国家自然科学基金(30872857)
- 作品数：3 被引量：2H指数：1
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- c—myc在大鼠耳蜗组织发育和耳蜗前体细胞分化过程中的表达变化被引量：1
- 2011年
- 目的通过检测c—myc基因在大鼠耳蜗组织发育及前体细胞分化过程中的表达情况，探讨其在哺乳动物耳蜗发育中的作用。方法①取E10、E15、P1、P7和P14的SD大鼠耳蜗组织，应用RT--PCR、Western blot的方法检测c-myc在大鼠耳蜗组织发育过程中的表达情况。②取耳蜗前体细胞和分化7天后的分化细胞，用RT-PCR、免疫细胞化学染色和Western blot的方法检测c—myc在耳蜗前体细胞分化过程中的表达情况。结果从胚胎至出生后的耳蜗发育过程中，c-myc表达量呈现逐渐下降趋势；在前体细胞的分化过程中，c-myc的表达量也呈现下降趋势。结论c-myc可能参与调控大鼠耳蜗组织的发育及前体细胞的分化。
- 钟翠萍韩宇陈阳王烨陈俊米文娟邱建华
- 关键词：增殖细胞周期
- 携带c—myc基因重组腺病毒的构建和鉴定及其在豚鼠耳蜗中的表达与分布
- 2011年
- 目的构建携带c—myc基因的重组腺病毒表达载体，并观察其在豚鼠耳蜗内的表达分布，为探讨该基因的功能奠定实验基础。方法利用细菌内同源重组的方法，构建携带c—myc基因的重组腺病毒表达载体（Ad．c--myc--EGFP），并分别应用酶切、逆转录聚合酶链反应（RT--PCR）和测序方法鉴定腺病毒的构建情况。利用豚鼠耳蜗内显微注射术、Westernblot及荧光显微镜观察注射后该蛋白在耳蜗中的表达及分布特性。结果经酶切、RT--PCR和测序鉴定，质粒构建正确，重组腺病毒Ad．c--myc--EGFP构建成功。Ad．cmmyc--EGFP腺病毒豚鼠耳蜗内注射后第三天便可通过荧光显微镜观察到绿色荧光蛋白的广泛分布，且WesternBlot方法证实它可以上调耳蜗内c-Myc蛋白的表达。结论本实验成功构建了携带c—myc基因的重组腺病毒表达载体，它可以有效地感染豚鼠耳蜗内各种细胞，为深入研究c—myc基因在耳蜗中的作用奠定了实验基础。
- 韩宇钟翠萍陈阳邱建华
- 关键词：腺病毒耳蜗
- 蜗轴螺旋动脉平滑肌的培养及其鉴定被引量：1
- 2010年
- 目的:本研究通过联合两种常用的细胞培养方法,建立了一个蜗轴螺旋动脉平滑肌细胞原代培养的模型。方法:分离的蜗轴螺旋动脉的平滑肌来自于豚鼠。切碎血管组织并且将其放入37度的0.1%胰蛋白酶溶液中消化20分钟。消化后,将这些消化后的组织块在35-mm的培养皿中贴壁。运用这种培养方法,混杂的成纤维细胞通过与血管平滑肌细胞不同的贴壁能力,可在传代的时候被去除。在7-10天后,细胞从组织块中长出来。大约3周,细胞可长满培养皿。在第三代培养的血管平滑肌细胞中,纯的并且活性好的细胞可以被活得。经过形态学,免疫荧光化学和电镜对这种方法得到的血管平滑肌细胞进行了鉴别。结果:显示了典型的平滑肌的细胞的特点:形态学的"峰-谷"样的生长形态,免疫荧光化学显示这些细胞表达平滑肌细胞的特异性标志物(α-SM-actin和myosin。结论:通过本文研究方法得到的大量的纯的蜗轴螺旋动脉血管平滑肌细胞是一个很好的研究血管平滑肌细胞在内耳循环紊乱过程生理功能的一个体外模型。除此之外,还可以是一些作用于血管平滑肌药物评价的体外模型。
- 王烨米文娟韩宇钟翠萍邱建华乔莉
- 关键词：贴壁法消化法细胞培养
