中央高校基本科研业务费专项资金(DL13EA06-02)
- 作品数：7 被引量：15H指数：2
- 相关作者：王春生安铁洙朴善花宋红卫李昊更多>>
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- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 哺乳动物DNA甲基化及其在体细胞诱导重编程中的作用被引量：3
- 2014年
- 诱导多能干细胞(Induced pluripotent stem cell,iPS)技术提供了将终末分化的细胞逆转为多潜能干细胞的可能,在干细胞基础理论研究和再生医学中具有重要意义。然而,目前体细胞诱导重编程方法效率极低,常发生不完全的重编程。研究表明,在不完全重编程的细胞中存在体细胞的表观遗传记忆,而DNA甲基化作为相对长期和稳定的表观遗传修饰,是影响重编程效率和iPS细胞分化能力的重要因素之一。哺乳动物DNA甲基化是指胞嘧啶第五位碳原子上的甲基化修饰,常发生于CpG位点。DNA甲基化能够调节体细胞特异基因和多能性基因的表达,因此其在哺乳动物基因调控、胚胎发育和细胞重编程过程中发挥着重要作用。此外,异常DNA甲基化可能导致iPS细胞基因印记的异常和X染色体的失活。文章重点围绕DNA甲基化的机制、分布特点、及其在体细胞诱导重编程中的作用进行了综述。
- 宋红卫安铁洙朴善花王春生
- 关键词：DNA甲基化诱导多能干细胞体细胞重编程
- 小鼠MyoD基因真核表达载体的构建与检测被引量：1
- 2015年
- 为了最终建立诱导小鼠iP S细胞为成肌细胞的方法,试验在克隆小鼠Myo D基因的基础上,将其与pc DNA3.1载体连接,以构建真核表达载体;采用脂质体法将重组质粒转染到小鼠胚胎成纤维细胞中,利用Real-time PCR技术、免疫荧光检测和流式分析等技术对转染前后细胞的Myo D基因表达情况进行检测。结果表明:成功克隆获得Myo D基因,并构建真核表达载体Myo D-pc DNA3.1;转染Myo D-pc DNA3.1的小鼠胚胎成纤维细胞经免疫荧光检测后在荧光显微镜下呈现表达Myo D基因的红色;Real-time PCR检测其Myo D基因相对表达量提高至8.926±0.010;经BD Accuri-C6个人型流式细胞仪检测,约有93%的转染细胞表达Myo D蛋白,在荧光倒置显微镜下可观察到表达Myo D蛋白而呈现的绿色荧光。说明已成功构建特异表达Myo D基因的真核表达载体Myo D-pc DNA3.1。
- 马丽媛王春生杜文敬朴善花安铁洙
- 关键词：小鼠成肌细胞转染成纤维细胞表达量
- MSTN基因敲低绵羊成纤维细胞株的筛选被引量：1
- 2014年
- 为了获得绵羊MSTN基因敲低成纤维细胞株,克隆获得MSTN基因序列构建其真核表达载体;设计合成并筛选3种MSTN基因干涉序列(M1、M2和M3),构建相应的3种RNA干涉载体;将MSTN基因真核表达载体单独或分别与3种RNA干涉载体共转染绵羊成纤维细胞后,分别检测其对MSTN基因表达的干涉效率以获得最佳的MSTN基因RNA干涉载体;将筛选的RNA干涉载体线性化后转染绵羊成纤维细胞,通过筛选获得转基因细胞株。结果显示,成功克隆得到与GenBank中序列同源性为100%的绵羊MSTN基因序列,并获得真核表达载体pcDNA3.1(+)-MSTN;构建获得MSTN基因RNA干涉载体pRNAT-M1、pRNAT-M2和pRNAT-M3;与单独转染pcDNA3.1(+)-MSTN后293GP细胞中MSTN基因的相对表达量相比,转染干涉载体后MSTN基因相对表达量明显下降,其中pRNAT-M1干涉效率最佳;将pRNAT-M1线性化后转染绵羊成纤维细胞并利用G418筛选获得转基因阳性细胞;获得的转基因阳性细胞的细胞形态、生物学特性均呈现正常;PCR检测结果显示,pRNAT-M1已整合到细胞基因组中。上述结果表明,成功获得了MSTN基因敲低的绵羊成纤维细胞株。
- 李昊薛超张秋婷王春生朴善花宋红卫安铁洙
- 关键词：绵羊成纤维细胞MSTN基因RNA干涉转基因细胞
- 转甜味蛋白Brazzein基因乳腺特异表达载体的山羊体细胞株筛选
- 2014年
- [目的]建立通过山羊乳汁获取甜味蛋白Brazzein的方法。[方法]将前期工作中构建的Brazzein基因山羊乳腺特异表达载体STP-pBC1进行线性化,采用脂质体法转染山羊成纤维细胞,以期获得转基因阳性细胞。[结果]采用脂质体法转染山羊成纤维细胞后,通过最适G418浓度(400μg/ml)筛选获得转基因阳性细胞;转基因阳性细胞形态呈现梭形且核仁清晰,其生长曲线呈现正常的"S";转基因阳性细胞经冷冻复苏后,仍呈现与冷冻前新鲜转基因细胞相似的形态和生长曲线;PCR鉴定结果表明,STP-pBC1已整合入转基因细胞的基因组中。[结论]成功获得乳腺特异的转甜味蛋白基因Brazzein的山羊成纤维细胞株。
- 王春生李咏乐仇雨歌朴善花安铁洙
- 关键词：山羊BRAZZEIN基因转基因细胞
- microRNA-133诱导绵羊脐带间充质干细胞分化为成肌细胞的研究
- 2018年
- 为了探明microRNA-133(miR-133)在诱导脐带间充质干细胞分化为成肌细胞过程中的作用,试验采用脂质体法以化学合成的miR-133转染绵羊脐带间充质干细胞并进行续培养。当细胞呈现成肌细胞的形态特征时,采用qRT-PCR法、免疫荧光法和流式细胞术分别检测转染细胞中成肌细胞特异性基因Desmin与Myf5mRNA的相对表达量、成肌细胞标记蛋白Desmin与MyoD的表达情况及表达成肌细胞标记蛋白的细胞比率。结果表明:转染并续培养后第28天,续培养的细胞有序生长并呈现融合趋势;qRT-PCR检测可见,转染细胞中成肌细胞特异性基因Desmin及Myf5mRNA的相对表达量明显提高;与未转染细胞相比,转染细胞特异性表达成肌细胞标记蛋白MyoD和Desmin;此外,转染细胞中表达MyoD和Desmin的细胞比率分别为99.3%和99.0%。说明miR-133在绵羊脐带间充质干细胞分化为成肌细胞过程中发挥重要作用。
- 杜文敬宋维文陈胜男朴善花王春生安铁洙
- 关键词：绵羊间充质干细胞诱导分化成肌细胞
- 山羊c-Myc基因的克隆及序列分析被引量：2
- 2014年
- 为了克隆出山羊c-Myc基因的CDS区序列,本研究利用RT-PCR技术,参照GenBank报道的绵羊、牛、猪、马等的c-Myc基因CDS区序列设计出特异性引物,从山羊胚胎皮肤组织中扩增出山羊c-Myc CDS区序列并进行序列分析。结果表明,山羊c-Myc基因CDS区全长1320bp(包括终止密码子),与绵羊c-Myc基因核苷酸序列(GenBank登录号:Z68501.1)比对仅有10处存在差异,其核苷酸序列同源性为99.17%,推导的氨基酸序列同源性为99.09%;与其他物种进行同源性分析结果显示,山羊c-Myc基因CDS区与猪、狼、人、大鼠、小鼠的核苷酸序列同源性分别为91.2%、92.0%、90.2%、86.9%、86.0%,推导的氨基酸序列同源性分别为93.6%、96.1%、92.3%、91.1%、89.6%;生物信息学软件分析结果表明,山羊c-Myc蛋白产物定位于细胞核并含有HLH结构域。本研究为进一步了解c-Myc基因的功能及探讨其在山羊体细胞重编程过程中的作用奠定了基础。
- 安辰瑞安铁洙张秋婷李昊朴善花王春生
- 关键词：C-MYC基因基因克隆
- microRNAs在多能干细胞向心肌细胞分化中的作用被引量：8
- 2015年
- microRNAs(miRNAs)是长约22 nt的非编码RNAs,广泛参与细胞的增殖、分化、病变、修复和凋亡等多种生命活动.多能干细胞(pluripotent stem cells)是指体外具有自我更新和多向分化潜能的细胞,在一定条件下可被定向诱导分化为多种细胞类型.miRNAs在多能干细胞中表达丰富,并通过调控基因表达影响其自我更新及分化.由多能干细胞向心肌细胞分化的方法主要有3种,即拟胚体形成法、与内胚层细胞共培养法和特定诱导物添加法.虽然这3种方法均可成功诱导多能干细胞向心肌细胞分化,但重复率很低.所以,人们把研究的视野逐渐转向miRNAs——这个广泛参与细胞生命活动的小分子物质.大量研究表明,在多能干细胞中,不同的miRNAs可通过打靶不同基因影响其向心肌细胞分化.在间充质干细胞中,miR-1、miR-133和miR-499可分别打靶Hes-1、SRF和Pdcd4;而在胚胎干细胞中,miR-1和miR-499分别打靶Hand2和Pacs2促进其向心肌细胞分化.miRNAs在多能干细胞向心肌分化作用机制的研究必将促进再生医学在心脏疾病治疗上的应用.
- 宋维文安铁洙王春生
- 关键词：MIRNA多能干细胞心肌细胞
- 转甜味蛋白Brazzein基因乳腺特异表达载体的山羊体细胞株筛选
- :建立通过山羊乳汁获取甜味蛋白Brazzein的方法;方法:本研究将前期工作中构建的Brazzein基因山羊乳腺特异表达载体STP-pBC1进行线性化,采用脂质体法转染山羊成纤维细胞,以其获得转基因阳性细胞;结果:当采用...
- 王春生李咏乐仇雨歌朴善花安铁洙
- 关键词：山羊
- 绵羊Oct4基因启动子克隆及其与牛和猪相关序列比较
- 为了探明绵羊Oct4基因启动子的结构特点,本文采用PCR方法首次克隆获得了绵羊Oct4基因启动子,在此基础上利用生物信息学软件,对比分析了绵羊、牛和猪Oct4基因上游调控序列。其结果显示,成功扩增获得绵羊Oct4启动子,...
- 李昊郭虎王春生宋红卫朴善花安铁洙
- 关键词：绵羊
- 文献传递
