国家自然科学基金(81130074) 作品数:17 被引量:38 H指数:2 相关作者: 程涛 袁卫平 胡甜园 张宇 鞠振宇 更多>> 相关机构: 中国医学科学院 北京协和医学院 杭州师范大学 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 国家重点基础研究发展计划 科技部基础性研究重大项目 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 更多>>
组蛋白甲基转移酶在造血干细胞调控和白血病发生中的作用 2012年 组蛋白修饰是生物表观遗传中重要的调控机制之一,由组蛋白甲基转移酶参与的组蛋白甲基化不仅对造血干细胞的自我更新和维持起关键作用,而且可调节众多与白血病发生和发展有关的蛋白表达及活性,从而导致不同类型白血病的发生并影响其预后。应用组蛋白甲基转移酶抑制剂调控组蛋白甲基化水平,能够诱导肿瘤细胞凋亡从而抑制白血病的发生与发展,因此组蛋白甲基转移酶抑制剂的研究受到人们的广泛关注。我们从组蛋白甲基转移酶在造血干细胞调控及白血病发生中的作用以及组蛋白甲基转移酶抑制剂在白血病治疗中的作用等方面的研究进展综述如下。 王晓娟 袁卫平 程涛关键词:组蛋白甲基转移酶 细胞调控 白血病 甲基转移酶抑制剂 组蛋白修饰 AKT的功能及其对造血系统和白血病的调节 被引量:2 2014年 磷脂酰肌醇.3激酶一丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(P13K-AKT)信号通路在细胞的多种生理过程中发挥调节作用。 胡甜园 程涛 袁卫平关键词:造血系统 苏氨酸蛋白激酶 白血病 AKT 磷脂酰肌醇 生理过程 Current understanding of the mechanisms of stem cell aging 2016年 Remarkable progress has taken place in the research of stem cells during the past 30 years.General perceptions,experimental and clinical evidences pinpoint the fact that functional decline of tissue often coincides with aging-related diseases.Stem cell aging plays a fundamental role in the dysregulation of tissue function,maintenance,and repairing.This review specifically focuses on the current findings and emerging concepts of hematopoietic stem cell aging and its mechanisms. ZHU XuDong LI TangLiang JU ZhenYu关键词:AGING HEMATOPOIETIC MITOCHONDRIA METABOLISM EPIGENETIC PI3K/AKT/mTOR信号通路在造血干细胞中作用的研究进展 被引量:19 2013年 PI3K/AKT/mTOR信号通路调节细胞生长、增殖和存活等生命过程,在多种细胞生命过程中起着关键的作用,在造血干细胞中同样也扮演着重要的角色。过度激活PI3K/AKT/mTOR信号通路会造成造血干细胞的耗竭,而抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路,则B细胞的分化会受到显著的抑制。本文系统介绍PI3K/AKT/mTOR信号通路中关键节点的蛋白,包括PI3K,AKT,mTOR,FoxO和GSK-3等在造血干细胞中作用的最新研究进展。 张英驰 程涛 袁卫平关键词:PI3K AKR 造血干细胞 自我更新 定向分化 抑制Larp4b表达不影响小鼠Lin^-造血细胞集落形成能力 2013年 Larp4b是人类LARP家族中的一员,为广谱翻译因子,可结合RNA并促进mRNA的翻译。前期本实验室的研究工作提示白血病患者存在Larp4b基因表达变化。本研究检测Larp4b基因在造血各系细胞中的表达量,敲降Larp4b表达对Lin-造血细胞生物行为的影响。利用RT-PCR检测Larp4b基因在造血各系细胞中的表达,用病毒上清感染Lin-细胞,分选EGFP+细胞,PI染色法检测细胞周期,AnnexinV-PE/7-AAD双染法检测细胞凋亡,并进行集落形成实验(colony forming cell assay,CFC)。结果表明:Larp4b基因在造血各系细胞中表达不同,Larp4b基因在粒系和巨噬祖细胞(GMP)以及髓细胞(M)的表达较高,在T淋巴细胞中表达明显低,抑制Larp4b表达不影响Lin-造血细胞体外集落形成能力,不影响Lin-造血细胞的细胞周期和凋亡。结论:Larp4b基因在髓系细胞中表达较高。抑制Larp4b表达不影响Lin-造血细胞集落形成能力,不影响Lin-造血细胞的增殖,这为后续Larp4b体内实验研究奠定了基础。 王晓娟 庞雅坤 程辉 董芳 梁昊岳 张英驰 汪晓敏 许静 程涛 袁卫平关键词:造血干 祖细胞 造血细胞 慢病毒载体 Rheb过表达在白血病细胞株HL-60和K562中的作用 被引量:1 2013年 mTOR信号通路是细胞内重要的生命活动枢纽,它通过抑制细胞凋亡,促进细胞增殖来调控细胞生命活动。Rheb可以激活mTOR信号通路,进而参与多种肿瘤的发生发展。本研究以髓系白血病细胞株为研究对象,探讨Rheb在HL-60和K562中的作用及相关机制。本研究利用逆转录病毒技术使髓系白血病细胞株HL-60和K562过表达Rheb;利用Western blot和Real-Time PCR分别检测HL-60和K562细胞中Rheb的蛋白表达水平及mRNA表达水平;利用CCK-8法检测细胞活力;利用Annexin V-PE和7-AAD双染检测细胞凋亡。结果表明:成功构建了Rheb过表达的HL-60和K562细胞株,并发现Rheb过表达可以促进细胞生长;进一步研究发现,Rheb过表达加快细胞进入G2/M期(P<0.01),但不影响细胞凋亡。结论:Rheb通过加快细胞周期进程促进HL-60和K562细胞增殖。 徐乔竹 汪晓敏 王放放 高亚男 张英驰 鞠振宇 程涛 袁卫平 刘汉芝关键词:RHEB AML HL-60 K562 Puma表达下调对人脐血CD34+造血细胞抗放射作用的初步研究 被引量:1 2014年 Puma属于BCL-2家族中BH3-only亚家族,动物和细胞研究发现其通过p53依赖和非依赖途径诱导细胞凋亡,并具有抗放射保护不增加肿瘤发生率的作用。本研究检测Puma基因敲降后对人脐血CD34+造血干祖细胞生物学功能的影响。应用RT-PCR、Western Blot检测Puma基因在辐射刺激条件下的表达,采用慢病毒感染人脐血CD34+细胞分选GFP+细胞,Annexin V-PE/7-AAD双染流式细胞术检测细胞凋亡,Ki67染色检测细胞周期,CCK-8、Brdu标记法检测细胞增殖能力,并进行集落形成实验(colony formig cell assay,CFC)。结果表明:Puma基因表达量随着射线强度的增加而增高,Puma基因表达下调抑制造血祖细胞体外集落形成能力和体外增殖能力。在辐射刺激条件下,抑制Puma基因表达可以减少人脐血CD34+细胞凋亡,维持细胞周期于G0期。结论:人脐血CD34+造血干细胞中Puma基因敲降具有一定的抗辐射作用,维持细胞于静息状态。 赵蕾 张鸿雁 庞雅坤 顾海慧 许静 袁卫平 程涛关键词:PUMA基因 造血干 祖细胞 脐血CD34+细胞 CD48表达可作为区分造血干细胞分裂方式的活性标志 被引量:1 2014年 造血干细胞在细胞分裂时具有维持自我更新和产生定向分化的能力,其依赖于三种细胞分裂方式,一个干细胞产生两个新的干细胞(对称的更新分裂)、两个分化细胞(对称的分化分裂)或者一个干细胞和一个分化细胞(不对称分裂)。本研究旨在探索一种高效、稳定的区分造血干细胞分裂方式的方法。前期研究表明,Numb蛋白的分布情况可以作为许多细胞辨别分裂方式的标志,本研究利用免疫荧光技术检测Numb蛋白在小鼠分裂期CD48-CD150+LSK细胞中的分布情况,探索Numb蛋白与中心体的关系。由于CD48表达阳性标志着细胞失去了骨髓重建能力,因此本研究把CD48的表达作为区分造血干细胞自我更新或定向分化的一个活性标志。从小鼠全骨髓细胞中分选出CD48-CD150+LSK细胞,培养体系中加入自行制备的AF 488-conjugated anti-CD48抗体,培养3 d后共聚焦荧光显微镜观察及流式细胞分析是否存在AF488+细胞及其所占比例,然后二次分选AF488+和AF488-细胞进行细胞集落形成实验(colony forming cell assay,CFC)与细胞增殖能力比较。结果表明:Numb蛋白在处于分裂期的CD48-CD150+LSK细胞中对称或不对称分布在细胞分裂平面两侧,这提示Numb蛋白染色可以作为一种区分造血干细胞分裂方式的方法。此外,CD48-CD150+LSK细胞在含有自行制备的AF488-conjugated anti-CD48抗体的培养体系中培养3 d后产生约40%AF488+细胞,共聚焦荧光显微镜统计的阳性细胞比例与流式细胞分析检测结果一致。二次分选AF488+和AF488-细胞,AF488+细胞群的集落形成能力显著高于AF488-细胞群(P<0.05),AF488-细胞群的增殖能力显著高于AF488+细胞群(P<0.05)。结论:CD48表达作为细胞干性丢失的活性标志,可区分造血干细胞的分裂方式。该方法与Numb蛋白染色方法相比,具有用于活细胞的优势,它为后续的细胞培养与细胞移植等研究工作提供了更大的便利。 杨鑫 张宇 彭路芸 庞雅坤 董芳 纪庆 许静 程涛 袁卫平 高瀛岱关键词:造血干细胞 细胞分裂 mTOR信号通路在造血及其它系统衰老中作用的研究进展 被引量:4 2013年 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)是一种丝/苏氨酸蛋白激酶,在调节细胞的生长、增殖和存活中起着重要的作用。mTOR复合体调控mRNA的转录、核糖体的合成及代谢相关基因的表达,通过磷酸化其下游的靶蛋白如S6蛋白激酶和4E-BP1等来调节细胞的活动。近年来,mTOR分子及其相关信号通路在衰老调控中所起的作用渐渐被人们所认识。对mTOR信号通路在衰老中的生物学功能和调节机制的研究,不仅可以深入了解细胞自我更新和分化的机制,而且对衰老及其相关疾病的治疗、预防及寻找潜在的治疗靶点与药物具有重要意义。本文主要介绍mTOR信号通路在造血系统及其他系统衰老中研究的最新进展。 华春兰 程涛 袁卫平关键词:MTOR信号通路 造血系统 衰老 细胞周期抑制剂PD0332991对小鼠造血干/祖细胞生物学活性的影响 被引量:1 2014年 目的探讨细胞周期抑制剂PD0332991(C24H29N702)对造血干/祖细胞(HSPC)生物学行为的影响。方法利用多抗体标记,再分别用Hoechst 33342染色和FITC-AnnexinW7-AAD标记流式细胞术检测PD0332991作用前后小鼠骨髓造血干细胞(HSC,Lin-C-kit+Sca-1+表型细胞)及造血祖细胞(HPc,Lin-C-kit’细胞)的周期分布及细胞凋亡率;利用实时荧光定量PCR法分析PD0332991作用后HSC细胞周期相关基因、凋亡相关基因及自我更新相关基因mRNA表达水平;利用极限稀释培养法检测PD0332991作用前后HSC自我扩增水平的变化;用半固体培养法观察PD0332991对小鼠正常HPC集落形成能力的影响。结果与未处理组相比,PD0332991处理后小鼠骨髓HSC的G。期细胞明显增多,由76.3%增加至89.5%(P〈0.05),S、GYM期明显减少,由20.5%降低至7.3%(P〈0.05);HPC的G。期细胞也明显增多,由74%增加至87.4%(P〈0.05),S、G:/M期细胞明显减少,由25.4%降低至11.6%(P〈0.05)。PD033299处理的小鼠骨髓HSPC早期凋亡率均为7%左右,与对照组相比差异无统计学意义(P〉0.05)。小鼠骨髓HSC经PD0332991处理后,细胞周期相关基因CDKl、CyclinA2、CyclinF、p18、p19、p27表达水平与对照组相比分别降低了58.8%、66.4%、56.3%、62.2%、32.3%和36.5%,CDK7表达上调27.3%(P〈0.05),凋亡相关基因及自我扩增相关基因表达均无明显变化。与对照组相比,PD0332991处理过的小鼠骨髓HSC与自我扩增相关的鹅卵石样区域形成细胞出现频率明显下降、HPC的造血集落形成能力下降。结论PD0332991可明显阻滞正常小鼠HSPC的细胞周期进程,抑制其自我扩增,但对其凋亡没有明显影响。 纪庆 祁瑞哲 张丽艳 张宇 许静 袁卫平 程涛 高瀛岱关键词:造血干细胞 细胞周期抑制剂 细胞周期