国家自然科学基金(21152002)
- 作品数：2 被引量：4H指数：2
- 相关作者：权春善范圣第刘春光赵朋超王剑锋更多>>
- 相关机构：大连民族学院中国科学院中国科学院大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中央高校基本科研业务费专项资金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 重组蛋白AgrC的表达纯化及人工超分子体系的构建被引量：2
- 2012年
- 目的:克隆表达金黄色葡萄球菌agr系统的受体蛋白AgrC,构建人工超分子体系。方法:构建基因工程菌E.coli TOP10-pBAD-AgrC,对诱导条件进行优化,对蛋白的提取方法进行分析优化。表达产物使用Western blot鉴定,His-tag镍柱亲和层析纯化。使用肽脂质N+C5Gly2C16为膜材料制备囊泡作为载体,将纯化后的蛋白在囊泡上镶嵌。结果:构建的基因工程菌在18℃,0.002%的阿拉伯糖浓度下具有最高的表达效率,以内膜形式存在的AgrC蛋白在表面活性剂BDH中溶解效率最佳。结论:成功诱导表达并纯化了重组蛋白AgrC,成功利用其构建了人工超分子体系。
- 刘春光权春善王剑锋于桂梅范圣第
- 关键词：金黄色葡萄球菌囊泡
- 大肠杆菌细胞抽提物制备方案的简化与优化被引量：2
- 2013年
- 无细胞蛋白表达系统是一种将目的蛋白在体外进行表达的新技术和新方法,已广泛应用到蛋白质组学、蛋白质结构和功能等领域的研究中。在无细胞蛋白表达系统中,细胞抽提物的制备是关键因素之一。通过对大肠杆菌细胞抽提物制备过程中离心速度、预孵化和透析等参数的考察,利用绿色荧光蛋白作为报告蛋白,可以得到一个细胞抽提物制备的简化方案。采用相对低的转速(12 000×g,10 min),简易空孵化即可制备出活性高的细胞抽提物,用于无细胞体系蛋白表达,其表达的绿色荧光蛋白产量为209μg/mL。与传统的大肠杆菌细胞抽提物S30相比较,新方案将使时间与成本节省62%,产量是传统方法的2.6倍,使无细胞蛋白表达技术的操作快速、高通量的优势更加明显。
- 郭新娟权春善赵朋超王丽娜范圣第
- 关键词：蛋白质表达大肠杆菌体外表达
