广州市科技攻关项目(2004Z2-E0031)
- 作品数：7 被引量：64H指数：5
- 相关作者：雷红涛孙远明潘科王弘杨金易更多>>
- 相关机构：华南农业大学广东省教育厅南方医科大学更多>>
- 发文基金：广州市科技攻关项目国家自然科学基金广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生轻工技术与工程环境科学与工程更多>>
- Lipocalin文库的构建及与克百威有结合活性的小分子筛选被引量：2
- 2008年
- 构建大菜粉蝶Lipocalin蛋白家族中的BBP蛋白突变文库,依据基因序列,分别设计10条和12条引物,通过PCR重叠延伸法得到包含随机突变蛋白BBP的基因序列,并重组到噬菌粒载体pCANTAB5E中构建Lipocalin突变文库,库容达到4.0×109.以偶联分子BSA-克百威和OVA-克百威为靶分子,采用柱式和平皿式交叉法对Lipocalin文库进行了筛选,用竞争洗脱法洗脱特异结合活性的噬菌体.经过3轮筛选,从第3轮的洗脱液中随机挑选了10个重组克隆,用Dot-blotting法检测出K7anticalin分子能与克百威特异结合.为研发克百威的Anticalin类检测试剂盒提供了候选分子,也为拓宽Lipocalin文库在有害小分子检测方面的应用奠定了基础.
- 武婕杨金易张宏斌潘科王弘雷红涛郑霖肖治理孙远明
- 关键词：克百威
- 除草剂丁草胺直接竞争ELISA检测方法研究被引量：7
- 2006年
- 制备出3种不同结合比的酶标抗体,对检测条件进行了优化,建立了标记抗体固相抗原直接竞争ELISA(cdELISA)检测丁草胺的方法。结果表明,酶标抗体克分子比为1.55时偶合物活性最高,包被浓度1μg·mL-1,酶标抗体800倍稀释,稀释液采用2×PBS,不含BSA、甲醇,建立的标准曲线IC50=1.7ng·mL-1,检测限为0.006ng·mL-1,检测范围0.06～2616.7ng·mL-1,批内变系数9.25%,批间变异系数23.55%。蒸馏水以及稀释10倍后的矿泉水、池塘水、稻田水添加1ng·mL-1和10ng·mL-1的丁草胺,用所建立的方法检测,平均回收率分别为93.27%、158.50%、119.75%、124.51%。本研究为进一步开发丁草胺免疫分析试剂盒奠定了基础。
- 雷红涛冯伟雯沈玉栋杨金易王弘方坚生孙远明
- 关键词：丁草胺酶标抗体除草剂
- 利用SD大鼠抗血清建立瘦肉精ciELISA检测方法的研究
- 2006年
- 以克伦特罗（CL）为竞争半抗原,人工合成的克伦特罗-卵清白蛋白（CL-OVA）为包被抗原,两者与一定量的SD大鼠抗CL血清反应,建立快速定量测定CL含量的间接竞争酶联免疫吸附检测（ciELISA）方法.结果表明,理想的包被抗原质量浓度为3μg/mL,抗CL血清稀释倍数为1∶1.6×10^5.绘制出标准曲线,线性检测范围为4.88～5 000ng/mL,线性回归方程为y=-0.295 2x＋1.160 6,r^2=0.990 2,加标平均回收率为95.45%.该方法敏感性高,特异性强,操作简便,对于研制瘦肉精残留检测试剂盒有重要意义.
- 雷红涛高秀洁薛花黄丽潘科孙远明王弘肖治理
- 关键词：瘦肉精抗血清CIELISA
- 丁草胺人工抗原及抗体制备研究
- 以除草剂丁草胺、巯基丙酸为原料,合成丁草胺半抗原,用氢核磁共振、电喷雾质谱、红外光谱方法进行鉴定;通过活泼酯法将半抗原与载体蛋白偶联制备丁草胺人工抗原, 用紫外光谱法鉴定;免疫动物后,间接竞争ELISA检测鉴定抗体。结果...
- 雷红涛方坚生孙远明王弘沈玉栋黄晓钰冯伟雯
- 关键词：丁草胺半抗原人工抗原抗血清
- 文献传递
- 沙丁胺醇人工抗原合成及鉴定研究被引量：23
- 2006年
- 用琥珀酸酐将沙丁胺醇活化后制备出半抗原沙丁胺醇半琥珀酸,经电喷雾电离质谱(ESI-MS)、红外光谱(IR)和核磁共振(1H-NMR)鉴定合成成功,同时证实琥珀酸酐连结在沙丁胺醇乙醇胺的羟基处,且半抗原以内胺盐形式存在。用混合酸酐、活泼酯方法将沙丁胺醇琥珀半酸分别与牛血清白蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)偶联制备免疫抗原和包被抗原,经紫外吸收法鉴定偶联成功,偶联比分别为12.8:1、23:1。本研究为进一步制备沙丁胺醇抗体奠定了基础。
- 袁利鹏孙远明雷红涛沈玉栋黄晓钰潘科黄杰
- 关键词：沙丁胺醇半抗原
- 盐酸克伦特罗时间分辨荧光免疫检测方法的建立被引量：17
- 2006年
- 采用时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)技术建立快速、高灵敏度的盐酸克伦特罗(CLB)全自动检测方法。以CLB-OVA包被96微孔板作为固相抗原,与游离CLB竞争限量的以Eu3+标记的抗CLB单克隆抗体,建立解离增强模式的荧光免疫分析体系检测CLB。该方法的灵敏度为0.03ng/mL,批内和批间变异系数分别为2.0%和8.9%,平均回收率为105.8%,与沙丁胺醇、莱克多巴胺的交叉反应率分别为0.96%和0.77%,结果表明,用TRFIA法检测CLB,灵敏度高、特异性强、稳定性好,具有良好的应用前景。
- 雷红涛高秀洁潘科黄丽吴英松孙远明
- 关键词：盐酸克伦特罗时间分辨荧光免疫分析法
- 磺胺类药物多克隆抗体的制备与ELISA检测方法的初步研究被引量：7
- 2008年
- 模拟磺胺母核结构合成了3种人工免疫原，免疫新西兰白兔，用间接竞争ELISA方法监测免疫效果。选择抑制效果较好的2组多抗血清建立磺胺类药的ELISA检测方法，绘制竞争标准曲线，并进行添加回收试验。结果表明：A组多克隆抗体对6种常用磺胺药SMD、SMM、SMZ、SDM、SDM、SD的IC10分别为0．010、0．046、0．010、0．100、0．067、0．019μg／mL，低于最高残留限量（0．10μg／mL）；C组多克隆抗体对SMD、SMM、SMZ、SDM、SQ、SD、磺胺氯哒嗪、磺胺氯吡嗪的IC10分别为0．0091、0．051、0．058、0．088、0．020、0．010、0．014、0．011μg／mL，亦低于最高残留限量。2组多克隆抗体对磺胺药的回收率为54．5％～111．8％和54．2％～130．3％，变异系数为3．6％～10．9％和3．7％～5．9％。
- 孙俊颖于洪意黄显会高海杨桂香曾振灵
- 关键词：磺胺类药物多残留检测多克隆抗体ELISA
- 高亲和力的农药克百威单克隆抗体的制备及鉴定被引量：12
- 2007年
- 目的制备高亲和力农药克百威单克隆抗体,建立克百威残留免疫检测方法,控制克百威残留,保障人民身体健康与保护环境。方法合成克百威半抗原BFNB,用人工抗原BFNB-BSA免疫Balb/c小鼠,取脾细胞与骨髓瘤细胞在PEG4000作用下融合,经间接ELISA筛选及显微克隆法亚克隆,分离出阳性细胞株,腹水诱导法及辛酸-硫酸铵沉淀法大量制备及纯化单克隆抗体,间接ELISA法测定抗体滴度及亲和力,间接竞争ELISA法测定抗体特异性。结果获得1株稳定分泌抗克百威单克隆抗体的杂交瘤细胞株5D3,其培养上清和腹水抗体滴度分别为1﹕2.048×103和1:1.024×106,其抗体亚类为IgG1,亲和力常数为2.54×109 L.mol-1,IC50为1.18 ng.ml-1,最低检测限为0.01ng.ml-1。与克百威降解产物呋喃酚的交叉反应率为4.59×10-4%,另外几种结构类似的氨基甲酸酯类农药的交叉反应率均小于3.0×10-4%。结论此抗克百威的单克隆抗体亲合力高、特异性强,为建立克百威简便、快速、特异的免疫检测方法奠定了基础。
- 杨金易吴青王弘潘科雷红涛肖治理郑晓锋孙远明
- 关键词：克百威单克隆抗体
