国家自然科学基金(30271471)
- 作品数：11 被引量：17H指数：2
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- 人肝癌细胞感染蓝舌病毒HbC_3株超微结构的动态观察
- 2006年
- 目的 探讨蓝舌病毒靶向抗肿瘤的细胞生物学机制。方法 利用透射电镜观察蓝舌病毒HbC3株感染人肝癌细胞Hety-3B的形态发生学以及该病毒引起的细胞的病理改变。结果 BTV-HbC3以受体介导的胞饮作用穿入细胞，溶酶体水解病毒外衣壳，使之成为亚病毒粒子，胞浆内有病毒包涵体及未装配成熟的亚病毒颗粒。随后亚病毒颗粒装配上外层蛋白结构，形成成熟的病毒粒子。病毒感染细胞12～18h时，细胞以挤出的方式释放病毒并达到高峰。18-48h时，病毒进入超感染期，大量细胞发生病变，出现细胞凋亡和溶解。结论 一旦蓝舌病毒感染Hep-3B肿瘤细胞即可在细胞内增殖并诱导该肿瘤细胞进入凋亡，死亡的肿瘤细胞释放出的病毒粒子并再次感染其他肿瘤细胞，直至将全部肿瘤细胞杀灭，其溶瘤方式为链式反应。
- 汪艳雷森林郭淑芳易有荣董长垣
- 蓝舌病毒HbC_3株对小鼠乳腺癌MA-782细胞的感染特性被引量：2
- 2006年
- 体外研究蓝舌病毒湖北株3(BTV-HbC3)对鼠乳腺癌细胞MA782的感染性并探讨BTV-HbC3靶向性溶癌的机制。观察MA782细胞感染BTV-HbC3的病变效应(CPE);MTT法研究病毒致细胞病变率的特征;透射电镜观察感染病毒后细胞超微结构的变化;免疫组化研究病毒蛋白在细胞内的表达特点;凋亡染色(TUNEL法)观察病毒诱导细胞凋亡的情况;流式细胞仪测定病毒对MA782细胞周期的影响。结果证明BTV-HbC3感染MA782细胞后有明显的细胞病变效应;病毒蛋白主要表达在细胞的胞膜及胞浆内;凋亡染色发现大量的凋亡细胞;流式细胞仪可见明显的亚二倍体峰。故认为BTV-HbC3在体外能有效的感染MA782细胞,并能诱导MA782细胞凋亡。
- 梁科董长垣胡俊张蔚英陈杰
- 关键词：凋亡
- 蓝舌病毒湖北株致人肝癌Hep-3B细胞和人肺腺癌A549细胞死亡机制的研究
- 2007年
- 目的探讨蓝舌病毒湖北株(BTV-HbC3)致人肝癌Hep-3B和人肺腺癌A549细胞死亡的方式及其作用机制。方法观察细胞感染BTV-HbC3的病变效应;原位末端标记(TUNEL)法检测细胞感染BTV-HbC3是否出现凋亡;激光打描共聚焦显微镜检测荧光标记的细胞核及内质网变化;萤光照度仪检测病毒诱导细胞caspase-3/7、caspase-8和caspase-9的活性变化。结果BTV-HbC3感染Hep-3B细胞后有明显的病变效应,大量细胞凋亡,细胞核染色质边聚,内质网大量空泡形成,caspase- 3/7活性升高,caspase-8和caspase-9未升高;BTV-HbC3感染A549细胞后有明显病变效应,仅见零星凋亡细胞,内质网有空泡形成,细胞核未见染色质边聚,caspase-3/7和caspase-9活性升高,caspase-8未升高。结论BTV-HbC3主要通过细胞内内质网途径诱导Hep-3B细胞凋亡而发挥其抑瘤作用,而对人肺腺癌的抑瘤作用则是通过诱导A549细胞的非凋亡性程序性死亡来实现的。
- 陈杰胡俊董长垣梁科戴莹高靖
- 关键词：蓝舌病毒凋亡A549细胞
- 异源蓝舌病毒dsRNA与PolyI：C诱导人源体细胞产生IFN-β的比较研究
- 2008年
- 目的探讨异源动物蓝舌病毒dsRNA诱导人源细胞产生干扰素（IFN）的能力。方法借助体外培养系统，利用ELISA技术检测IFN诱导剂多聚次黄苷酸-胞苷酸（PolyI：C）、蓝舌病毒（BTV）及BTV dsRNA3种不同处理因素作用后，培养细胞上清液中IFN-β的含量，以比较研究其诱导人肺癌细胞A549和人胚肺细胞HEL产生IFN-β的能力和特征。结果这3种因子均能诱导人肺癌A549细胞和人正常肺细胞HEL产生IFN-β，BTVdsRNA诱导IFN-β产生的能力显著高于PolyI：C和BTV。浓度高的BTVdsRNA诱导细胞产生的IFN-β水平高，说明二者之间存在剂量依赖性。BTVdsRNA对不同性质的人源细胞（人肺癌A549细胞、人正常肺细胞HEL）具有不同的诱导产生IFN-β的能力，诱导人正常肺细胞HEL产生IFN-β的能力显著地高于诱导人肺癌细胞A549产生IFN-β的能力（P〈0．05）。结论裸露的BTVdsRNA分子能有效地诱导人源细胞产生IFN-β；结合BTV和dsRNA对人的安全性以及人类正在努力寻找新的内源性IFN诱导剂的事实，可以推断BTV dsRNA具有发展成内源性IFN诱导剂之潜能。
- 戴莹陈冬娥高婧胡俊董长垣
- 关键词：蓝舌病毒BTVDSRNA
- 蓝舌病毒HbC_3株诱导人肝癌细胞Hep-3B的凋亡
- 2006年
- 采用MTT法检测BTV-HbC3对Hep-3B细胞的增殖抑制作用,流式细胞术检测BTV-HbC3诱导Hep-3B细胞的凋亡情况,透射电镜观察感染BTV-HbC3的Hep-3B细胞超微结构变化。结果表明BTV-HbC3对Hep-3B细胞具有抑制效应,并呈浓度和时间依赖性;BTV-HbC3作用下Hep-3B细胞呈现凋亡特征;BTV-HbC3能有效感染人肝癌细胞株Hep-3B,并在其中有限地复制,同时抑制该细胞增殖,诱导其进入凋亡。本研究证实了蓝舌病毒HbC3株对人肝癌细胞Hep-3B的杀伤及其诱导凋亡作用,结合本室已反复证实该病毒不感染人源正常细胞的事实,提示了该病毒具有抗人肝癌之潜能。
- 汪艳雷森林郭淑芳高婧戴莹董长垣
- 关键词：凋亡
- 蓝舌病毒HbC_3株S7基因5′非编码区序列分析被引量：5
- 2004年
- 根据已发表的蓝舌病毒(bluetonguevirus,BTV)10型标准株S7基因设计合成一对与其5′ NCR(non codingregion)序列同源的引物,经反转录 聚合酶链反应(RT PCR)扩增出HbC3株和10型标准株长度分别为277bp和290bp的S7基因5′非编码区cDNA片段,以建立起dsRNA体外扩增系统.将扩增的BTV HbC3毒株的S7基因5′非编码区片段通过粘端连接克隆到pUCm T载体中,用PCR技术和限制性内切酶分析鉴定,表明获得重组质粒pUCm T BTV HbC3 S7.通过核苷酸序列分析方法分别将2个毒株的S7基因5′非编码区与呼肠孤病毒 3(reovirus 3)型比对,发现BTV HbC3株与呼肠孤病毒 3L2基因5′非编码区基因具有完全的同源性.将BTV HbC3毒株接种在不同细胞系如猴肾传代细胞(Vero)、人肝癌细胞(Hep 3B)和小鼠成纤维细胞(L929)等细胞株上,比较BTV HbC3在不同种系细胞上的增殖特征,并且用双向免疫扩散试验证实BTV HbC3和BTV 10型之间的血清学关系.结合本实验室的研究结果提示BTV HbC3株可能是蓝舌病毒的一个新的基因型.
- 桂亦瑞董长垣陈晓张蔚英刘军
- 关键词：蓝舌病毒克隆基因型非编码区呼肠孤病毒科
- 线粒体在蓝舌病毒HbC_3株诱导人肝癌细胞凋亡中的作用
- 2006年
- 目的:探讨BTV-HbC3对人肝癌Hep-3B细胞线粒体功能和膜电位的影响及其与细胞凋亡关系。方法:利用透射电镜和荧光显微镜观察Hep-3B细胞感染BTV-HbC3在24,36,48 h的凋亡情况与其线粒体形态变化;噻唑蓝(MTT)法检测其线粒体功能;流式细胞仪检测经Rh123/PI染色的BTV-HbC3诱导该细胞线粒体跨膜电位(△Ψm)和Annexin V/PI染色的细胞凋亡率。结果:Hep-3B细胞感染病毒在24,36,48 h时可导致线粒体功能下降,同时使线粒体膜电位显著降低,细胞凋亡率显著增加。结论:BTV-HbC3通过诱导凋亡来抑制人肝癌细胞的生长,其机制与线粒体跨膜电位下降有关。
- 汪艳易有荣崔冶建董长垣
- 关键词：细胞凋亡线粒体膜电位人肝癌细胞
- 蓝舌病毒HbC_3对几株人和动物肿瘤细胞的感染特性研究被引量：14
- 2004年
- 用BTV-HbC3感染人肺癌SPC-A-1细胞,人宫颈癌HeLa细胞,人星型胶质瘤U251细胞,小鼠星形胶质瘤C6细胞及人胚肺HEL细胞后,观察细胞病变效应(CPE);运用透射电镜技术及琼脂双扩散试验检测BTV-HbC3对各种不同肿瘤细胞及人胚肺HEL细胞的感染性;并用RT-PCR技术检测蓝舌病毒的增殖情况。结果显示,BTV-HbC3对正常HEL不感染,但能在不同来源的某些肿瘤细胞中选择性增殖,产生不同程度的细胞病变效应(CPE)及调亡现象,终致肿瘤细胞死亡。其中以人肺癌SPC-A-1细胞对其最为敏感。因此,初步认为BTV-HbC3株能靶向性杀死某些肿瘤细胞,从而为深入开展BTV-HbC3靶向性抗肿瘤的研究提供了第一手实验室依据。
- 肖安涛董长垣Joseph K.-K.Li陈冬娥刘军张蔚英
- 关键词：蓝舌病毒呼肠孤病毒科动物肿瘤细胞细胞病变效应
- 琼脂糖蛋白质A反向免疫共沉淀法纯化蓝舌病毒HbC_3被引量：2
- 2005年
- 用高效液相色谱(HPLC)、透射电镜检测琼脂糖蛋白质A反向免疫共沉淀法纯化蓝舌病毒湖北株(BTV HbC3)的效果,组织培养半数感染量(TCID50)比较其纯化前后的生物学活性.结果显示,纯化过程对病毒生物学活性无明显影响,透射电镜下,纯化病毒背景清晰, HPLC解析出纯化物仅单一病毒峰.本纯化体系用于提纯BTV HbC3 效果显著,操作简便,具备高通量高活性纯化病毒的潜能,为建立大量纯制高活性蓝舌病毒用于实验室靶向性抗癌研究和生产实践奠定技术平台.
- 刘文培董长垣刘文惠郭淑芳卢莉莉王海琪
- 关键词：病毒纯化蓝舌病毒
- BTV及其dsRNA分子诱导IFN产生和细胞凋亡被引量：1
- 2005年
- 在离体培养细胞上探讨BTV(BluetongueVirus,BTV)和BTVdsRNA分子诱导人宫颈癌Hela细胞IFN(Interferon)产生和凋亡的生物医学作用。离体培养的人宫颈癌Hela细胞单层分别施以不同水平的蓝舌病毒(BTV)和脂质体包裹的BTVdsRNA等因素处理,比较研究不同处理后细胞形态学差异;并通过MTT法检测不同处理条件下细胞存活率的差异;ELISA试剂盒检测培养细胞上清液中IFN含量及流式细胞仪检测细胞凋亡率。分析了不同处理条件下不同用量的病毒及不同浓度的RNA脂质体复合物诱导培养细胞产生IFN量的差异,揭示了不同因素和不同水平处理下,Hela细胞IFN产量具有显著性差异(p<0.05),而BTVdsRNA诱导人宫颈癌Hela细胞凋亡能力低于BTV(p<0.05)。BTVdsRNA可显著诱导人宫颈癌细胞产生IFN和凋亡,推断BTVdsRNA具有发展成为新的干扰素诱导剂的潜能。
- 王海琪董长垣陈东娥陈晓郭淑芳刘文培
- 关键词：DSRNA干扰素转染凋亡
