国家自然科学基金(30700788)
- 作品数：6 被引量：6H指数：1
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- 人源与鼠源神经生长因子信号肽引导β-内啡肽分泌表达的差异
- 2009年
- 目的:考察人源神经生长因子信号肽序列是否具有介导β-内啡肽分泌性表达的作用,以及人源与鼠源神经生长因子信号肽的作用效率是否存在差异。方法:构建2个分别利用人或鼠的信号序列介导β-内啡肽分泌表达的真核表达载体pcD-NA3.1-hEP和pcDNA3.1-mEP;脂质体法转染NIH3T3细胞,转染48 h后分别收集细胞培养上清液、细胞,以及细胞呈单层生长的盖玻片。收集的上清液用RIA法测定β-内啡肽的浓度;收集的细胞提取总RNA,一步法RT-PCR检测融合基因的mR-NA的转录;长有细胞的盖玻片处理后进行细胞免疫荧光染色。结果:RT-PCR的结果显示,所构建的融合基因在NIH3T3细胞内发生了表达,β-内啡肽主要分布在NIH3T3细胞的胞质内。pcDNA3.1-hEP和pcDNA3.1-mEP分别转染NIH3T3细胞48 h后,细胞培养上清β-内啡肽的浓度分别是(280.33±24.16)pg/ml和(191.04±7.96)pg/ml,有显著的统计学差异(P<0.05),且与空白对照之间均有显著的统计学差异(P<0.01)。结论:人源神经生长因子信号肽序列能够介导β-内啡肽蛋白的分泌性表达,且作用效率要优于鼠源信号肽。
- 徐学武裴树俊缪雪蓉俞卫锋
- 关键词：信号肽神经生长因子Β-内啡肽分泌性表达
- 核因子-κB特异性的RNA干扰腺病毒的构建及其对枯否细胞内毒素反应的影响被引量：1
- 2009年
- 目的构建针对大鼠核因子（NF）-κB的腺病毒，采用RNA干扰方法观察其对内毒素诱导的大鼠肝枯否细胞（κC）NF—κB抑制和肿瘤坏死因子（TNF）-α、白细胞介素（IL）-6释放的影响。方法合成双链寡核苷酸siNF—κB克隆入pShuttleHl载体，取0．5μg线性化后的pShuttleHlsiNF—κB电转化BJ5183感受态细菌获取重组腺病毒骨架质粒；取线性化的重组质粒4μg利用Lipo—fectamine^TM2000转染骨架质粒至HEκ293细胞获取重组腺病毒Ad—siNF—κB；TCIDS0法测定病毒滴度；腺病毒以MOI=10感染原代培养大鼠肝枯否细胞，观察对内毒素诱导的NF—κB抑制和TNF-κB、IL-α释放的影响。结果目的基因成功克隆入腺病毒，病毒滴度为5．32×10^9pfu／ml。转染腺病毒Ad—siNF—κB后的内毒素诱导的肝KC及NF—κBmRNA及TNF-α、IL-6的表达均明显减弱。结论成功构建表达NF—κBsiRNA的腺病毒，具有良好的抑制NF—κB和TNF-α、IL-6的作用。
- 吴飞翔吕欣孙玉明俞卫锋黄盛东杨立群徐学武袁扬
- 关键词：RNA干扰腺病毒枯否细胞
- 吸入性麻醉药物的抗炎作用被引量：1
- 2008年
- 重大手术创伤、严重外伤、休克、感染、脏器缺血再灌注损伤、内毒素血症是围术期常见的现象，往往导致局部及全身严重的炎症细胞因子反应，炎症反应的过激被认为是造成脏器损伤的重要机制，核转录因子（NFκB）的激活及肿瘤坏死因子α（TNFα）、白细胞介素（IL）-1β等炎症因子的释放被认为是炎症级联反应的早期始动环节。近年来的研究显示以异氟醚为代表的吸人性麻醉药可明显减轻心、脑、肺、肝、肾等脏器的缺血再灌注损伤及内毒素性损伤，保护脏器功能，其机制较复杂，其中吸入麻醉药对炎症反应的抑制作用被认为是其中的重要机制，现将相关研究进展综述如下。
- 吕欣俞卫锋
- 关键词：麻醉药物抗炎作用吸入性肿瘤坏死因子Α细胞因子反应脏器损伤
- TLR4干扰RNA腺病毒的构建及其对肺泡巨噬细胞内毒素反应的影响被引量：2
- 2008年
- 目的构建表达大鼠TLR4siRNA的腺病毒,并观察对内毒素诱导的大鼠肺泡巨噬细胞TLR4的抑制和TNF-α、IL-10释放的影响。方法合成双链寡核苷酸并克隆入pShuttleH1载体,pShuttleH1-TLR4线性化后电转化到含pAdEasy-1的BJ5183感受态细菌中获取重组质粒,重组质粒用脂质体转染293细胞获取重组腺病毒Ad-siTLR4;扩增、纯化腺病毒,TCID50法测定病毒滴度。原代培养大鼠肺泡巨噬细胞,腺病毒Ad-siTLR4感染后加入内毒素,采用RT-PCR和Western blot观察TLR4蛋白及mRNA的表达,ELISA检测TNF-α、IL-10的释放情况。结果目的基因序列正确并成功克隆入腺病毒,腺病毒Ad-siTLR4滴度为5.72×109pfu/mL。转染腺病毒后的内毒素诱导的肺泡巨噬细胞TLR4蛋白和mRNA水平下降,TNF-α、IL-10的表达均明显减弱。结论本研究成功构建了表达大鼠TLR4 siRNA的腺病毒,具有良好的抑制TLR4和TNF-α、IL-10的作用,为下一步动物体内实验基因治疗急性肺损伤奠定良好的基础。
- 吴飞翔吕欣俞卫锋黄盛东徐学武孙玉明袁扬卞金俊
- 关键词：TOLL样受体4RNA干扰腺病毒IL-10
- 异氟醚预处理对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的影响被引量：1
- 2008年
- 目的探讨异氟醚预处理对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的影响。方法成年雄性SD大鼠24只，体重180～220g，随机分为3组（n=8）：假手术组（S组）吸入纯氧30min，间隔30min后仅开腹；肝脏缺血再灌注组（IR组）吸入纯氧30min，间隔30min后行肝脏缺血60min，再灌注4h；异氟醚预处理组（Iso组）吸入1．4％异氟醚30min，间隔30min后行肝脏缺血60min，再灌注4h。于再灌注4h时处死大鼠，留取肝脏及腹主动脉血5ml。测定血清谷丙转氨酶（ALT）和谷草转氨酶（AST）浓度，血清及肝组织匀浆上清液中肿瘤坏死因子α（TNF-α）的浓度，肝组织髓过氧化物酶（MPO）、超氧化物歧化酶（SOD）活性及丙二醛（MDA）含量，观察肝组织病理学改变。结果与S组比较，IR组、Iso组血清ALT、AST和TNF-α水平明显升高，肝组织TNF—α含量升高，肝组织MPO活性升高，MDA含量升高，SOD活性降低（P〈0．05或0．01），肝组织病理损伤明显；与IR组比较，Iso组血清ALT、AST和TNF-α水平降低，肝组织，TNF-α含量降低，肝组织MPO活性降低，MDA含量降低，SOD活性升高（P〈0．05或0．01），肝组织病理损伤程度减轻。结论1．4％异氟醚预处理可明显减轻大鼠肝脏缺血再灌注损伤，其机制可能与抑制TNF-α的释放、减少中性粒细胞在肝组织的浸润有关。
- 吕欣李泉俞卫锋吴飞翔黄盛东杨立群李晓青
- 关键词：异氟醚缺血预处理再灌注损伤
- 异氟醚预处理对缺血／再灌注复合内毒素大鼠肝脏损伤的影响被引量：1
- 2008年
- 目的观察再灌注期腹腔注射内毒素脂多糖（LPS）对大鼠肝脏缺血／再灌注（I／R）损伤的影响以及异氟醚（ISO）预处理的干预作用。方法将32只SD大鼠随机均分为4组：假手术（Sham）组、单纯肝脏I／R组、肝脏I／R复合LPS损伤（I／R＋LPS）组及ISO预处理组。I／R＋LPS组吸氧预处理后间隔0．5h进行肝脏缺血1h、再灌注4h，再灌注开始时腹腔内注入LPS,ISO预处理组以ISO吸入预处理0．5h，间隔0．5h后进行I／R损伤操作，再灌注开始时腹腔内注入LPS。再灌注4h处死各组动物，留取肝脏及血液标本；观察各组肝组织病理学改变，血清丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的变化以及肝组织TNF-α髓过氧化物酶（MPO）活性的改变。结果与Sham组比较，损伤各组血清ALT、AST、TNF-α及肝组织TNF-α、MPO活性均显著升高（P均〈0．01）；与I／R组比较，I／R＋LPS组肝脏损伤和炎症细胞因子反应明显较重（P〈0．05或P〈0．01）；与I／R＋LPS组比较，ISO预处理组肝脏的病理损伤明显较轻，血清ALT、AST、TNF-α水平及肝组织MPO活性和促炎细胞因子TNF-α的表达水平均显著降低（P均〈0．05）。结论再灌注期复合LPS腹腔注射明显加重了肝脏的损伤和炎症细胞因子反应，ISO预处理可明显减轻复合损伤介导的炎症反应，保护肝脏。
- 吕欣李泉黄盛东吴飞翔杨立群俞卫锋
- 关键词：异氟醚内毒素
