国家重点基础研究发展计划(2002CB513106)
- 作品数：7 被引量：33H指数：4
- 相关作者：冉宇靓杨治华胡海遇珑娄晋宁更多>>
- 相关机构：中国医学科学院北京协和医学院中日友好医院清华大学更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 整合素的构象变化与亲和力调控被引量：4
- 2005年
- 整合素(integrin)是由α、β两个亚单位通过非共价键连接而组成的异源二聚体。每种α、β亚单位都是含有多种结构域的大分子量Ⅰ型穿膜糖蛋白。它在细胞与细胞间、细胞与基质间相互作用的过程中发挥着十分关键的作用。整合素多种结构域的空间排列决定了其构象特征,而整合素的不同构象状态与其亲和力呈高度相关。对αVβ3整合素晶体结构的解析使我们对整合素的结构与功能有了更进一步的理解。
- 李发慧王兆卿孙启鸿陈毓荃
- 关键词：整合素构象变化
- 人源化肿瘤血管移植瘤模型的建立及应用被引量：2
- 2006年
- 背景与目的:目前在肿瘤内皮细胞基因功能和靶向血管治疗肿瘤的研究中仍缺乏适宜的动物模型。本研究拟建立一种新的小鼠人源化肿瘤血管移植瘤模型。方法:将人肝窦微血管内皮细胞系(humanliversinusoidendothelialcells,HLSEC)分别与人肝癌细胞系BEL7402、人结肠癌细胞系LS174T、人食管癌细胞系NEC按不同比例混合共接种NOD/SCID小鼠或BALB/c裸小鼠,以单独接种肿瘤细胞的小鼠作为对照组,观察小鼠人移植瘤生长的情况。采用绿色荧光蛋白基因(greenfluorescentprotein,GFP)转染HLSEC,结合荧光显微镜检方法观察HLSEC在共接种移植瘤中的存活及血管形成的情况。免疫组化法检测肿瘤内微血管密度(microvesseldensity,MVD)。用抗人肝癌内皮细胞单抗2B6处理人肝癌移植瘤共接种模型,观察2B6对肿瘤生长的影响。结果:HLSEC与BEL7402细胞共接种NOD/SCID小鼠时,共接种组肿瘤生长速度显著加快,平均瘤重可达肿瘤单独接种组的5.1倍。在GFP表达阳性的HLSEC与BEL7402共接种的移植瘤冰冻切片中可见HLSEC的存在,并已形成瘤内新生血管。免疫组化检测发现共接种组移植瘤中的总MVD较肿瘤细胞单独接种组增加85.7%,采用抗人vWF多抗检测结果显示共接种组人源微血管平均MVD可达10.28～29.28,约占总血管数量的41%～65%。进一步将HLSEC分别与NEC、BEL7402及LS174T细胞共接种于BALB/c裸小鼠时,共接种组的瘤重是单独接种组的3.3～6.0倍。2B6单抗能使共接种人肝癌移植瘤中人源肿瘤血管密度减少65.1%,抑制肿瘤瘤重达71.8%。结论:HLSEC与人肿瘤细胞共接种小鼠后,能在移植瘤中存活、增殖,形成大量人源化的肿瘤新生血管,并在促进肿瘤快速生长中起重要作用。该小鼠人源化肿瘤血管移植瘤模型可为肿瘤内皮细胞相关基因及靶向治疗剂的研究提供一个新的有价值的工具。
- 冉宇靓钟星胡海遇珑娄晋宁杨治华
- 关键词：微血管内皮细胞移植瘤模型微血管密度小鼠
- 细胞粘附分子在肿瘤转移中的作用被引量：9
- 2006年
- 牛纪晓叶丽亚娄晋宁
- 关键词：细胞粘附分子肿瘤转移MOLECULE免疫球蛋白超家族病理生理过程CD44分子
- 抑制食管癌与肺血管内皮黏附的功能性抗体的制备被引量：6
- 2006年
- 目的制备抑制食管癌细胞与肺血管内皮黏附的功能性单克隆抗体,为研究食管癌转移的靶向治疗剂打下基础。方法以人食管癌新鲜组织分离的肿瘤细胞免疫BALB/c小鼠,将免疫小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合后,采用活细胞荧光、ELISA、免疫组化、肿瘤细胞-内皮细胞黏附实验、Weasternbloting等方法筛选并鉴定抑制肿瘤细胞黏附的功能性单克隆抗体。结果共融合获得了1134株杂交瘤克隆,在能与食管癌细胞膜反应的486株克隆中,有294株与正常食管上皮不反应或低反应;筛选到15株单抗显著地抑制食管癌细胞与人正常肺血管内皮黏附,其中2株单抗识别的黏附分子相对分子质量分别为30000和60000。结论成功获得了多株具有抑制食管癌细胞与肺血管内皮黏附的功能性抗体,其中2株单抗具有治疗食管癌转移的潜在应用价值。
- 遇珑潘健周转冉宇靓胡海娄晋宁杨治华
- 关键词：食管癌肺血管内皮细胞功能性单克隆抗体
- 采用抗体库技术筛选抑制肺癌的功能性抗体被引量：4
- 2007年
- 目的研制抑制肺癌细胞功能性单抗,为治疗肺癌提供靶向治疗剂,并为分离获得肺癌相关的分子靶标打下基础。方法从新鲜人肺癌组织分离肿瘤细胞免疫Balb/c小鼠,免疫小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合后接种于甲基纤维素,制备大容量功能性抗体库。采用活细胞荧光、ELISA、免疫组化、肿瘤增殖、侵袭、黏附、动物体内治疗实验等方法筛选鉴定抑制肿瘤细胞的功能性单抗。结果本次融合共获得了1573株杂交瘤克隆,在能与肺癌细胞膜反应的314株克隆中,154株与正常肺组织不反应或低反应。功能性筛选发现41株单抗显著地抑制肺癌细胞增殖,24株能抑制肺癌细胞对Matrigel的侵袭,15株能抑制肺癌细胞与CollagenI的黏附,进一步实验验证了2株单抗能在体内抑制肺癌移植瘤的生长。结论采用大容量功能性抗体库技术成功获得了多株具有抑制肺癌细胞恶性生物学行为的功能性单抗,其中2株可能具有靶向治疗肺癌的应用潜力。
- 胡海冉宇靓陈立钊遇珑孙立新杨治华
- 关键词：肺癌抗体库靶向治疗
- 肺癌抑制性抗体及其抗原的鉴定被引量：9
- 2007年
- 目的:鉴定抑制肺癌细胞生长的功能性单克隆抗体1E2及其抗原,为治疗肺癌提供有潜力的靶向抗体治疗剂和分子靶位。方法:采用活细胞荧光、MTT细胞增殖实验、ELISA、动物体内治疗实验等方法检测鼠单克隆抗体1E2对人肺癌细胞增殖的抑制、单抗与癌细胞的结合部位、单抗的亚类和单抗对肺癌移植瘤的抑制,以Western blotting和MALDI TOF质谱方法鉴定该功能性单抗的抗原。结果:单抗1E2能够与肺癌细胞GLC82和NCI-H520的细胞膜结合,在体外能够明显抑制肺癌细胞的增殖。动物实验表明单抗1E2能够抑制肺癌移植瘤的生长,抑制率达49%。Western blotting显示其抗原相对分子质量约110000,质谱鉴定该抗原为氨甲酰磷酸合成酶(carbamoyl-phosphate synthetase1,CPS1)。结论:单抗1E2能够在体内外抑制肺癌的生长,具有成为肺癌靶向治疗剂的潜力。该抗体识别的抗原CPS1可表达于肺癌细胞的细胞膜,可能是一个肺癌靶向治疗的新靶位。
- 冉宇靓胡海陈立钊遇珑孙立新杨治华
- 关键词：肺癌功能性单克隆抗体抗原靶位靶向治疗
- 靶向肿瘤血管内皮细胞抑制人肝癌移植瘤生长的功能性抗体的研制被引量：6
- 2007年
- 背景与目的:肿瘤的生长依赖于新生血管形成,阻断其血管形成可有效治疗肿瘤。本研究旨在研制抗人肝癌血管内皮细胞的功能性单克隆抗体,确定其抑制人肝癌移植瘤生长的作用。方法:用从新鲜人肝癌组织中分离、鉴定、培养的人肝癌血管内皮细胞免疫10只BALB/c小鼠。免疫小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合后采用甲基纤维素选择培养。使用活细胞免疫荧光、细胞增殖、内皮成管实验及“人源化血管”动物模型体内抑瘤实验筛选和鉴定有治疗潜力的功能性抗体。结果:细胞融合产生1442个单个集落的杂交瘤株,获得119株阳性克隆,其中53株是具有抑制人肝癌血管内皮细胞增殖、成管的功能性抗体,2株被证实能抑制人肝癌移植瘤在BALB/c裸鼠体内的生长,抑瘤率为66.7%～76.5%。结论:建立了高通量制备、筛选、鉴定内皮细胞功能性单抗技术,获得了2株具有靶向血管内皮细胞抑制人肝癌移植瘤生长的功能性单抗。
- 胡海冉宇靓遇珑周转娄晋宁杨治华
- 关键词：功能性抗体抗血管治疗
