湖北省自然科学基金(2002AB141)
- 作品数：8 被引量：41H指数：4
- 相关作者：黄利鸣黄益玲邢学森吴琦卫洪昌更多>>
- 相关机构：三峡大学华中科技大学上海中医药大学更多>>
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- HPV16l1基因的克隆及其在真核细胞中的表达
- 2003年
- 克隆并表达人乳头瘤病毒16型(HPV16)晚期基因l1,以期为研制防治宫颈癌的DNA疫苗奠定基础。本实验采用PCR方法从质粒p16L1BN1中获得HPV16l1基因片段,利用基因重组技术,将其克隆至含巨细胞病毒(CMV)启动子的真核表达载体中,核酸序列鉴定HPV16l1基因真核表达质粒构建成功,再用脂质体介导基因转染7721人肝癌细胞。转化阳性细胞经SDS-PAGE显示在分子量大约为55kDa的位置出现一条特异性条带,与HPV16L1分子量大小相符。表达产物经Western blotting分析:能与HPV16L1单克隆抗体特异结合。真核表达质粒pcDNA3-HPV16L1构建成功并能在真核细胞7721中有效表达,为下一步进行动物DNA免疫实验奠定了基础。
- 吴琦黄利鸣卫洪昌
- 关键词：HPVL6基因克隆真核细胞L1基因DNA疫苗
- Ras相关结构域家族蛋白1A基因与肿瘤被引量：5
- 2004年
- 邢学森黄利鸣马向东
- 关键词：人类肿瘤RAS基因蛋白编码基因家族细胞生长
- 人乳头瘤病毒16型L1基因真核表达质粒的构建及鉴定
- 2003年
- 吴琦黄利鸣卫洪昌
- 关键词：人乳头瘤病毒16型真核表达质粒
- 天花粉蛋白诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡的分子机制研究被引量：16
- 2007年
- 目的利用基因芯片技术研究天花粉蛋白对人宫颈癌HeLa细胞基因表达谱的影响,以深入探讨其作用的分子机制。方法提取药物处理前后HeLa细胞总RNA并逆转录成cDNA,在获得的cDNA上分别标记CY3和CY5两种荧光物质,然后与BiostarH-Ⅰ表达谱芯片杂交,扫描后对获得的数据用GenePixPro3·0软件分析。结果两组间存在差异性表达基因78条,其中与细胞凋亡密切相关的NOP56、TN-FSF10、CASP9、DFFB等62条基因表达上调,与细胞黏附及细胞间相互作用相关的COL9A3、MGST3、LGALS3BP等16条基因表达下调。结论天花粉蛋白可以引起HeLa细胞中多个基因的表达改变,基因芯片技术进一步揭示了其诱导HeLa细胞凋亡的作用机制。
- 黄益玲胡火军黄利鸣李红军
- 关键词：天花粉蛋白HELA细胞基因表达谱宫颈癌
- 叶酸代谢关键酶基因多态性与唐氏综合征发生关系的研究被引量：4
- 2006年
- 目的研究叶酸代谢中关键酶亚甲基四氢叶酸还原酶基因(MTHFR C677T)及蛋氨酸合成酶还原酶基因(MTRRA66G)多态性与唐氏综合征发生的关系。方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)法对32例唐氏综合征患儿母亲及70例未生育该种患儿的女性MTHFR C677T、MTRR A66G进行基因分析。比较各组基因型和等位基因频率分布有无差异。结果MTHFR C677T突变型等位基因(T)频率,MTRR A66G突变型等位基因(G)频率在实验组和对照组中有显著性差异,CC、TT、GG基因型频率分布差异有显著性意义(P<0.05)。结论MTHFR C677T、T677T基因型、MTRR G66G基因型增加了唐氏综合征的发生风险,MTHFR C677C基因型可能是降低唐氏综合征发生的保护性因素。
- 冯玲王少帅乔福元吕娟娟
- 关键词：唐氏综合征叶酸
- p16基因甲基化与人类肿瘤
- 2007年
- 王璐黄利鸣
- 关键词：P16基因甲基化人类肿瘤P16基因失活肿瘤关系负向调节诱导凋亡
- 改良的甲基化特异PCR法在人宫颈癌Hela细胞检测中的应用被引量：7
- 2006年
- 目的介绍一种CpG岛甲基化分析方法,即甲基化特异PCR法(methylation-specific PCR,MSP)以及对该方法的改良。方法用亚硫酸氢盐修饰被测DNA后,进行甲基化与非甲基化特异PCR的扩增,并对MSP法进行改良。应用该法分析人宫颈癌Hela细胞中RASSF1A、p16基因5'CpG岛甲基化状态。结果发现人宫颈癌Hela细胞中有RASSF1A、p16基因的甲基化,改良后的MSP更容易获得较好的效果。结论MSP法是一种较为简便、灵敏和具特异性的甲基化检测方法,改良后该方法更加简便可行。
- 邢学森黄利鸣黄益玲陈梅花石新兰
- 关键词：RASSF1AP16人宫颈癌HELA细胞
- p16基因甲基化与HeLa细胞凋亡相关性的研究被引量：10
- 2005年
- 目的:研究天花粉蛋白诱导HeLa细胞凋亡过程中p16基因甲基化的变化情况,探讨细胞凋亡和抑癌基因甲基化的相关性,寻找新的去甲基化药物。方法:应用MTT法检测天花粉蛋白对HeLa细胞增殖抑制的影响,流式细胞仪检测天花粉蛋白对HeLa细胞的诱导凋亡作用,甲基化特异PCR(Methylation-specificPCR,MSP)检测HeLa细胞凋亡过程中p16基因启动子区CpG岛的甲基化状况。结果:在HeLa细胞中p16基因启动子区CpG岛异常甲基化,经天花粉蛋白处理后,HeLa细胞生长明显受抑,流式细胞仪直方图出现明显的亚二倍体峰,p16基因启动子区CpG岛无异常甲基化表现。结论:天花粉蛋白在诱导HeLa细胞凋亡过程中对p16基因有明显的去甲基化作用,可能是新型的去甲基化药物,抑癌基因甲基化失活与肿瘤细胞凋亡之间可能有某些密切的相关性。
- 黄利鸣邢学森黄益玲
- 关键词：天花粉蛋白P16基因基因甲基化细胞凋亡
