蛋白在SW620细胞中的表达;Transwell小室法检测PLCE1过表达对SW620细胞迁移能力的影响,FCM法检测对细胞周期及凋亡率的影响,DNA Ladder法检测对细胞凋亡的影响。结果:PLCE1过表达可抑制结肠癌SW620细胞的迁移能力,实验组迁移细胞数为(8.80±1.72)个,而亲本组和对照组分别为(32.6±2.42)和(32.2±3.25)个,3组间差异有统计学意义(P<0.01)。PLCE1过表达可导致结肠癌细胞周期G1期延长,并出现凋亡。结论:PLCE1过表达可抑制结肠癌细胞的迁移能力,并引起细胞凋亡。PLCE1基因过表达使SW620结肠癌细胞恶性程度降低,该基因可能是新的结肠癌相关抑癌基因。 王晓亮 周崇治 裘国强 樊军卫 邢同海 李涛 孙星 唐华美 彭志海关键词:结肠肿瘤 磷脂酶C 转染 SW620细胞 散发性结直肠癌相关半胱氨酸甘氨酸富集蛋白1抑癌基因的筛选 2013年 目的本课题组前期研究对染色体1q31.1-32.1区域进行杂合缺失精细定位,发现D1S413-D1$2622区域存在高频杂合缺失现象,提示可能有抑癌基因的存在。本研究在此基础上,对该区域与散发性结直肠癌发生相关的抑癌基因开展筛选研究。方法构建包含上述区域基因的基因芯片,对19例散发性结直肠癌标本进行基因芯片扫描,并与其临床病理特征进行统计学分析,筛选该区域与结直肠癌相关的未知抑癌基因,然后对筛选出的候选基因采用Real-timePCR进行初步验证。结果根据前期实验结果,通过检索,挑选了25个基因进行散发性结直肠癌相关基因的筛选。结果发现半胱氨酸甘氨酸富集蛋白1(cysteine and glycine-rich protein1,CSRPl)、LMODl、PPPlR12B和CFHL34个基因表达显著下调。这4个基因表达情况与结直肠癌患者的临床病理特征无关。通过生物信息学分析,推测CSRPl基因可能是该区域中与结直肠癌相关的抑癌基因。通过Real-timePCR验证结果也发现CSRPl基因在结直肠癌组织中表达显著下调,与芯片结果相符。结论CSRPl基因可能是一个与结直肠癌发生相关的新的抑癌基因。 周崇治 韩杨 王晓亮 裘国强 彭志海关键词:结直肠肿瘤 基因 肿瘤抑制 磷酯酶C家族新成员—磷酯酶CE1 被引量:8 2008年 磷酯酶CE1是近几年发现的新的磷酯酶C同工酶,对其研究尚未深入。其分子结构中特有的CDC25和RA结构域使其功能上与小G蛋白关系密切。磷酯酶CE1激活后介导信号从细胞膜到细胞核的传递,从而调控某些基因的表达,调节细胞的生长、分化等过程。最近发现,磷酯酶CE1和肿瘤、肾病综合征等多种疾病的发生相关。 王晓亮 彭志海关键词:同工酶 信号转导 结直肠癌相关基因磷脂酶Cε1的筛选及初步验证 2011年 目的 筛选新的结直肠癌相关基因并初步验证,探讨结直肠癌的发生、发展机制.方法 在以往研究的基础上,采用基因芯片对既往发现的杂合缺失区域( 10q23.31-24.33)进行扫描,筛选结直肠癌相关候选基因,用real-time PCR初步分析候选基因的表达情况.扩大样本量,通过RT-PCR、免疫组化和Western blot的方法对筛选结果进行初步验证,并结合临床资料分析所筛选基因与结直肠癌发生的关系.结果 基因芯片显示10q23.31-24.33区域磷脂酶Cε1(phospholipase C,epsilon-1,PLCE1)、CPEB3、NKX2-3、SEMA4G 4个基因表达下调,real-time PCR与芯片结果基本一致.RT-PCR、免疫组化和Western blot结果显示PLCE1基因在46%结直肠癌组织中表达下调,年龄<60岁和低分化腺癌与该基因表达下调相关(P<0.05),其他临床病理因素与该基因表达下调无明显相关性.结论 PLCE1基因表达下调与结直肠癌的发生相关.PLCE1基因可能对结直肠癌的发生起抑制作用. 王晓亮 周崇治 裘国强 樊军卫 唐华美 彭志海关键词:结直肠肿瘤 寡核苷酸序列分析 基因表达 Screening of tumor suppressor genes on 1q31.1-32.1 in Chinese patients with sporadic colorectal cancer 被引量:8 2008年 ZHOU Chong-zhi QIU Guo-qiang WANG Xiao-liang FAN Jun-wei TANG Hua-mei SUN Yu-hao WANG Quan HUANG Fei YAN Dong-wang LI Da-wei PENG Zhi-hai关键词:肿瘤抑制基因 结肠直肠癌 2号染色体散发性结直肠癌相关抑癌基因筛选 被引量:1 2013年 目的本课题组前期发现散发性结直肠癌2号染色体存在高频杂合缺失现象,提示可能有抑癌基因的存在,本研究拟在该区域筛选与结直肠癌发生相关的抑癌基因。方法构建包含2号染色体高频杂合缺失区域的基因芯片,对19例结直肠癌标本进行表达谱分析,并与临床病理特征加以统计学分析,筛选该区域与结直肠癌相关的未知抑癌基因,然后对筛选出的候选基因采用实时定量聚合酶链反应(Real—timePCR)进行初步验证。结果在前期研究基础上,通过数据库检索,挑选了17个基因进行相关基因筛选。发现ACVRlC在89.47%(17/19)的肿瘤组织中表达下调,其中10例肿瘤组织中下调比例超过2倍。通过Fisher’S精确法分析,ACVRlC的表达与临床病理特征之间无明显相关。在此基础上,通过Real-timePCR验证结果也发现ACVRlC基因的表达与芯片结果相符,在结直肠癌组织中表达显著下调。结论通过表达谱芯片和生物信息学分析,并通过Real—timePCR初步验证,推测ACVRlC基因可能是与结直肠癌发生相关的抑癌基因。 周崇治 韩杨 王晓亮 裘国强 彭志海关键词:散发性结直肠癌 抑癌基因 中国人群1号染色体长臂散发性结直肠癌相关抑癌基因筛选 被引量:1 2012年 目的筛选与中国人群的结直肠癌发生相关的抑癌基因。方法构建包含1号染色体长臂高频杂合缺失区域的基因芯片,对19例结直肠癌标本进行表达谱分析,并与临床病理特征加以统计学分析,筛选该区域与结直肠癌相关的未知抑癌基因。结果通过数据库检索,我们挑选了25个基因进行相关基因筛选。发现CSRPl、LMODl、PPPlRl2B和CFHL34个基因表达显著下调,分别在15、16、16、16例肿瘤组织中表达下调,其中下调比例超过2倍的例数分别为11、11、14、10例。统计学分析发现这4个基因表达与临床病理特征之间无相关。通过生物信息学分析,推测CSRPl基因可能是与结直肠癌发生相关的抑癌基因。结论表达谱芯片以及生物信息学分析表明CSRPl基因可能是结直肠癌发生相关的抑癌基因。 周崇治 韩杨 王晓亮 裘国强 彭志海关键词:结直肠癌 抑癌基因 同源盒基因家族在胃癌中差异表达的研究 被引量:3 2013年 目的观察在胃癌中同源盒(HOX)基因家族表达,探讨两者的相关性。方法采用AffymetrixU133plus2.0人类全基因组表达谱芯片分析在胃癌及其对应正常黏膜中HOX基因家族的差异表达,并行统计学分析。结果HOXA基因家族中HOXA10、HOXA13在胃癌组织中表达明显升高,高表达率均为91.7%(11/12),其TvsNSignal LogRatio值分别为0.4、5.4、4.2、6.1、7.1、5.2、3.4、1.9、1.6、3.0、3.5、3.3和1、4.8、0.3、6.9、4.9、3.5、4.2、4.3、5.4、4.1、2.2、2.8。I司时HOX基因家族中还有多个基因表达上调,其中HOXA家族中HOXAl、HOXA4在胃癌表达升高,表达率均为66.7%(8/12);HOXB家族中HOXB7在胃癌中表达升高,表达率为75.0%(9/12);HOXC家族中HOXCl0也表达升高,表达率为58.3%(7/12);而HOXC5和HOXC8则在肿瘤中呈现低表达,表达率分别为66.7%(8/12)和58.3%(7/12)。结论HOX家族中多个基因在胃癌中差异表达,提示该基因家族与胃癌发生发展密切相关。 周崇治 韩杨 凃威伟 王晓亮 裘国强 彭志海关键词:胃癌 HOXA10 磷脂酶Cε1基因对结肠癌细胞生长的抑制作用 被引量:2 2012年 目的观察磷脂酶Cel(PLCEl)基因过表达对结肠癌细胞生长增殖的影响。方法通过基因转染、0.7g/L浓度的G418压力维持筛选出PLCEl过表达100倍以上的SW620结肠癌细胞株;通过噻唑蓝(MTr)生长曲线、克隆形成、裸鼠成瘤等实验观察PLCEl基因过表达对结肠癌细胞生长及增殖的影响。结果PLCEl基因过表达导致结肠癌细胞生长速度减慢,实验组平板克隆吸光度(A)值为0.3225±0.0065,软琼脂克隆数为11.80±2.56,肿瘤质量(0.317±0.169)g,均较亲本组和对照组显著下降,差异有统计学意义(P〈0.05),提示转染PLCEl基因后细胞恶性程度降低。结论PLCEl过表达抑制结肠癌细胞的生长,该基因可能是新的结直肠癌相关抑癌基因。 王晓亮 周崇治 裘国强 樊军卫 彭志海关键词:磷脂酶C 抑癌基因 结直肠癌