陕西省教育厅科研计划项目(05JK296)
- 作品数：3 被引量：17H指数：3
- 相关作者：刘建玲张彦明苏正元许信刚李谱华更多>>
- 相关机构：西北农林科技大学西北大学更多>>
- 发文基金：陕西省教育厅科研计划项目陕西省科技攻关计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 猪瘟病毒Shimen株E2基因的克隆及其逆转录病毒表达载体的构建被引量：4
- 2006年
- 根据已发表的猪瘟病毒(classicalswinefevervirus,CSFV)Shimen株的全基因组序列,设计2对引物P1/P2和B1/B2,在B1和B2的5′端分别加上EcoR和BamH位点,以CSFV-Shimen株脾毒为材料,一步法提取总RNA,并以此为模板采用反转录PCR(RT-PCR)和套式PCR(nPCR),成功地扩增出约1.2kb的E2基因。将PCR产物回收后与pMD18-T载体连接并转化,经PCR和酶切鉴定获得重组质粒E2-T。将E2-T经EcoR和BamH酶切消化、回收目的基因后,与经BamH/EcoR酶切的逆转录病毒载体pBABE-puro连接并转化,经酶切鉴定获得重组质粒pBABE-puro-E2。序列测定表明,目的基因的插入位置、方向和读码框完全正确。
- 刘建玲苏正元许信刚李谱华张彦明
- 关键词：猪瘟病毒E2基因
- 逆转录病毒载体介导的猪瘟病毒E2基因的真核表达被引量：10
- 2006年
- 利用DNA重组技术将猪瘟病毒(Classicalswinefevervirus,CSFV)石门株囊膜蛋白E2基因插入逆转录病毒载体pBABE-puro中构建成重组逆转录病毒载体pBABE-puro-E2,该重组逆转录病毒载体与pVSVg质粒经磷酸钙共转染法将其转入293GP细胞中包装逆转录病毒假病毒。用包装的假病毒感染PK-15细胞,经嘌呤霉素筛选阳性细胞后进行流式细胞技术(FACS)分析,结果表明CSFVE2基因在PK-15细胞膜上成功表达。将表达E2蛋白的PK-15细胞腹腔免疫Balb/c小鼠,成功诱导小鼠产生了抗E2蛋白的抗体。
- 刘建玲张彦明苏正元许信刚
- 关键词：猪瘟病毒逆转录病毒载体FACS
- 应用端粒酶逆转录酶基因使猪血管内皮细胞永生化的初步研究被引量：4
- 2007年
- 为寻求使猪主动脉血管内皮细胞增殖寿命延长的方法,本试验将含有人类端粒酶催化亚基端粒酶逆转录酶(Human telomerase reverse transcriptase,hTERT)基因的真核表达质粒pCI-neo-hTERT通过脂质体介导法导入猪主动脉血管内皮细胞(Porcine arterial endothelial cell,PAEC)。对转染后的血管内皮细胞进行Ⅷ因子和CD34鉴定,利用PCR-ELISA方法检测hTERT导入后细胞端粒酶活性的表达情况,探讨了转染后细胞的生长特性。结果显示,转染后的细胞Ⅷ因子和CD34均呈阳性,证明转染后细胞仍表达血管内皮细胞的特异性蛋白;导入hTERT后,细胞有较高的端粒酶活性,增殖寿命较对照细胞延长了20代。表明hTERT导入细胞能重建细胞端粒酶活性,从而延长细胞在体外培养的寿命。
- 苏正元张彦明洪海霞刘建玲
- 关键词：猪血管内皮细胞人端粒酶逆转录酶脂质体转染
