国家自然科学基金(21102094) 作品数:12 被引量:22 H指数:3 相关作者: 刘建军 洪文旭 庄志雄 杨细飞 张航 更多>> 相关机构: 深圳市疾病预防控制中心 暨南大学 湖南农业大学 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 广东省医学科学技术研究基金 深圳市科技计划项目 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 农业科学 更多>>
宫颈癌细胞株HeLa与正常宫颈细胞株Ect1/E6E7的微小RNA表达谱的差异 被引量:6 2016年 目的探讨宫颈癌细胞株HeLa与正常宫颈细胞株Ect1/E6E7中微小RNA(miRNA)分子表达谱的差异。方法选取HeLa细胞和Ect1/E6E7细胞各3个样本分别作为实验组和对照组,采用miRNA芯片筛选两者之间差异表达的miRNA,样品间表达变化标准以上/下调4倍作为阈值范围,并运用miRWalk软件预测差异表达miRNA可能调控的靶基因,并对这些靶基因进行信号通路的富集分析。结果在HeLa细胞中,上调超过4倍差异表达miRNA分子7个,下调超过4倍差异表达miRNA分子16个(P<0.01)。生物信息学分析发现hsa-miR-126-3p的靶基因在肿瘤通路、凋亡通路以及Wnt信号通路上出现聚集;而hsa-miR-25-5p的靶基因肿瘤通路和钙离子信号通路出现聚集;且hsa-miR-205-5p靶基因在TGF-β信号通路和EGFR信号通路出现聚集。结论宫颈癌细胞HeLa与正常宫颈细胞Ect1/E6E7之间存在差异表达miRNA分子,他们可能参与宫颈癌的发生发展机制。 邓晰月 洪文旭 吴运妙 段永恒 段山 刘素纯 刘建军关键词:HELA细胞 姜黄素对纳米二氧化硅诱导HaCaT细胞氧化损伤的保护作用 被引量:2 2013年 目的研究姜黄素对纳米二氧化硅诱导HaCaT细胞损伤的保护作用。方法建立15-nm二氧化硅致HaCaT细胞损伤的体外研究模型,通过CCK-8法检测细胞活力水平;测定细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)漏出量和细胞内丙二醛(MDA)含量,评价细胞的损伤程度。结果姜黄素能明显改善15-nm二氧化硅诱导HaCaT细胞的损伤,与二氧化硅组相比,姜黄素干预组能提高细胞存活率,细胞培养液中的LDH漏出量明显减少(P<0.05),细胞内的MDA明显降低(P<0.05)。结论姜黄素对15-nm二氧化硅诱导的HaCaT的细胞损伤具有一定的保护作用。 洪文旭 洪文旭 周桂凤 胡韬 叶金波 陈晓丹 张航关键词:姜黄素 纳米二氧化硅 HACAT细胞 细胞损伤 膜蛋白质组学在毒理学研究中的应用 膜蛋白是细胞膜的重要组成部分,执行着细胞内外物质交换、细胞识别与免疫应答、信号转导和调控,以及能量传递等重要功能。随着蛋白质组学技术的发展,膜蛋白质组学成为毒理蛋白质组学研究的重要组成部分,为在膜蛋白水平阐明毒理机制和建... 黄爱博 洪文旭 许华 刘建军关键词:膜蛋白质 蛋白质组学 毒理学 不同粒径二氧化硅致人永生化表皮细胞氧化应激相关指标改变的比较 被引量:4 2011年 目的探讨不同粒径、不同浓度的纳米二氧化硅(nm-SiO2)染毒人永生化表皮(HaCaT)细胞内活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)水平以及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和过氧化氢酶(catalase,CAT)活力的变化。方法将对数生长期HaCaT细胞置于含终浓度分别为0(对照)、2.5、5、10、20、40、60μg/ml的15、30、100 nm三种粒径纳米二氧化硅溶液的MEM基础培养基中培养24 h后,测定细胞增殖情况,并计算半数抑制浓度(IC50)。将对数生长期HaCaT细胞置于含终浓度分别为0(对照)、5、10、15μg/ml的15、30、100 nm三种粒径纳米二氧化硅溶液的MEM基础培养基中培养24 h。分别检测细胞内ROS的水平和SOD、CAT的活力。结果细胞存活率随着纳米二氧化硅粒径的增大而上升,随着染毒浓度的升高而下降。粒径为15、30、100 nm的纳米二氧化硅染毒HaCaT细胞的IC50分别为(19.43±1.30),(27.67±1.44),(35.91±1.59)μg/ml。与对照组相比,各粒径、各浓度纳米二氧化硅染毒HaCaT细胞内ROS水平均升高,差异有统计学意义(P<0.05);HaCaT细胞内ROS水平随着纳米二氧化硅粒径的增大而下降,随着染毒浓度的升高而上升。随着浓度的升高,粒径为15 nm的纳米二氧化硅染毒HaCaT细胞内SOD水平呈升高趋势,粒径为30 nm的纳米二氧化硅染毒HaCaT细胞内SOD水平呈先升高后下降的趋势,粒径为100 nm的纳米二氧化硅染毒HaCaT细胞内SOD水平呈波动趋势。与对照组相比,各粒径、各浓度纳米二氧化硅染毒HaCaT细胞内CAT活力均升高,差异有统计学意义(P<0.05);且随着浓度的升高,各粒径二氧化硅染毒HaCaT细胞内CAT活力均呈先上升后下降的趋势。结论不同粒径的纳米二氧化硅均具有明显的细胞毒性;在一定剂量范围内,不同粒径纳米二氧化硅染毒可以诱导细胞内ROS水平均明显增加,并明显改变相关抗氧化酶SOD和CAT的酶活力水平。 洪文旭 杨细飞 张兵 龚春梅 黄新凤 刘建军 庄志雄关键词:二氧化硅 氧化应激 抗氧化酶 纳升液相色谱-飞行时间质谱鉴定HaCaT细胞膜蛋白 2013年 [目的]探讨通过纳升液相色谱-飞行时间质谱检测人永生化表皮细胞的膜蛋白质的方法。[方法]对人永生化表皮细胞进行贴壁培养,然后对处于对数生长期细胞的膜蛋白进行提取、富集和酶解,用nano-HPLC-TOF/TOF-MS对蛋白质进行鉴定,最后用生物信息学技术对鉴定蛋白进行分析和归类。[结果]在鉴定的15个蛋白中,与细胞膜相关的蛋白有9个,占比例的60%。生物信息学分析表明,这些蛋白在分子功能上主要涉及催化,结构分子活性和结合;在生物学进程上,这些蛋白主要归类为代谢,细胞成分形成和细胞生物进程等。[结论]纳升色谱-飞行时间质谱是鉴定膜蛋白的有效方法。 曾卓颖 张航 黄爱博 夏菠 洪文旭 刘建军 郭时印关键词:膜蛋白质 飞行时间质谱 三氯乙烯对人正常肝细胞亚细胞蛋白质组影响的研究 2015年 目的研究三氯乙烯(trichloroethylene)对人正常肝细胞系(L-02细胞)亚细胞蛋白质组的影响,探讨其潜在肝毒性作用机制。方法采用0和8.0mmol/L的三氯乙烯处理细胞后,分别提取三氯乙烯处理前后L-02细胞的细胞膜和细胞核总蛋白质,通过差异荧光双向凝胶电泳(2D—DIGE)筛选出差异点,运用基质辅助激光解析飞行时间串联质谱(MALDI—TOF—MS/MS)对差异蛋白点进行质谱鉴定。采用生物信息学方法对差异蛋白进行跨膜结构域(transmembranedomain)和基因本体(geneontology,GO)功能聚类的分析,用Westernblot分析验证不同浓度三氯乙烯处理下膜蛋白ATP合成酶B亚基(ATP5B)、核蛋白核不均一核糖核蛋白H2(hnRNPH2)和上游识别序列结合蛋白1(FUBP1)在L-02细胞中表达情况。结果三氯乙烯作用于L-02细胞24h后,鉴定出差异表达膜蛋白14个和差异表达核蛋白18个,在使用0、2.0、4.0和8.0mmol/L的三氯乙烯处理细胞后,ATPSB蛋白相对表达量分别为1.00±0.03、1.21±0.14、1.25±0.12、1.48±0.17(F=8.51,P=0.007);hnRNPH2蛋白相对表达量分别为1.00±0.09、1.22±0.15、1.43±0.21、1.53±0.17(F=6.57,P=0.015);FUBP1蛋白相对表达量分别为1.00±0.11、0.91±0.07、0.73±0.04、0.67±0.03(F=15.81,P=0.001)。生物信息分析显示,差异表达蛋白参与的生物学过程中,差异蛋白主要聚集在RNA加T(差异蛋白数为10个,P=2.46×10^-6),特别是在RNA剪接上(差异蛋白数9个,P=1.77×10^-7)。结论三氯乙烯处理可以引起亚细胞蛋白质组的改变,而这些与RNA剪接相关蛋白的异常表达为进一步研究三氯乙烯的肝毒性作用机制提供了新的线索。 黄爱博 许华 洪文旭 庄志雄 刘建军关键词:三氯乙烯 核蛋白质类 膜蛋白质类 RNA剪接 三氯乙烯对L-02肝细胞中SET相互作用蛋白eEF1A1、eEF1A2和DDB1 mRNA表达水平的影响 2015年 目的:探讨人L-02肝细胞经三氯乙烯(TCE)染毒后SET相互作用蛋白e EF1A1、e EF1A2和DDB1 m RNA表达水平的变化。方法:取对数生长期的L-02肝细胞,暴露于不同浓度TCE(1.0、2.0、4.0、8.0 mmol/L)中,以DMSO为溶剂对照。24 h后,采用实时荧光定量PCR检测e EF1A1、e EF1A2和DDB1 m RNA表达水平。结果:与对照组相比,不同浓度的TCE均能够使L-02肝细胞e EF1A1、e EF1A2和DDB1 m RNA表达水平发生明显变化。其中,DDB1和e EF1A2 m RNA表达水平在低浓度(1.0 mmol/L)TCE暴露下显著升高,而随着TCE浓度的升高其m RNA表达水平显著降低(P<0.05或P<0.01)。e EF1A1 m RNA表达水平随着TCE浓度的增加而升高(P<0.05)。结论:TCE染毒可诱发L-02肝细胞中SET相互作用蛋白的m RNA表达水平发生改变。 黄爱博 洪文旭 叶金波 刘建军 许华关键词:三氯乙烯 细胞毒性 姜黄素对纳米二氧化硅诱导HaCaT细胞氧化应激损伤保护作用研究 被引量:2 2013年 目的研究姜黄素对纳米二氧化硅(nm-SiO2)诱导人永生化表皮(HaCaT)细胞氧化损伤相关指标的改变及保护作用。方法通过CCK-8法检测HaCaT细胞在15 nm SiO2和姜黄素作用下的细胞活力水平,测定在姜黄素干预下HaCaT细胞内活性氧簇(ROS)水平和超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)的酶活力水平。结果姜黄素的干预能明显改善15 nm SiO2处理引起的HaCaT细胞的氧化损伤。与SiO2组相比,姜黄素干预组能有效提高细胞存活率、降低细胞内ROS的积累;另外,姜黄素干预可以降低两个氧化应激相关的酶SOD和CAT的酶活力水平。结论姜黄素干预对由于nm-SiO2引起的HaCaT细胞的氧化应激损伤具有一定的保护作用。 洪文旭 陈晓丹 彭圣明 张航 杨细飞 刘建军关键词:纳米二氧化硅 姜黄素 氧化应激 HACAT细胞 SET基因缺陷对三氯乙烯诱导人正常肝细胞DNA甲基化水平改变的影响 被引量:2 2015年 目的比较三氯乙烯(trichloroethylene)诱导人正常肝细胞(L-02细胞)和SET基因缺陷L-02细胞(SET缺陷细胞)中DNA甲基化相关指标的变化,探讨SET与三氯乙烯诱导的表观遗传调控作用之间的关系。方法选用前期建立的SET缺陷细胞为研究对象,使用三氯乙烯分别对L一02细胞和SET缺陷细胞进行处理,检测细胞增殖水平、细胞DNA甲基化水平和DNA甲基转移酶(DNAmethvltrans伯rases,DNMTs)活性的变化,通过Westernblot法从蛋白水平分析DNMTs(DNMT1、DNMT3a、DNMT3b)的表达变化。结果三氯乙烯处理L-02细胞和SET缺陷细胞24h后,两种细胞的增殖水平均呈现下降趋势。使用0、1.0、2.0、4.0和8.0mmol/L的三氯乙烯处理细胞后,L-02细胞的相对增殖水平分别为100.00±2.70、83.34±2.38、75.56±4.51、71.67±2.77、66.67±1.63(F=58.29,P〈0.001);SET缺陷细胞的相对增殖水平分别为101.12±1.67、85.01±2.33、79.44±1.67、78.337±3.89、76.11±3.33(F=42.41,P〈0.001)。0、1.0、2.0、4.0和8.0mmol/L的三氯乙烯处理L-02细胞和SET缺陷细胞24h后,L-02细胞的DNA甲基化水平分别为3.77±0.08、3.48±0.08、3.38±0.10、3.14±0.15、2.91±0.07,呈下降趋势(F=212.87,P〈0.001);SET缺陷细胞DNA甲基化水平分别为3.77±0.15、3.57±0.15、3.30±0.11、3.35±0.13呈下降趋势(F=79.32,P〈0.001)。L-02细胞经0、1.0、2、0、4.0、8.0mmol/L的三氯乙烯处理24h后,DNMTI蛋白的相对表达量分别为1.00±0.03、1.28±0.04、1.20±0.04、1.62±0.05、1.43±0.04,表达升高(F=103.00,P〈0.001);而在SET缺陷细胞中DNMT1的相对表达量分别为1.00±0.04、0.96±0.02、1.19±0.05、0.85±0.03、0.83±0.03,出现下降(F=44.18,P〈0.001)。结论SET缺陷可以明显抑制三氯乙烯暴露引起的L-02� 洪文旭 黄爱博 许华 张航 王宏菊 赵琼晖 叶金波 刘建军关键词:人正常肝细胞 DNA甲基转移酶 纳米二氧化硅致人永生化表皮细胞膜蛋白质组的影响 2015年 目的采用蛋白质组学技术探讨15 nm二氧化硅致体外培养的人永生化表皮细胞(HaCaT)膜蛋白质表达的变化。方法分别以2.5、5.0和10.0 mg/L的15nm二氧化硅溶液处理HaCaT细胞24 h,以dd H2O为溶剂对照。应用CCK-8方法检测细胞增殖情况。运用亚细胞蛋白质组提取试剂盒对10.0 mg/L的15 nm二氧化硅溶液处理24 h的HaCaT细胞和正常对照组细胞进行膜蛋白提取,采用差异荧光双向凝胶电泳(2D-DIGE)分析和基质辅助激光解析飞行时间(MALDI-TOF/TOF)质谱鉴定。对差异蛋白质进行GO(gene oncology)功能聚类及跨膜结构域预测分析,采用Western blot免疫印迹验证差异蛋白的表达。结果细胞增殖实验显示,15 nm二氧化硅可以引起HaCaT细胞整体增殖水平下降,呈剂量依赖关系;与正常细胞相比,HaCaT细胞经15 nm二氧化硅以2.5、5.0和10.0 mg/L处理24 h后,活力水平分别为(91.3%±6.1%)、(81.7%±7.0%)和(74.0%±2.6%),差异有统计学意义(P<0.05)。质谱鉴定了10个差异表达蛋白,其中7个差异蛋白具有1个以上的跨膜结构域,GO功能聚类表明这些差异蛋白主要涉及结合活性和结构分子活性。Western blot免疫印迹结果表明G蛋白偶联受体179和L-肌动蛋白表达变化趋势与蛋白质组学分析结果一致。结论 15 nm二氧化硅能够引起HaCaT细胞增殖水平降低,并且导致膜蛋白表达水平的下降。 黄爱博 洪文旭 庄志雄 刘建军 许华关键词:纳米二氧化硅 膜蛋白质 蛋白质组