湖南省卫生厅科研基金(B2007086)
- 作品数：5 被引量：46H指数：2
- 相关作者：周建大王少华李文波陈勇谭建湘更多>>
- 相关机构：中南大学湘雅三医院湖南省计划生育研究所中南大学更多>>
- 发文基金：湖南省自然科学基金湖南省卫生厅科研基金中央高校基本科研业务费专项资金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 负压引流与创面修复被引量：43
- 2009年
- 探讨负压引流(VSD)促进创面修复的可能机制,寻找促进创面修复的最佳负压引流条件。本文回顾性分析了众多学者的研究成果,总结VSD技术促进创面修复的最佳条件。
- 周建大刘进言胡媛谭建湘李文波王少华
- 关键词：引流术
- 成人成肌细胞的分离与体外培养
- 2009年
- 目的建立一种优化的体外成人成肌细胞分离与原代培养方法。方法首先用两步消化法对取自成人骨骼肌组织进行消化获取相对较纯的成肌细胞，通过差速贴壁法进行进一步的纯化，并对获取的成肌细胞进行细胞形态学观察、免疫组织化学、透射电镜鉴定及生长曲线的绘制与分析。结果该方法可获取高纯度的成肌细胞，且在体外可快速稳定增殖。结论该方法所获取的成肌细胞可为Duchenne肌营养不良的治疗、血友病、血栓闭塞性脉管炎（伯格氏病）、心肌梗死和慢性心衰的基因治疗的研究提供一种充足、可靠的实验靶细胞。
- 陈勇周建大李文邹永华殷照初陈继业李明
- 关键词：细胞分离细胞培养技术
- 以叶酸偶联纳米Fe_3O_4颗粒的合成和标记肿瘤实验研究被引量：4
- 2014年
- 目的:研究叶酸偶联的超顺磁Fe3O4纳米颗粒对活体肝癌标记效果和MRI成像功能。方法:以铁盐、十二烷基苯磺酸和3-氨基丙基3-乙氧基硅烷为原料,通过共沉淀法合成了APTES修饰的超顺磁Fe3O4纳米颗粒,通过酰胺化法合成了叶酸偶联的超顺磁Fe3O4纳米颗粒,以X射线衍射仪、透射电镜、红外光谱仪、振动样品磁强计、动态光散射仪对合成材料进行表征,采用SRB法对叶酸偶联的超顺磁Fe3O4纳米颗粒细胞进行安全性检测,同时建立活体瘤鼠动物模型,对其在叶酸偶联的超顺磁Fe3O4纳米颗粒标记前后进行MRI成像对比检测,每个肿瘤组织块各取2套切片,分别行苏木素-伊红染色和普鲁士蓝染色,观察肿瘤组织光镜下形态及组织内含Fe情况。结果:所制备的叶酸偶联的Fe3O4纳米颗粒为立方相的Fe3O4,粒径约8 nm左右,水合直径25.7nm,呈近似球形,表面分布有羧基等功能基团,呈超顺磁特性,饱和磁化强度为51 emu/g Fe。叶酸偶联的超顺磁Fe3O4纳米颗粒对人皮肤成纤维细胞(HSF)的生长与生理盐水对照组的影响一样,无明显抑制细胞生长的表现。同时,磁共振成像和染色结果均显示肿瘤的存在。结论:叶酸偶联的超顺磁Fe3O4纳米颗粒,不仅细胞毒性小,而且因其表面的叶酸与叶酸受体之间的高强结合力。同时,它能通过这种结合作用被高效介导进入肿瘤细胞内,增强MRI成像中肿瘤组织与周围正常组织的对比度,有利于肿瘤细胞的标记、示踪和靶向检测,是一种很有应用前景的肿瘤细胞靶向检测物质。
- 胡丰唐宁宁刘灿唐园园王少华尹朝奇周春姣周建大曾蔚
- 关键词：FE3O4叶酸肿瘤细胞细胞标记
- 人表皮生长因子基因转染原代角质形成细胞被引量：1
- 2009年
- 目的：将带信号肽的人表皮生长网子基因转染原代成人角质肜成细胞，证实细胞活性及hEGF的有效表达，为后期的皮肤修复研究打下基础。方法：先酶切验证pcDNA3．1－hEGF，后消化成人皮肤组织，以Defined Keratinocyte—SFM（DKSFM）传代培养角质形成细胞并鉴定，脂质体转染质粒pcDNA3．1－hEGF人细胞，转基因细胞培养48h再作RT－PCR和Western—blot分析，上清分别进行放射免疫测定和MTT测定。结果：质粒peDNA3．1－hEGF上的hEGF序列经测序证实，双酶切后获得约230bp和5．4kb条带；成人角质形成细胞体外培养可快速稳定增殖，转hEGF基因细胞经RT—PCR扩增出一条约230bp的特异性条带。Westem—blot检测到hEGF表达明显升高；放射免疫法和MTT实验证实转基因细胞有稳定的hEGF蛋白分泌。结论：质粒pcDNA3．1－hEGF在脂质体介导下成功转染成人皮肤角质形成细胞，转基因细胞能分泌有生物活性的EGF；体外培养的成人皮肤角质形成细胞可见少量EGF分泌．
- 周建大王少华罗成群谢慧清刘进言胡媛谭建湘李文波陈勇
- 关键词：皮肤表皮生长因子基因角质形成细胞质粒
- 人VEGF165基因转染成人成肌细胞的实验研究
- 2010年
- 目的:将人血管内皮生长因子165(hVEGF165)导入原代离体成肌细胞,观察该细胞hVEGF分泌情况,探讨成人自体转基因成肌细胞移植的可行性。方法:采用两步消化法对成人骨骼肌组织消化获取相对较纯的成肌细胞,通过差速贴壁法进行进一步的纯化。以脂质体转染法将pcDNA3.1-hVEGF165导入成肌细胞,通过RT-PCR、ELISA和Western-blot进行hVEGF165定量检测,MTT测定和Mile's实验检测VEGF165的生物学活性。结果:转基因细胞经RT-PCR扩增出一条VEGF的特异性泳带,ELISA显示转基因细胞培养上清VEGF浓度分别达到18.92±1.77 ng/mL、19.04±2.15 ng/mL,Western blot检测转基因成肌细胞上清均检测到VEGF蛋白特异性的杂交带,MTT显示转基因细胞上清明显促内皮细胞增殖,Mile's实验显示转基因细胞上清明显增加毛细血管通透性。结论:质粒pcDNA3.1-hVEGF165能成功转入成人成肌细胞,转基因细胞能分泌有生物活性的VEGF165蛋白。
- 陈勇周建大邹永华殷照初李文波李明陈孜孜李万猛
- 关键词：骨骼肌成肌细胞血管内皮生长因子基因表达
