浙江省自然科学基金(LY12B06010)
- 作品数：9 被引量：24H指数：3
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- 相关领域：轻工技术与工程化学工程生物学更多>>
- 固态发酵豆粕的不同生产工艺及其营养品质比较被引量：6
- 2013年
- 以米曲霉和植物乳杆菌WZ011为发酵菌种,研究了5种不同的固态发酵豆粕生产工艺及其营养品质。以灰分、粗蛋白量、可溶性蛋白量、游离总氨基酸量、氨基酸含量分布、酸溶性蛋白量、小肽含量、还原糖量、氮溶指数、蛋白分子量、脲酶含量、胰蛋白酶抑制因子含量以及体外消化率为指标,对发酵豆粕营养品质进行了比较和分析。结果表明,米曲霉单菌发酵后,高温水解处理对豆粕营养品质的提高有效,但在米曲霉和植物乳杆菌WZ011的双菌串联发酵过程中增加高温水解处理反而不利。在米曲霉有氧发酵后直接接种植物乳杆菌WZ011进行厌氧发酵条件下所得的豆粕营养品质最优,其中的胰蛋白酶抑制因子含量比原豆粕减少了91.8%,并含有小肽8.01%、乳酸4.95%、γ-氨基丁酸0.317 mg/g以及植物乳杆菌活菌数1.93×1010CFU/g。优化的豆粕发酵工艺操作简单且无污染,其产品富含营养。该工艺在饲料加工行业和养殖业具有应用意义。
- 魏春刘茂锋宣磊汪钊
- 关键词：米曲霉植物乳杆菌豆粕营养Γ-氨基丁酸
- Paenibacillus pabuli WZ008的自絮凝及其种子培养基优化对碱性果胶酶发酵的影响被引量：1
- 2013年
- 碱性果胶酶生产菌Paenibacillus pabuli WZ008在种子培养基中生长具有自絮凝特性。研究了种子液菌体形态及其对碱性果胶酶生产的影响,结果表明絮状种子有利于产酶。种子培养基的优化结果表明,添加可溶性淀粉和β-环糊精有利于维持自絮凝形态,同时生物量和发酵产酶水平得到提高;种子培养基初始pH偏碱性对自絮凝形态及产酶水平有显著影响,添加pH缓冲盐K2HPO4进一步稳定了自絮凝形态。种子培养基优化后,在5L罐上碱性果胶酶产量达90U/ml。
- 魏春刘洋周俊利谢丽萍俞国伟
- 关键词：种子培养碱性果胶酶发酵类芽孢杆菌
- 基因拷贝数对重组毕赤酵母的牛乳铁蛋白功能片段表达及细胞存活率的影响被引量：3
- 2021年
- 为了提高牛乳铁蛋白功能片段(bovine lactoferrin functional fragment,BlfFf)产量,研究了基因拷贝数对重组毕赤酵母蛋白表达及酵母存活率的影响。将未折叠蛋白响应(unfolded protein response,UPR)激活因子基因HAC1、信号肽切割酶基因Kex2导入重组毕赤酵母BlfFfG01,并以核糖体rDNA非转录基因间隔区同源整合的方法结合PTVA(posttransformational vector amplification)法扩增重组菌株的基因拷贝数。利用SDS-PAGE、Western Blot、ELISA及流式细胞术分析多拷贝重组菌株发酵产物。分析表明,重组蛋白产量随着BlfFf基因拷贝数的增加而增加,但并非线性递增。HAC1拷贝数为3的BlfFfG12菌株产量相比单拷贝的BlfFfG10提高了150%,但更高的HAC1基因拷贝数降低了重组蛋白产量。流式细胞术分析显示,发酵末细胞存活率随着重组菌株中BlfFf基因拷贝数增加而下降,而HAC1基因拷贝数增加可一定程度上提高细胞存活率。摇瓶中BlfFf产量最高的BlfFfG12菌株(11拷贝BlfFf、3拷贝HAC1),在5 L罐进行高密度发酵,表达量为133.4 mg/L。BlfFf与HAC1基因拷贝数对重组蛋白产量及细胞存活率影响显著,优化其基因拷贝数可有效增加重组蛋白产量。
- 钱晓芬吴涛赵理想孙杰汪钊魏春
- 关键词：牛乳铁蛋白毕赤酵母基因拷贝数
- 植物乳杆菌透性化细胞催化生产低聚半乳糖的工艺优化被引量：4
- 2016年
- 以乳糖为底物,利用含β-半乳糖苷酶的植物乳杆菌透性化细胞催化生产低聚半乳糖(GOS)。在5 L发酵罐上进行了以乳糖为碳源的植物乳杆菌WZ011的厌氧培养,β-半乳糖苷酶产量在发酵14 h时达到最大值5 U/m L。收获的植物乳杆菌菌体用于透性化全细胞催化生产GOS的研究。比较了乙醇、Tween 80、SDS、DMSO、丙酮这五种渗透剂对胞内β-半乳糖苷酶酶活的影响。结果表明以40%乙醇作为渗透剂处理最为有效,β-半乳糖苷酶胞内酶活可达500 U/g(细胞干重DCW)。进一步对40%乙醇渗透处理后整细胞催化生产GOS的工艺条件进行了研究,结果表明乳糖浓度、初始p H、温度和反应时间对GOS合成均有显著影响。在乳糖质量浓度为400 g/L,初始p H为7.0,温度50℃及反应进行10 h的条件下,GOS产量达到最大值32%(质量分数)。
- 魏春孔令民刘利峰
- 关键词：植物乳杆菌Β-半乳糖苷酶低聚半乳糖透性化细胞
- 产结冷胶的黄色素缺陷型抗药性鞘氨醇单胞菌WZ013发酵条件优化被引量：1
- 2013年
- 通过诱变选育得到1株黄色素缺陷型抗药性产结冷胶菌株鞘氨醇单胞菌WZ013,该菌株对氨苄青霉素和利福平有抗性,其发酵液呈白色。与常规菌株相比,利用该菌株生产结冷胶,可省去提取过程中的脱色步骤,降低提取成本。采用Plackett-Burman(PB)分析法和响应面法对该菌株发酵产结冷胶条件进行研究。PB实验结果表明CaCO3、谷氨酸钠、蔗糖和豆饼粉浓度具有显著影响效应;利用最陡爬坡实验逼近最大响应区域后,通过中心组合实验对影响产胶率的主要因素进行分析,建立影响因素与响应值之间的回归方程,最终获得较佳发酵条件:CaCO32.0g/L、谷氨酸钠0.54g/L、蔗糖40.50g/L、豆饼粉5.05g/L。此条件下最高产胶率比优化前提高了33%。在优化条件下进行5L发酵罐放大实验,产胶率为16.70g/L,发酵液黏度10500mPa·s。
- 魏春张栋慧应向贤汪钊
- 关键词：鞘氨醇单胞菌结冷胶响应面法
- 重组牛乳铁蛋白功能片段在毕赤酵母中的表达及高密度发酵被引量：2
- 2019年
- 该研究合成了密码子优化后的牛乳铁蛋白功能片段(bovine lactoferrin functional fragment, BlfFf ),转入毕赤酵母GS115中重组表达并筛选抗性菌株,通过镍亲和层析纯化BlfFf,以Western Blot、液质联用和ELISA对重组蛋白进行鉴定及检测。比较了5 L发酵罐生产中3种不同高密度发酵培养基对BlfFf生产的影响。结果表明:重组转化子正确表达了BlfFf。镍亲和层析中,150 mmol/L咪唑洗脱可得到电泳纯37 kDa的目标条带。在3种高密度发酵培养基中,RDM最优,诱导48 h,菌体湿细胞密度达到297 g/L,BlfFf表达量为38.1 mg/L。
- 魏春任郑吴涛钱晓芬孙杰汪钊
- 关键词：牛乳铁蛋白毕赤酵母高密度发酵分泌表达纯化
- 类芽胞杆菌碱性果胶裂解酶的纯化与酶学性质表征被引量：1
- 2013年
- 从类芽胞杆菌Paenibacillus sp.WZ008的发酵上清液中纯化得到一个高活力碱性果胶裂解酶,经SDS-PAGE电泳估算其亚基相对分子质量为4.5×104。通过对该酶进行酶学性质研究发现:该酶能催化裂解果胶酸、低酯果胶和高酯果胶;酶催化反应最适温度范围为55～60℃,最适pH为9.6,在最适条件下以低酯果胶为底物酶的比酶活达3 021.6 U/mg;Ca2+能增强该酶的活力,而Mn2+,Ba2+和EDTA强烈抑制该酶活力;当没有Ca2+存在时,高度酯化的果胶是该酶的最适底物,在4 mmol/L Ca2+存在时,该酶以果胶酸为底物比酶活最高(25 467 U/mg)。该酶N端序列比对分析发现与类芽胞杆菌Paenibacillus amylolyticus strain 27c64果胶裂解酶高度同源。
- 熊斌应向贤陈丽娜谢丽萍魏春汪钊
- 关键词：酶学性质碱性果胶酶纯化
- 毕赤酵母生产重组β-半乳糖苷酶的指数补料分批发酵研究被引量：3
- 2015年
- 对毕赤酵母重组表达源于植物乳杆菌的β-半乳糖苷酶的5 L罐高密度发酵进行了研究。建立了甲醇指数补料动力学模型,并考察了不同比生长速率对β-半乳糖苷酶生产的影响。四个不同比生长速率(0.010/h,0.029/h,0.043/h和0.058/h)的甲醇指数补料分批发酵结果表明,比生长速率对β-半乳糖苷酶生产具有显著的影响。最大β-半乳糖苷酶产量60 U/m L在比生长速率为0.029/h时获得。采用指数补料分批发酵工艺的β-半乳糖苷酶产量优于常规策略下的产量,该工艺在甲醇诱导后期具有明显生产优势。
- 魏春刘利峰孔令民
- 关键词：毕赤酵母Β-半乳糖苷酶比生长速率
- α-L-鼠李糖苷酶发酵过程放大研究——从5L到30L发酵罐被引量：3
- 2013年
- 以产α-L-鼠李糖苷酶(α-L-1,2-鼠李糖苷酶和α-L-1,6-鼠李糖苷酶)的黑曲霉Aspergillus niger WZ001为考察对象,研究了从5 L发酵罐到30 L发酵罐的通气量和搅拌转速的放大工艺。通气量按三种准则、搅拌转速按两种准则放大。通过实验验证,优选得到最佳放大准则为:通气量按1.5倍空气表观线速度进行放大、搅拌转速按搅拌桨叶尖线速度放大。在该优化的放大工艺条件下,30 L发酵罐中α-L-1,2-鼠李糖苷酶和α-L-1,6-鼠李糖苷酶的产量分别为2 515 U/mL和3 612 U/mL,达到5 L发酵罐的水平。
- 张雪铭马骏魏春应向贤汪钊
- 关键词：黑曲霉搅拌桨
