广东省自然科学基金(022124)
- 作品数：7 被引量：45H指数：4
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- 石墨炉原子吸收光谱法测定血清中非蛋白结合铜和锌被引量：4
- 2009年
- 建立两步沉淀蛋白质-石墨炉原子吸收法测定血清中非蛋白结合铜和锌的方法。无水乙醇以2∶1与血清混合后,再经70℃温度变性处理,可将蛋白质完全沉降。用氘灯校正背景,石墨炉原子吸收法进行测定,方法检测限:Cu,1.2μg.L-1,Zn,0.098μg.L-1。回收率:Cu,92.3%～104%,Zn,为90%～107%。利用此方法测定了肿瘤患者血清中游离铜与锌,并与健康人作了对比。
- 张源林哲绚李伟秋张俏忻李慧罗红军罗文鸿
- 关键词：铜锌GFAAS
- 利用酪氨酸残基的共振瑞利散射研究溶液中蛋白质构象被引量：7
- 2006年
- 基于酪氨酸残基K带激发峰在较高浓度的蛋白质溶液中表现出特征散射峰,通过Δλ=0同步荧光扫描识别,建立用荧光分光光度法测定酪氨残基K带的共振散射峰强度及其波长位移来推测溶液中蛋白质构象变化的新方法。方法不受蛋白质色氨酸残基的干扰,图谱简单明了直观。文章叙述了方法建立的实验基础,并用构建的方法研究了盐效应、酸碱性效应对蛋白质构象变化的影响,最后通过测定不同温度下酶活性的实验验证了方法对温度影响酶蛋白质构象变化的分析的正确性。
- 张源林哲绚李慧罗文鸿
- 关键词：蛋白质构象共振瑞利散射
- GFAAS测定乙醇-EDTA法分离血清中不同形态的铜和锌被引量：2
- 2010年
- 血清中元素不同形态含量变化与人体营养和健康有着密切关系。文章利用两步沉淀蛋白质-石墨炉原子吸收法测定了血清中非蛋白结合的铜和锌。无水乙醇以2∶1与血清混合后,再经70℃温度变性处理,通过贝克曼离心机高速离心,可将蛋白质完全沉降。在血清中加入EDTA可将白蛋白结合的铜和锌脱落,转化为非蛋白结合铜和锌,从而可测得球蛋白和白蛋白分别结合的铜和锌含量。用氘灯校正背景,石墨炉原子吸收法进行测定,方法检测限：Cu,1.2μg.L-1 Zn,0.098μg.L-1。回收率：Cu,92.3%~104%,Zn,90%~107%。利用此方法测定了健康人及肿瘤患者血清和肝豆状核性患者中球蛋白、白蛋白及结合的铜与锌以及游离的铜和锌,并与健康人作了对比。
- 张源林哲绚李慧彭琳罗红军李伟秋罗文鸿
- 关键词：蛋白质铜锌GFAAS
- 阿魏酸等五种酚类物质对DNA氧化损伤的影响被引量：15
- 2006年
- 背景与目的用单细胞凝胶电泳法研究阿魏酸、咖啡酸、香草酸、阿司匹林(乙酰水杨酸)和水杨酸五种酚类物质对DNA损伤的影响。材料与方法取正常人外周血淋巴细胞与不同浓度(0、50、100、500μmol/L)阿魏酸、咖啡酸、香草酸、阿司匹林、水杨酸五种酚类化合物于37℃下共同孵育30min后用或不用H2O2于4℃下处理10min,采用单细胞凝胶电泳法对DNA损伤进行分析、比较。结果分别用五种酚类化合物对淋巴细胞进行预处理后,经过H2O2处理,与阳性对照组相比,彗星尾距都有不同程度的缩短,其中阿魏酸、香草酸的作用最明显,并随着剂量的增加,尾距有减小的趋势(各浓度组之间没有显著差异),而咖啡酸、阿司匹林、水杨酸在浓度为500μmol/L时,尾距较低浓度组(50、100μmol/L)有所增加,以咖啡酸最为显著。用500μmol/L咖啡酸、阿司匹林、水杨酸与细胞共同孵育30min后(未经H2O2处理),咖啡酸可以导致DNA的明显断裂损伤,与对照组之间的差异有统计学意义,而阿司匹林、水杨酸与对照组相比,其彗星尾距没有显著变化。结论上述五种酚类物质均表现出了一定的保护DNA抗氧化活性,其中以咖啡酸保护DNA的作用最弱,而且咖啡酸单独与细胞作用时,可以产生DNA断裂损伤;阿司匹林和水杨酸在高浓度组其尾距较低浓度组又有所缩短,阿魏酸和香草酸抗氧化效果较好。
- 张俏忻罗文鸿李慧林哲绚
- 关键词：阿魏酸咖啡酸乙酰水杨酸香草酸单细胞凝胶电泳
- 彗星电泳法检测H_2O_2对人淋巴细胞DNA损伤及其激光扫描共聚焦显微境下的观察和三维重建被引量：6
- 2003年
- 目的 :应用彗星电泳法于荧光显微镜和激光扫描共聚焦显微镜下观察人淋巴细胞经H2O2 作用后的DNA损伤情况。 方法 :人淋巴细胞经不同浓度H2O2(0、10、20、40、80μmol/L)作用20min,或20μmol/LH2O2 作用不同时间(0、10、20、30min)后 ,采用彗星电泳法 ,荧光显微镜下观察、照相 ,对尾长、总彗星长度、尾距进行测量和分析。同时采用激光共聚焦显微镜(LSCM)进行观察和三维重建 ;比较了不同染料(PI、AO、EB、Hochest33258)的染色效果。 结果 :H2O2 作用浓度为0、10、20、40、80μmol/L时 ,尾距( x- ±s)分别为0.001±0.002、0.31±0.35、1.23±0.96、2.82±1.38、3.52±0.96(P<0.01) ;作用时间为0、10、20、30min时 ,尾距( x- ±s)分别为0.05±0.09、0.22±0.30、1.62±0.93、1.89±1.09(P<0.01)。尾长、总彗星长度也有显著性增加 ,经统计学检验 ,P<0.01。与荧光显微镜相比 ,LSCM下的"彗星"轮廓十分清晰 ;PI和EB染色效果较好。 结论 :H2O2 能剂量依赖性和时间依赖性地导致人外周血淋巴细胞DNA的明显断裂损伤。利用LSCM构建"彗星"的三维图像将更有利于DNA损伤的准确测量。鉴于染色效果的差异 。
- 张俏忻罗文鸿李慧林哲绚
- 关键词：彗星电泳淋巴细胞DNA损伤激光扫描共聚焦显微镜
- 三种马兜铃酸类化合物对HK-2细胞的毒性比较被引量：8
- 2006年
- 背景与目的研究Aristolochic acid I(AAI)、Aristolochic acid II(AAII)和Aristolochic acid Ia(AAIa)3种马兜铃酸类化合物在体外对肾小管上皮细胞株(HK-2)的毒性作用的差异。材料与方法倒置显微镜下观察药物作用后细胞形态学改变;设计药物作用组、阴性对照组和空白调零组,采用四甲基偶氮唑蓝[3-(4,5-di methylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazoliumbromide,MTT]法检测药物作用下细胞活力抑制率;免疫组化SABC法观察α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的表达;流式细胞术分析细胞周期及细胞凋亡。结果形态学观察表明,在30μg/ml剂量浓度下作用24h,AAI、AAIa药物作用组的细胞收缩变圆、脱壁;免疫组化结果表明,20μg/ml的剂量浓度下作用72h,3种化合物分别作用下的细胞均出现α-SMA的表达;MTT结果显示3种药物和细胞生长抑制率之间存在着浓度和时间依赖性关系,根据半数抑制浓度IC50值,抑制作用AAI>AAIa>AAII;3种药物都能影响细胞周期甚至诱导细胞发生不同程度的凋亡。结论3种药物对HK-2的毒性作用存在差异,其引起毒性效应的作用机制也可能有所不同。
- 郭永超林哲绚李慧罗文鸿
- 关键词：马兜铃酸细胞毒性
- 脂多糖诱导急性肺损伤过程中SSAO酶的活性变化被引量：3
- 2007年
- 背景与目的:探讨SSAO酶在脂多糖诱导急性肺损伤过程中的活性变化。材料与方法:将15只雄性成年新西兰兔随机分为模型A组、模型B组和对照组,每组5只。模型组通过气管插管直接给予脂多糖2mg/kg,其中A组在给药后48h与对照组均用于制作肺组织HE切片;B组用于动物体征观察、外周血白细胞计数和SSAO酶活性检测,并对给药前、后各指标的变化进行比较。结果:模型组给药后外周血白细胞数目和肺组织HE染色等炎症指标与对照相比均有明显变化,SSAO酶活性在给药后的16h酶活性迅速上升至最高,然后在48h逐渐下降至最低点,其升高或降低幅度,较给药前均有统计意义(P<0.05或P<0.01)。结论:采用气管直接插管法给予脂多糖的造模方法稳定可靠,在产生急性肺损伤过程中会导致外周血SSAO酶活性明显的规律性波动。
- 张美李慧罗红军罗文鸿
- 关键词：脂多糖肺炎模型
