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5株鸡传染性支气管炎病毒M基因克隆及序列分析: 2008年; 利用RT-PCR技术成功扩增出5株鸡传染性支气管炎病毒(IBV)分离株M基因全长cDNA,并将其克隆到pGEM-T Easy载体上,获得M基因的重组质粒。序列分析表明,5株IBV分离株间的M基因核苷酸同源性为89.0%～100.0%,与参考毒株核苷酸同源性为85.7%～99.3%;在M蛋白遗传进化树中,5株IBV分离株分居3个群;分离毒株M蛋白的α-螺旋结构主要分布在N端前100个氨基酸残基的肽段区,其他的部分主要是β-折叠和无规则卷曲结构,表明IBV分离株M蛋白在基因序列和二级结构上相对保守。; 施少华陈珍邴国霞刘祥刘金华黄瑜; 关键词：鸡传染性支气管炎病毒 M基因

水禽源禽1型副黏病毒强毒RT-PCR方法的建立被引量：2: 2009年; 参照GenBank上登录的水禽源禽1型副黏病毒强毒株F基因序列设计引物,建立检测水禽源禽1型副黏病毒强毒株的RT-PCR方法。该方法能从水禽源禽1型副黏病毒强毒株扩增出1条400 bp的特异片段,从水禽源禽1型副黏病毒弱毒、鸭瘟病毒、鸭1型肝炎病毒、减蛋综合征病毒、传染性法氏囊病病毒、H9亚型禽流感病毒和禽多杀性巴氏杆菌等均不能扩增出目的片段。敏感性试验显示该RT-PCR方法最低可检测出10 pg的病毒核酸。因此,该RT-PCR方法可用于水禽源禽1型副黏病毒强毒的临床诊断。; 施少华程龙飞陈红梅傅光华杨维星黄瑜; 关键词：强毒株

4个H9N2亚型禽流感病毒毒株HA基因序列比较与分析被引量：6: 2009年; [目的]测定H9N2 AIV4个毒株血凝素基因序列,并进行比较分析,从分子生物学角度了解各毒株间的差异和变异规律,进而了解该亚型禽流感的分布及流行规律。[方法]参照H9N2亚型禽流感HA基因序列设计1对引物,对禽流感A/Chicken/Hebei/WD/98(H9N2)、A/Chiken/Hebei/ZD/04(H9N2)、A/Chicken/Beijing/MY/06(H9N2)和A/Chicken/Beijing/PG/08(H9N2)4个毒株HA基因进行扩增、克隆和测序,并将这4个毒株的HA基因序列分别与GenBank登录的10个H9N2亚型禽流感毒株进行比较分析。[结果]获得了4个毒株HA基因(ORF)全长1 683 bp,编码561个氨基酸;4个毒株之间的核苷酸和氨基酸同源性分别为92.5%～95.6%和95.2%～96.8%;WD株、MY株、PG株和ZD株与其他10个毒株的核苷酸和氨基酸序列同源性分别为82.6%～95.1%、83.0%～99.0%、82.7%～95.5%、81.30%～95.7%、86.6%～96.3%、86.6%～97.9%、87.0%～97.1%、86.9%～97.3。[结论]HA基因在不同毒株间具有很高的同源性。; 于博章振华姜北宇钱爱东李林景小冬张建伟; 关键词：禽流感 H9N2 血凝素基因

禽流感H9亚型流行毒株交叉免疫保护试验被引量：17: 2009年; 采用北京市农林科学院畜牧兽医研究所1998年-2008年在北京及河北省分离的4株禽流感病毒H9亚型流行毒株,分别制备不同分离毒株灭活疫苗,免疫SPF鸡,进行交叉免疫保护试验。结果表明,用4个不同时期的分离毒株所制备出的灭活疫苗免疫鸡后,各免疫组鸡禽流感(H9亚型)的HI抗体效价均明显上升,所诱导产生的HI抗体效价基本相同;不同时期分离毒株大多产生了较好的交叉保护力。用1998年、2004年及2006年分离的流行毒株制备出的灭活疫苗能够保护2008年流行毒株的攻击。; 姜北宇章振华李林景小冬张建伟郑小兰; 关键词：H9亚型禽流感流行毒株疫苗交叉免疫

Sequence Comparison and Analysis of HA Gene of Four H9N2 Avian Influenza Virus Isolates: 2009年; [ Objective] To determine the HA gene sequences of four H9N2 Avian influenza virus （AIV） strains and carry out comparative analysis so as to understand the difference and variation pattern of each strain from the angle of molecular biology and to know the distribution and epidemic law of H9N2 AIV. [Method] One pair of primers was designed referring to HA gene sequences of H9N2 AIV. The HA genes of A/Chicken/Hebei/WD/98 （H9N2; WD98 for short）, A/Chicken/Hebei/ZD/04 （H9N2; ZD04 for short））, A/Chicken/Beijing/MY/06 （H9N2; MY06 for short））, and A/Chicken/Beijing/PG/08 （H9N2; PG08 for short）） were amplified, cloned and sequenced. Then the HA gene sequences of these strains were compared with that of 10 H9N2 AIV stains in GenBank. [Result] The ORF of HA genes of the four strains was 1 683 bp in size, encoding 516 amino acids. The HA gene sequences of the four strains, WD98, MY06, PG08, and ZD04, were 82.6% -95.1%, 83.0% -99.0%, 82.7% -95.5%, and 81.3% -95.7% homologous to that of the 10 H9N2 AIV stains, respectively. And the homology of amino acid was respectively 86.6% -96.3%, 86.6% -97.9%, 87.0% -97.1%, and 86.9% -97.3%. [ Conclusion] The HA gene has greatly high homology among different strains.; 章振华于博姜北宇钱爱东李林景小冬张建伟; 关键词：H9N2

动物源性流感病毒与人流感流行被引量：10: 2009年; 2009年4月,北美地区发生了人感染H1N1"猪流感"疫情,并且疫情呈现暴发漫延的态势。全世界关注的目光继1997年H5N1禽流感病毒感染人事件首次在中国香港发生,以及2003年以来包括15个国家和地区多起H5N1禽流感病毒感染人事件之后,再次聚焦到动物源性流感病毒上。是否动物流感病毒已经具备了引起人类疫情暴发的能力?是否新的一场大的人流感疫情就要暴发?为什么世界卫生组织又于4月30日为本次"猪流感"更名为"甲型H1N1流感"?对于流感暴发脚步的逼近我们是否做好了准备?本文对历史上人流感疫情暴发情况,动物流感病毒感染人事件的发生情况和流行病学特点,以及人流感疫情发生与动物流感病毒之间的关系等进行了总结与分析,以期更好地了解流感病毒在不同宿主之间的传播,为更加从容地面对这场突如其来的疫情,以及为疫情的预防和控制提供理论指导。为了能够准确反映这次流感的情况和国际对流感及流感病毒的统一命名法则,以及更加清晰并易于理解地表述清楚,我们建议将这次流感称作"北美流感"或"墨西哥流感"。; 宋晓晖胡旭东马素芳王明旸张蔚马颖陈越马广鹏汪明杨希才刘文军刘金华田波刘翟严景华高福; 关键词：流感猪流感禽流感人流感

信号肽序列对禽流感病毒H5N1HA蛋白GFP融合分子在真核细胞中表达的影响被引量：5: 2009年; 【目的】构建绿色荧光蛋白(GFP)与禽流感病毒(AIV)HA基因的融合表达载体,观察信号肽序列的有无及位置对HA-GFP在293T细胞中的表达影响。【方法】应用PCR方法从H5N1亚型AIV质粒DNA中扩增出完整的或除去信号肽序列的HA基因片段,PCR产物经XhoⅠ和SmaⅠ双酶切后定向插入绿色荧光蛋白真核表达载体pEGFP-C1的不同位点,将得到的重组体M1,M2和M3分别转化宿主菌DH5α,经双酶切及DNA测序鉴定分析后,采用脂质体转染法将pEGFP-C1,M1,M2和M3转染人胚肾细胞系293T细胞,荧光显微镜下观察HA-GFP的表达,流式细胞仪检测表达HA蛋白的细胞百分数。【结果】经酶切及测序鉴定成功构建了HA-GFP重组表达载体M1,M2和M3,荧光显微镜及流式细胞仪检测到重组质粒转染的293T细胞表达强的荧光蛋白,信号肽的有无对HA-GFP融合蛋白在293T细胞中的表达有显著影响,信号肽序列使HA-GFP融合蛋白在293T细胞中的表达减少,而信号肽的位置对融合蛋白表达量的影响不显著。【结论】信号肽的有无对HA-GFP融合蛋白在细胞中的表达有显著影响。; 苏艳张宝江申煜黄嘉驷; 关键词：信号肽序列

2株H9N2亚型禽流感病毒全基因组序列测定及遗传性分析被引量：5: 2011年; [目的]探讨2株H9N2分离毒株与其他参考毒株的全基因组遗传变异关系。[方法]采用RT-PCR技术扩增了2株H9N2亚型禽流感病毒分离株8个基因片段的全基因序列,并对所得序列与6个参考毒株进行了同源性比较及遗传进化树分析。[结果]2个毒株与6个参考毒株全基因组同源性在91.1%～95.4%,PG08与C/BJ/1/94的全基因序列的核苷酸同源性最高为91.3%;而ZD06与D/HK/Y280/97最高为92.3%。2个分离株的HA基因裂解位点均为PARSSR/GLF,均为H9N2低致病力禽流感病毒。[结论]ZD06株与C/Pak/2/99的亲缘关系最近,属欧亚种系;PG08株与其他毒株亲缘关系稍远,它可能是不同亚支基因重排的产物。; 沈佳章振华姜北宇李林景小冬张建伟; 关键词：禽流感病毒 H9N2 全基因组

番鸭源禽1型副黏病毒HN基因主要抗原结构域和V基因融合表达载体的构建: 2009年; 为构建番鸭源禽1型副黏病毒HN主要抗原结构域(HNd)和V基因融合表达载体,经PCR及融合PCR分别从重组质粒pMDHN和pMDP中扩增HN基因主要结构域和V基因cDNA。将HNd经KpnⅠ和BamHⅠ双酶切、V基因用EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切后,分别定向插入真核载体pcDNA3的多克隆位点相应的酶切位点中,对2个单表达质粒pcDNAHNd和pcDNAV进行酶切和测序鉴定。利用融合PCR技术扩增出HNd-V基因,定向克隆至pcDNA3的EcoRⅠ和XhoⅠ酶切酶切位点之间,转化感受态细胞后,经PCR反应初筛后,对阳性克隆进行酶切分析及测序鉴定。对单表达重组质粒进行酶切分析及测序鉴定,结果表明:HNd和V基因已被正确定向克隆至真核表达载体pcDNA3,成功构建了2个基因的单表达质粒pcDNAHNd和pcDNAV;对融合重组质粒酶切分析和测序鉴定表明,HNd-V融合基因正确克隆进真核表达质粒pcDNA3中,成功构建了融合表达载体pcDNAHNd-V。; 傅光华程龙飞施少华陈红梅彭春香黄瑜; 关键词：融合表达载体

番鸭源禽1型副粘病毒PX2/03株P基因的克隆及原核表达被引量：4: 2007年; 根据GenBank中水禽源1型副粘病毒(ZJ1)P基因序列设计2对引物,运用RT-PCR技术从1株雏番鸭源禽1型副粘病毒(PX2/03)的基因组中扩增出P全基因的cDNA.测序结果表明,P基因全长1441 nt,包含1个完整的开放阅读框架,编码395个氨基酸.与GenBank中已发表的P基因比对发现,该基因与近年来分离的鹅源禽1型副粘病毒分离株的亲缘关系很近.以分别含BamHⅠ、XhoⅠ的1对引物对该目的基因进行亚克隆后插入到pET32 a原核表达载体中,构建了pETP原核重组载体,将该重组载体转化入BL21(DE3)后,成功诱导表达了分子质量大小约为62 ku的P融合蛋白,经W estern b lotting检测证实表达产物具有免疫活性.; 傅光华程龙飞施少华彭春香黄瑜; 关键词：番鸭 P基因克隆原核表达

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国家重点基础研究发展计划(2005CB523001)

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