浙江省科技计划项目(2008C23072)
- 作品数：6 被引量：8H指数：2
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- 相关机构：杭州师范大学杭州市第二人民医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 使用免疫BMPs纯化细菌PCR反应模板的比较被引量：2
- 2012年
- 目的:使用免疫BMPs,对含有大肠杆菌O157的粪便标本,进行目标病原菌的捕获和洗净,建立一种快速纯化细菌PCR反应模板的方法。方法:将大肠杆菌O157抗体接种于BMPs表面,制成免疫BMPs。使用免疫BMPs,对含有不同浓度大肠杆菌O157的粪便标本,进行目标病原菌的捕获、分离和洗净,再使用洗净的病原菌制备PCR反应模板。作为对照,对含有不同浓度大肠杆菌O157的粪便标本,常规进行增菌培养及鉴别培养后,制备细菌的PCR反应模板,或粪便标本直接制备PCR反应模板。结果:使用免疫BMPs处理后制备PCR反应模板,与通过常规增菌培养和鉴别培养后制备PCR反应模板,PCR检测结果一致。而粪便标本直接取样制备PCR反应模板,大肠杆菌O157低浓度时,PCR检测的阳性率较低。结论:利用免疫BMPs捕获自然标本(粪便)中的目标病原菌,通过分离和洗净,去除标本中存在的PCR反应抑制物等影响因素,可省略增菌培养及鉴别培养,快速纯化目标病原菌的PCR反应模板。
- 田菊霞解宇杨艳宏
- 关键词：纯化
- 菌源性磁珠在病原菌检测中的应用被引量：2
- 2010年
- 目的 建立一种可检测低浓度大肠埃希菌O157等的产Vero毒素大肠埃希菌（verotoxigenic escherichia coli,VTEC）的方法.方法 从磁性细菌中获取菌源性磁珠（bacterial magnetic particles,BMPs）,将大肠埃希菌O157抗体接种于BMPs表面,形成免疫BMPs.收集养牛场排出的污水标本,每份10ml中添加免疫BMPs 1mg,通过外磁场诱导,以免疫BMPs对污水标本进行靶向取样.增菌培养12h,以VTEC的vt1（Vero毒素1基因）、vt2（Vero毒素2基因）为增扩对象,进行PCR检测.作为对照,同样的污水标本,每份10ml,常规离心分离,分离物经过12h增菌培养后,同样进行PCR检测.结果 经免疫BMPs靶向取样处理后,40份污水标本,确诊含有vt1及/或vt2基因的6份.而同样40份污水标本,经离心分离处理,最后确诊含有vt1和/或vt2基因的1份.结论 对于有大量杂菌和异物的污水标本,利用免疫BMPs,通过外磁场诱导可对目标病原菌进行靶向取样,作为病原菌检测的辅助手段,可降低漏检率.
- 毛荣彪解宇田菊霞范超明
- BMPs的凝集性特征及其应用研究
- 2009年
- 目的对菌源性磁珠(Bacterial Magnetic Particles,BMPs)在溶液中的凝集,及免疫BMPs在免疫检测中的凝集性特征进行分析和评价。方法从磁性细菌体内提取BMPs,以粒径相仿的Fe3O4磁珠为对照,对BMPs在溶液中的凝集,以吸光度半减法进行量化比较。将癌胚抗原(Carcinoembryonic Antigen CEA)相关抗体接种于BMPs表面形成免疫BMPs。在CEA溶液中添加免疫BMPs,借助显微镜观察凝集现象;并且对回收的凝结体经0.1MAlbumiHCl缓冲液(pH2.3)处理,再进行同样免疫凝集检测及显微镜观察。结果浓度为50μg/ml的BMPs PBS溶液,测定吸光度半减时间值为126min,Fe3O4磁珠吸光度半减时间值为35min。在一定浓度的CEA溶液中添加免疫BMPs5μg,通过显微镜观察,CEA浓度在100pg/ml以上时,凝集现象非常明显,且CEA浓度增大时凝集体也随之增大。但结合了CEA的免疫BMPs经0.1M Albumin-HCl缓冲液(pH2.3)处理,解开抗原抗体的结合,再进行同样免疫凝集检测及显微镜观察,发现无类似凝集现象出现。表明凝集现象系由抗原抗体所致,而非单纯的磁性体凝集。结论与Fe3O4磁珠相比,BMPs相互间不易凝集,主要表现为对外磁场的感应性凝集。从BMPs的凝集性特征分析,与普通Fe3O4磁珠相比,具有明显的优势,比较适合作为免疫磁珠法检测中的磁性载体。
- 杨艳宏解宇田菊霞
- 免疫磁捕获-PCR检测大肠杆菌O157
- 2010年
- 目的使用免疫BMPs,对牛粪标本中的大肠杆菌O157进行免疫磁捕获,再对捕获物进行PCR检测,研究免疫磁捕获-PCR检测牛粪标本中大肠杆菌O157的方法。方法从磁性细菌中获取BMPs,将大肠杆菌O157抗体接种于BMPs表面,制成免疫BMPs。使用免疫BMPs,对大肠杆菌O157∶H7浓度为1×103cfu/g的牛粪标本,进行免疫磁捕获,对捕获物以vt1(Vero毒素1基因)、vt2(Vero毒素2基因)为增扩对象,进行PCR检测。作为对照,相同牛粪标本,直接对牛粪标本以vt1、vt2为增扩对象,进行同样PCR检测。结果相同牛粪标本,经免疫BMPs捕获处理,捕获物的PCR结果显示vt1及vt2基因阳性。而未经免疫磁捕获处理的牛粪标本,直接PCR检测的结果显示阴性。结论对牛粪标本,利用免疫BMPs,可捕获目标抗原,同时还可去除牛粪中存在的PCR反应抑制物等影响因素,提高检测敏感度。
- 田菊霞解宇杨艳宏
- 关键词：PCR大肠杆菌O157
- 细菌氧化反应实验模型被引量：1
- 2010年
- 目的使用虚拟的电压信号发生器,以及与电极、计算机的组合技术,探讨并建立细菌氧化反应的实验模型。方法虚拟的电压信号发生器由LabVIEW软件、多功能数据采集卡及计算机组成。计算机控制虚拟的电压信号发生器,输出阶梯形递增电压(0.00～1.00V,递增速率:10mV/s),加到电极上。电极系统由平面石墨电极、铂电极及饱和甘汞电极组成。使用大肠埃希氏菌,把附着细菌的纸质滤膜固定在工作电极表面,在工作电极与对极之间施加阶梯形递增电压,计算机同步记录伏安图谱。通过伏安图谱分析电极间的电子流动变化,探讨电子流动与细菌氧化反应之间的关联。结果纸质滤膜上附着大肠埃希氏菌时,伏安图谱显示施加电位0.72V(vs.SCE)附近出现电流的峰谷,峰电流值随菌浓度增大相应增高。纸质滤膜上未附着大肠埃希氏菌时,伏安图谱未显示出电流的峰谷。结论施加电位0.72V(vs.SCE)附近出现电流的峰谷,为大肠埃希氏菌氧化反应所释放的电子形成。大肠埃希氏菌的氧化反应,与菌体内辅酶A相关。
- 解宇王奎龙
- 关键词：细菌电极
- 薄膜分散-超声法制备BMPs磁性脂质体被引量：5
- 2012年
- 目的采用薄膜分散-超声法制备磁性颗粒(bacterial magnetic particles,BMPs)脂质体,考察BMPs浓度、超声功率和超声时间等因素对BMPs磁性脂质体粒径的影响。方法薄膜分散-超声法制备BMPs脂质体,调节BMPs浓度、超声功率和超声时间等因素,激光散射粒度仪测定磁性脂质体粒径。结果以薄膜分散-超声法制备的BMPs脂质体,BMPs浓度在(20～60)μg/mL时,磁性脂质体粒径基本稳定,平均94.9 nm;BMPs浓度在(60～100)μg/mL时,磁性脂质体粒径随着BMPs浓度增加而有增大的趋势。超声功率的增加或超声有效时间增大时,磁性脂质体的平均粒径有减小趋势,当超声功率为300 W、有效超声时间为100 s时,粒径出现最小值;但其后都存在转折,随着超声功率的再增加或超声有效时间再增大时,平均粒径反而出现增大现象。结论薄膜分散-超声法制备BMPs脂质体,通过控制BMPs浓度、超声功率和超声时间等因素,可以对磁性脂质体粒径进行调节。
- 田菊霞解宇杨艳宏
- 关键词：BMPS脂质体
