天津市应用基础与前沿技术研究计划(09JCZJC17500)
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
- 相关作者：章广玲颜宇琦王梅梅熊亚南袁丽杰更多>>
- 相关机构：河北联合大学华北煤炭医学院天津医科大学更多>>
- 发文基金：天津市应用基础与前沿技术研究计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- miR-210过表达载体的构建及Northern鉴定被引量：1
- 2012年
- ①目的构建miR-210的过表达载体,为进一步研究miR-210的功能奠定良好的实验基础。②方法首先设计并合成miR-210前体序列的PCR引物,以HEK293细胞的基因组为模板,PCR扩增包含有miR-210前体的序列,大小为440bp;PCR产物经过EcoRI和BglⅡ酶切后,与线性化的pcDNA3.1(+)载体连接后,转化大肠杆菌,扩增、纯化获得所需质粒,以琼脂糖凝胶电泳、酶切鉴定以及基因测序鉴定其分子质量和插入片段的序列;构建的质粒转染HEK293细胞48小时后,提取小RNA,Northern blot检测miR-210的表达水平。③结果纯化质粒的相对分子质量为5.9kb,酶切鉴定结果符合目的条带(440bp)大小,插入的寡核苷酸序列NCBI Genbank提供序列完全相符,Northern Blot检测到的miR-210成熟体大小为21碱基大小。④结论成功构建了miR-210的过表达质粒pcDNA3.1(+)/pri-miR-210,为进一步研究miR-210的功能奠定良好的实验基础。
- 颜宇琦王梅梅熊亚南章广玲
- 关键词：质粒MIR-210基因
- 带有HA标签的HBc蛋白真核表达质粒的构建及其在HEK293细胞中的表达
- 2010年
- 目的构建带有流感病毒血凝素9钛表位标签(HA标签)的乙型肝炎病毒(HBV)核心蛋白(HBc)的表达质粒,为进一步研究HBc蛋白基因的功能奠定实验基础。方法设计并合成扩增HBc蛋白全长的PCR引物,以野生型的HBV质粒pDolTHBV-1为模板,PCR扩增全长的HBc蛋白,大小为563 bp;PCR产物经过EcoRI和XholI酶切后,与线性化的pcDNA3/HA载体连接后转化大肠杆菌,扩增、纯化获得所需质粒,以琼脂糖凝胶电泳、酶切鉴定以及基因测序鉴定其分子质量和插入片段的序列;构建的质粒转染HEK293细胞48 h后,RIPA裂解细胞,West-ern blot检测HBc蛋白表达。结果纯化质粒的相对分子质量为5.9 kb,酶切鉴定结果符合目的条带(563 bp)大小,插入的寡核苷酸序列与野生型HBV基因序列完全相符,表达的融合蛋白大小为28 kDa。结论成功构建了带有HA标签的HBc蛋白的真核表达质粒pcDNA3/HA-HBc蛋白,为进一步研究HBc蛋白的功能奠定了良好的实验基础。
- 章广玲袁丽杰王芳汤华张银张淑杰
- 关键词：质粒基因
