江苏省自然科学基金(BK2008109)
- 作品数：2 被引量：16H指数：1
- 相关作者：高琪曹俊周华云朱京京刘耀宝更多>>
- 相关机构：中国检验检疫科学研究院无锡出入境检验检疫局江苏省寄生虫病防治研究所更多>>
- 发文基金：江苏省自然科学基金国家自然科学基金国家质检总局科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 恶性疟原虫红内期不同发育阶段PfRON4基因转录水平分析被引量：1
- 2009年
- 目的分析恶性疟原虫棒状体颈部蛋白4基因(PfRON4)在红内期不同发育阶段的转录水平。方法用山梨醇结合等渗细胞分离液(Percoll)对实验室体外培养的恶性疟原虫进行均一化处理,收集间隔为6h不同发育阶段的疟原虫,提取RNA。根据PfRON4基因及相关基因(PfAMA1和PfRhopH2)的序列设计特异性引物,构建标准质粒并制作标准曲线,对PfRON4及相关基因的mRNA进行定量检测分析。结果纯化并同步后的疟原虫生长发育较为同步均一,用于定量分析的标准曲线相关性较好,PfRON4、PfAMA1和PfRhopH2的相关系数(r值)分别为-1.00、-0.98和-0.98。产物熔解曲线分析结果均显示为单一波峰。定量分析结果显示,在恶性疟原虫红内期发育过程中,PfRON4基因的转录水平在裂殖子入侵红细胞后36～40h(即成熟裂殖体阶段)达到高峰。结论恶性疟原虫PfRON4基因在成熟裂殖体阶段高表达。
- 曹俊金子修高琪周华云夏超明诸葛洪祥坪井敬文鸟居本美
- 关键词：恶性疟原虫实时定量PCR转录
- SYBR GreenⅠ染料法定量PCR用于人体疟原虫定量检测及虫种鉴别的研究被引量：15
- 2011年
- 目的建立一种可用于疟原虫检测并同时鉴别虫种的荧光定量PCR方法。方法根据人体疟原虫18SrRNA基因序列特征,在疟原虫种特异性区域两侧的属特异性保守区设计引物,对4种人体疟原虫进行PCR扩增,将得到的扩增产物采用TA克隆法插入pGEMT载体制备标准质粒,用于制备标准曲线进行定量分析,并进行熔解曲线分析,测定各虫种扩增产物的熔解温度。结果 4种人体疟原虫均能扩增得到特异性片断,荧光定量PCR方法中建立的标准曲线相关关系较好(相关系数r=-1.00),熔解曲线分析结果显示,4种人体疟原虫的熔解温度相差较大,分别为三日疟原虫71.3℃、恶性疟原虫72.8℃、卵形疟原虫74.6℃和间日疟原虫75.8℃。结论建立的SYBR GreenI染料法荧光定量PCR技术可同时进行人体疟原虫的定量检测和虫种鉴别。
- 汪圣强周华云李宗刘耀宝傅旭峰朱京京曹俊高琪
- 关键词：疟原虫荧光定量PCR
