浙江省科技计划项目(2008C24G2030004)
- 作品数：2 被引量：13H指数：2
- 相关作者：胡海涛杨玲吴满成孙娜余有见更多>>
- 相关机构：浙江师范大学更多>>
- 发文基金：浙江省科技计划项目浙江省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 超表达牛奶子EutPDS提高番茄果实番茄红素含量被引量：4
- 2017年
- 【目的】牛奶子果实中富含番茄红素,八氢番茄红素脱氢酶(PDS)是番茄红素生物合成上游的重要酶。特异性超表达牛奶子Eut PDS基因(Gen Bank登录号:GQ254067),以期提高番茄果实中的番茄红素含量。【方法】通过RT-PCR方法从牛奶子果实中分离EutPDS基因cDNA及基因组全长,Southern杂交分析基因的拷贝数,专用软件分析此基因及蛋白结构。采用番茄2A11启动子构建果实特异性超表达载体,转化根瘤农杆菌GV3101后,借助农杆菌介导的叶盘法转化至‘中蔬四号’番茄。半定量RT-PCR检测转基因植株果实EutPDS基因的表达,高效液相色谱仪、实时定量PCR分别用于分析转基因番茄果实主要类胡萝卜素组分含量和内源类胡萝卜素代谢相关基因表达的变化。【结果】从牛奶子中克隆的EutPDS基因长度为1 920 bp,含有1 749 bp ORF。其基因组序列无内含子,单拷贝。EutPDS编码1个582个氨基酸的蛋白,该蛋白与其他植物PDS有很高的同源性,具有典型的二核苷酸结合域、类胡萝卜素结合域。采用农杆菌介导方法转化番茄叶盘,PCR检测,潮霉素筛选,成功获得了2个EutPDS转基因番茄株系,其果实颜色较对照更红。半定量分析显示外源EutPDS基因在转基因番茄果实中超表达,实时定量PCR分析表明番茄红素生物合成上游2个内源基因Sl PSY和Sl ZDS受影响显著上调,同时1个下游基因Sl LCY-e的表达则显著下调,使得转基因番茄果实中番茄红素含量为野生型的2倍,但β-胡萝卜素含量无显著变化。【结论】在番茄果实中特异性超表达牛奶子EutPDS基因可有效促进番茄果实中番茄红素的合成和积累。
- 程珍霞胡海涛杨莉王长春郭卫东杨玲
- 关键词：番茄番茄红素
- 牛奶子果实中蛋白质的提取和双向电泳分析方法的改良被引量：9
- 2009年
- 比较2种提取牛奶子果实中总蛋白的方法以及用SDS-PAGE分析的结果表明,用酚法提取蛋白时,适当延长第2次平衡时间,并及时更换平衡缓冲液Ⅱ,可获得高分辨率的总蛋白图谱。这种改良了的方法解决了牛奶子果实中富含的色素和多酚等化合物对双向电泳(2-DE)的干扰问题,重复性好,适用于果实中蛋白的2-DE分析和尔后的技术操作。
- 吴满成胡海涛余有见孙娜杨玲
- 关键词：果实蛋白质双向电泳
