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广东省科技计划工业攻关项目(20118061300035)
作品数:
1
被引量:4
H指数:1
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匡斌
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2013
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VEGF165慢病毒载体的构建及其在人骨髓间充质干细胞中的表达
被引量:4
2013年
目的构建VEGF165慢病毒包装质粒,通过慢病毒介导VEGFl65感染人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)并验证其表达情况,为高表达VEGF的HBMSCs应用于血管再生和治疗临床创面愈合提供研究基础。方法2012年3月至2013年3月,采用聚合酶链式反应(PCR)从提取的人体组织总RNA逆转录扩增VEGFl65,经双酶切后与pLVX—IRES—ZsGreenl真核载体连接,在脂质体介导下将重组质粒转染293T细胞,包装产生的病毒液感染HBMSCs,荧光显微镜下观察VEGF165荧光融合蛋白表达,采用实时荧光定量PCR(qRT.PCR)检测VEGFl65mRNA的表达。对结果用SPSS13.0统计软件进行分析,P〈0.05为差异有统计学意义。结果双酶切产物于576bp处出现特异性条带,测序结果与预期符合,表明所构建重组质粒pLVX—IRES—ZsGreenl+VEGF165结构正确。构建质粒转染293T细胞并产生高滴度含目的基因VEGF165的慢病毒,感染hBMSCs后,细胞在荧光显微镜下可见强绿色荧光蛋白表达,qRT—PCR结果显示慢病毒感染组VEGFl65mRNA表达水平为32.27±1.05,显著高于对照组(P〈0.05)。结论成功构建VEGF165慢病毒包装质粒,并感染hBMSC,为其基因治疗应用于临床提供了依据。
赵成利
梁瑜
谢文斌
张立
王冕
匡斌
邓国三
关键词:
血管内皮细胞生长因子
慢病毒
人骨髓间充质干细胞
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